雷帕霉素通过调控NLRP3炎症小体抑制成纤维样滑膜细胞增殖

目的探讨自噬促进剂雷帕霉素(RAPA)通过调控含核苷酸寡聚化结构域样受体(NLR)家族PYRIN域蛋白3(NLRP3)炎症小体对肿瘤坏死因子ɑ(TNF-α)诱导成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖的影响。方法培养FLS并分为3组:对照组、TNF-α组、RAPA组。采用CCK-8法检测细胞活力。采用免疫荧光法和透射电镜(TEM)检测FLS细胞自噬情况。采用Western blotting法检测NLRP3炎症小体关键蛋白NLRP3、caspase-1及自噬标志性蛋白LC3-II/LC3-I、Beclin-1、P62的表达。结果与对照组比较,TNF-α组FLS细胞明显增殖(P<0.05),并激活NLRP3炎症小体(P<0.01)。与TNF-α组比较,RAPA组FLS增殖明显抑制(P<0.05),LC3-II和Beclin1表达水平明显上调(P<0.01),P62、NLRP3和caspase-1的表达水平均降低(P<0.05)。结论RAPA可以抑制TNF-α诱导的FLS增殖,其机制可能与提高自噬、抑制NLRP3炎症小体的激活有关。

润肺膏对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的保护作用研究

目的:研究润肺膏(Run Fei Cr eam,RFC)对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤小鼠的作用,并探索其可能的机制。方法:将40只小鼠随机分为四组,每组10只,分别为对照组、模型组、润肺膏组(3.9 g/kg)和地塞米松组(2 mg/kg)。按10 mL/kg的体积灌胃给药,1次/天,连续给药7天,末次给药1 h后经气管滴注LPS(5 mg/kg),制备内毒素性小鼠急性肺损伤模型。HE染色观察肺组织的病理学变化;ELISA法检测肺泡灌洗液(BALF)中及血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;Western blot法检测肺组织中NLRP3、caspase-1、ASC、GAPDH、IκBα、p-IκBα、p65和p-p65蛋白的表达水平。结果:与对照组相比,模型组小鼠BALF中及血清中IL-1β、TNF-α的释放量显著升高(P<0.01);气管腔与肺泡中有明显的炎性细胞浸润,并且肺泡壁出现弥散性增厚现象;肺组织中p-IκBα、p-p65、NLRP3蛋白表达水平显著提高(P<0.01)。与模型组相比,润肺膏组小鼠BALF中及血清中IL-1β、TNF-α的释放量明显降低(P<0.01);肺组织结构的完整程度较高,炎性细胞浸润不明显;且能显著降低p-IκBα、p-p65、NLRP3蛋白的表达水平(P<0.01)。结论:润肺膏对LPS诱导急性肺损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能与减轻肺部组织病变,抑制IL-1β、TNF-α等炎症因子的释放,下调NF-κB/NLRP3信号通路有关。

娑罗子提取物对阿司匹林致胃溃疡作用的研究

目的研究娑罗子提取物(SAE)对阿司匹林所致胃溃疡的保护作用,为阿司匹林安全用药提供依据。方法用阿司匹林制备溃疡模型,小鼠连续5天灌胃给予SAE(3.5、7、14mg/kg)或在制备溃疡模型前、后不同时间点灌胃给予SAE(7mg/kg),于显微镜下观察胃溃疡指数。结果与模型组比较,SAE(7、14mg/kg)显著降低溃疡指数(P<0.05)。制备溃疡模型同时给予SAE(7mg/kg)可以明显降低溃疡指数。结论娑罗子提取物对阿司匹林所致胃溃疡有预防作用。

LAIR-1受体在LPS诱导RAW264.7细胞炎症反应中的表达

目的研究LAIR-1受体在LPS诱导RAW264.7细胞发生炎症反应中表达规律的变化。方法以LPS分别刺激RAW264.7细胞6、12、24和48 h。采用Greiss法测定NO的含量,ELISA法测定TNF-α、IL-6的含量,Western blot法检测LAIR-1受体的表达。NF-κB抑制剂PDTC(50μmol/L)预处理1 h后,检测LPS刺激24 h后LAIR-1受体的表达。结果随着LPS刺激RAW264.7细胞时间的延长,NO、TNF-α和IL-6分泌量显著增加,LAIR-1受体表达量逐渐降低;经过PDTC预处理后,与LPS处理组比较,LAIR-1受体表达量上调。结论 LAIR-1受体在LPS诱导RAW264.7细胞发生炎症反应过程中表达量逐渐下调,抑制NF-κB通路其表达量上调,LAIR-1受体可能与炎症反应密切相关。

基于T_(>MIC)计算模型评价亚胺培南的临床方案及疗效

目的:利用T_(>MIC)计算模型评价不同T_(>MIC)下亚胺培南的临床方案及疗效。方法:采用回顾性方法,选取2015年10月-2017年6月在中日友好医院住院期间行亚胺培南血药浓度检测的患者107例,记录其基本信息和用药情况,运用SPSS 19.0软件按T_(>MIC)计算模型计算不同给药方案下不同患者亚胺培南的T_(>MIC),依据不同T_(>MIC)分为≤40%组、>40%~70%组、>70%~100%组和>100%组,比较各组患者的亚胺培南用药持续时间、降钙素原(PCT)降低百分比。结果:纳入研究患者97例,其中≤40%组18例、>40%~70%组35例、>70%~100%组34例、>100%组10例。4组患者基线水平差异无统计学意义(P>0.05),其亚胺培南用药持续时间分别为(10.7±2.69)、(8.71±3.48)、(8.50±4.21)、(9.00±4.87)d,PCT降低百分比分别为(37.00±28.83)%、(53.43±21.66)%、(58.67±16.53)%、(47.25±24.71)%。结论:临床使用亚胺培南进行抗感染治疗时调整治疗方案使其T_(>MIC)在>70%~100%范围内能获得较好的抗菌效果。

核因子-κB是癌症治疗的好靶点吗?希望和缺陷

核因子κB(NF-κB)转录因子在许多生理过程中,如固有及获得性免疫应答、细胞增殖、细胞死亡和炎症,都起重要作用。目前已很清楚,NF-κB和控制其活性的信号通路的调节异常与癌症的发生发展以及患者对化疗和放疗产生耐受性有关。本文综述了NF-κB与癌症的关系、以NF-κB为靶点的癌症治疗潜能和益处以及这种治疗可能引发的并发症和缺陷。

杏仁核脑区硫化氢对创伤后应激障碍模型大鼠抑郁样行为的影响

目的:探讨创伤后应激障碍(posttraumatic stress disorder,PTSD)大鼠抑郁样行为改变及杏仁核内胱硫醚β-合成酶(cystathionineβ-synthase,CBS)/硫化氢(hydrogen sulfide,H_2S)水平的变化,并研究补充H_2S对大鼠抑郁样行为的作用及机制。方法:应用连续单一应激方案制备PTSD动物模型,用强迫游泳实验和糖水偏好实验检测大鼠抑郁样行为,用Western blot技术和亚甲基蓝法检测杏仁核CBS/H_2S体系含量,用整体细胞外电生理方法记录杏仁核神经元放电情况。结果:与正常对照组比较,PTSD组大鼠强迫游泳不动时间显著延长(P<0.01),糖水偏好率显著降低(P<0.01);杏仁核脑区的CBS/H_2S体系含量显著降低(P<0.01)。与PTSD组比较,PTSD+硫氢化钠组大鼠强迫游泳不动时间显著减少(P<0.01),糖水偏好率显著升高(P<0.01)。微量压力注射L-半胱氨酸使杏仁核神经元自发放电频率显著升高(P<0.01)。结论:PTSD大鼠通过抑制杏仁核CBS/H_2S体系导致抑郁样行为加重。H_2S拮抗PTSD大鼠抑郁样行为的机制可能与其增加杏仁核神经元放电频率和兴奋性有关。

混合教学模式下药理学对分课堂教学实践与思考

对分课堂打破传统填鸭式教学模式,强调以学生为中心,符合现代教育理念,收到较好教学效果。线上教学的快速发展,为对分课堂教学注入活力。本研究从课前准备、课堂教学组织以及教学评价3个方面进行探索。问卷调查显示,学生对混合教学模式下的对分课堂教学予以充分肯定,,认为该教学模式有助于提高独立思考、解决问题及归纳总结能力。

大孔吸附树脂纯化紫菀总黄酮工艺

目的探讨紫菀总黄酮的大孔吸附树脂纯化工艺。方法通过静态吸附解吸实验考察总黄酮在D101-I、HPD-300、HPD-450、HPD-600、NKA-9、HPD-826型大孔吸附树脂上的吸附和解吸能力,筛选最佳树脂,考察其吸附动力学行为,绘制吸附等温线。然后,通过动态吸附解吸实验考察最佳分离工艺。结果 HPD-300树脂具有最强的吸附和解吸能力。总黄酮吸附动力学行为符合准二级动力学模型,吸附等温数据符合Langmuir、Freundlich模型。最佳条件为上样质量浓度60 mg/mL,上样体积7 BV,先用5 BV蒸馏水冲洗杂质,再用5 BV50%乙醇洗脱,纯化后总黄酮纯度由2.62%提高到40.01%,收率为81.25%。结论 HPD-300型大孔吸附树脂可有效纯化紫菀总黄酮。

水杨酸甲酯糖苷抗大鼠急性胸膜炎的作用研究

目的水杨酸甲酯糖苷(DL0309)是来源于民族药滇白珠的新型非甾体抗炎药,本实验的主要目的是评价其对角叉菜胶致大鼠胸膜炎模型的抗炎作用及其可能的机制。方法将48只♂SD大鼠按体重随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组(地塞米松)、DL0309低、中、高剂量组。通过注射角叉菜胶,建立大鼠急性胸膜炎模型。造模后5 h处死大鼠,通过测定胸腔渗出液的体积,对渗出液中的白细胞计数,并测定渗出液中蛋白质的含量来观察药物对该模型的抗炎作用;通过测定渗出液中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)和前列腺素E2(PGE2)以及血浆中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量,来考察DL0309对该模型的抗炎作用机制。结果结果显示地塞米松和DL0309均可明显降低胸膜炎大鼠胸腔炎性渗出液的体积以及渗出液中的白细胞数量和蛋白质含量,同时对于胸腔炎性渗出液中的NO、TNF-α、IL-1β和PGE2的含量均有不同程度的抑制,能不同程度地降低血浆中MDA含量,升高SOD活力。结论 DL0309具有抗角叉菜胶诱导的大鼠急性胸膜炎作用。

马粪海胆多糖的提取工艺及其抗肿瘤作用

目的优化马粪海胆生殖腺中多糖的提取工艺,并测试其体外抗肿瘤作用。方法基于4个因素即提取温度、提取时间、提取次数和料液比对马粪海胆多糖提取率的影响,通过正交试验确定最佳提取工艺;利用MTT法测试多糖对肿瘤细胞的生长抑制作用。结果最佳提取工艺为马粪海胆生殖腺经丙酮脱脂后用10倍量水、50℃提取6 h,重复提取3次,多糖的平均得率为0.64%;马粪海胆粗多糖对人单核细胞白血病(THP-1)和人胃癌细胞株(SGC7901)细胞具有一定的生长抑制作用。结论优化的提取条件温和,工艺稳定、简便快捷,为马粪海胆多糖的工业化生产提供实验依据。

LPS、TNF-α、IL-1β刺激RAW264.7细胞分泌NO的比较

目的研究LPS、TNF-α、IL-1β刺激RAW264.7细胞分泌NO的剂量、时间依赖性关系,为建立炎症细胞模型提供实验依据。方法以LPS(0.01、0.10、1.00、10.00μg/m L)、TNF-α(0.10、1.00、10.00、100.00 ng/m L)或IL-1β(0.10、1.00、10.00、100.00 ng/m L)刺激RAW264.7细胞,24 h后收集细胞上清液Greiss法测定NO的含量。以LPS(1μg/m L)、TNF-α(10 ng/m L)或IL-1β(10 ng/m L)分别刺激RAW264.7细胞6、12、24、48 h,收集细胞上清液Greiss法测定NO的含量。结果不同剂量LPS均可显著诱导RAW264.7细胞分泌大量NO,无明显的剂量依赖性,不同剂量TNF-α或IL-1β均可显著诱导RAW264.7细胞分泌NO,且有一定的剂量依赖性,LPS(1μg/m L)或TNF-α(10 ng/m L)刺激RAW264.7细胞12~48 h时NO的分泌量显著升高,IL-1β(10 ng/m L)刺激6~48 h均可显著诱NO的分泌,均具有一定的剂量依赖性。结论0.01~10.00μg/m L LPS、0.10~100.00 ng/m L的TNF-α或IL-1β刺激RAW264.7细胞均可成功复制炎症细胞模型。

新斯的明与阿托品拮抗非去极化肌松药时效性及对心率的影响

目的探讨新斯的明与阿托品拮抗非去极化肌松药中的时效性及对患者心率的影响。方法选取医院2020年1月至11月收治的拟择期全麻手术患者100例,随机分为4组,每组25例。对照组同时予以新斯的明和阿托品,观察1组先静脉滴注新斯的明、2 min后再推注阿托品,观察2组先静脉滴注新斯的明、4 min后再推注阿托品,观察3组先静脉滴注新斯的明、6 min后再推注阿托品,观察4组拮抗肌松后4,10,15,30 min的心率。结果全量拮抗后,对照组心率在拮抗肌松后15 min时明显加快,且快于拮抗肌松后10 min时(P<0.05),观察2组的拮抗时间明显短于其他组(P<0.05)。拮抗期间并未出现心动过缓病例,拔管后无患者因肌松残余而产生呼吸抑制。结论应用新斯的明后4 min应用阿托品,对患者苏醒期的心率影响最小,同时不会明显影响其术后肌松药残余的拮抗。

项目导学法在药学专业实践教学中的应用与评价

以新药研发的临床前研究过程为主线,设计药学实验项目,以学生为中心,实施项目导学。采用项目导学法模拟科学研究过程,提升学生科学素养;以4C核心素养为问卷调查内容,结果显示,项目导学法对提高学生4C核心素养具有重要作用。

黄芩素和黄芩苷的药理作用及机制研究进展

黄芩在我国药用历史悠久,黄芩素和黄芩苷是黄芩发挥功效的主要活性成分。黄芩素和黄芩苷具有抗菌抗病毒、清除氧自由基、抗氧化、解热、镇痛、抗炎、抗肿瘤、保护心脑血管及神经元、保肝、预防或治疗糖尿病及其并发症等作用,本文对黄芩素和黄芩苷的药理作用及作用机制的研究进展进行综述。

雷公藤红素对巨噬细胞焦亡的影响

目的探讨雷公藤红素对小鼠巨噬细胞RAW264.7焦亡的影响及相关机制。方法采用MTT法测定细胞增殖;吖啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)、Hoechst/PI荧光染色观察细胞焦亡形态变化;ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)分泌量;Western blotting法检测Caspase-1蛋白表达水平;Caspase-1活性检测试剂盒检测细胞内Caspase-1酶活性。结果经MTT法检测发现,雷公藤红素在50 nmol/L以下对巨噬细胞RAW264.7增殖活性无显著影响;AO/EB、Hoechst/PI染色显示雷公藤红素能够改善脂多糖(LPS)与三磷酸腺苷(ATP)诱导的细胞焦亡;ELISA结果显示,雷公藤红素能够抑制IL-1β的分泌(P<0.05),且具有一定的浓度依赖性;Western blotting检测发现cleaved-Caspase-1蛋白表达量降低,同时雷公藤红素能抑制Caspase-1的酶活性。结论雷公藤红素抑制LPS与ATP诱导的细胞焦亡,可能与抑制IL-1β的分泌,抑制Caspase-1的活化有密切关系。

SLCO1B1和APOE基因多态性对瑞舒伐他汀调脂疗效及不良反应的影响

目的探讨SLCO1B1和APOE基因多态性对瑞舒伐他汀临床疗效及不良反应的影响。方法回顾性分析2016年3月至2017年11月中日友好医院157例原发性高脂血症患者长期口服瑞舒伐他汀调脂,并进行SLCO1B1和APOE基因分型检测的临床资料,统计分析服药前和服药8周后血脂水平、肌酸激酶(CK)水平、肝功能、肾功能、不良反应数据。结果 SLCO1B1388A> G和521T> C的基因突变率分别为58.3%和9.2%;APOE 526C> T和388T> C的基因突变率分别为9.3%和5.7%。服药8周后,SLCO1B1 388A> G和521T> C突变型患者血清低密度脂蛋白(LDL)降低程度高于野生型患者(P=0.047和0.016),APOE526C> T突变型患者血清总胆固醇(TG)降低程度高于野生型患者,组间比较均差异显著(P=0.029)。SLCO1B1388A> G突变型患者与野生型患者相比,血清载脂蛋白A1(apoA1)含量高,apoB含量低,apoA1/apoB比值明显升高(P <0.05)。SLCO1B1 521T> C突变型CK增加人数占比显著多于野生型(89%vs. 68.2%,P <0.05)。SLCO1B1和APOE基因多态性对患者肝、肾功能无显著影响(P> 0.05)。结论 SLCO1B1 388A> G和APOE 526C> T基因多态性影响瑞舒伐他汀的调脂疗效,SLCO1B1521T> C可能与瑞舒伐他汀的不良反应相关。检测SLCO1B1和APOE基因分型有助于规避用药风险。

雷公藤红素调控NLRP3炎症小体改善大鼠代谢相关脂肪性肝病研究

目的 评价雷公藤红素对高脂饮食诱导的代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)大鼠的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法 60只健康雄性Wistar大鼠,随机分为6组:对照组、模型组、水飞蓟素胶囊组(阳性对照,100 mg·kg^(-1))和雷公藤红素低、中、高剂量(125、250、500μg·kg^(-1))组,每组10只。对照组给予普通饲料喂养,其余5组给予高脂饲料喂养建立MAFLD模型,造模4周后,从第5周开始给药,ig给予相应剂量的药物至第8周。记录大鼠体质量和肝脏湿质量,计算肝脏系数;腹主动脉取血,检测大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平;HE染色观察肝脏病理变化;Western blotting法检测肝脏中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)和半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)蛋白表达水平。结果 与模型组比较,雷公藤红素各剂量组的肝脏病理学表现均有所改善,肝脏系数均显著降低(P<0.05、0.01);中、高剂量组大鼠血清中TC、TG、LDL-C、AST、ALT、TNF-α和IL-1β水平均显著降低(P<0.05、0.01);肝脏中NLRP3和Caspase-1的蛋白表达显著减少(P<0.05、0.01)。结论 雷公藤红素可明显减轻MAFLD大鼠的肝脏病理学损伤,改善血脂水平,其机制可能与调控NLRP3通路密切相关。

非对称性二甲基精氨酸通过Rho/ROCK信号通路介导大鼠血管平滑肌细胞迁移

目的探讨非对称性二甲基精氨酸(Asymmetric Dimethylarginine,ADMA)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)迁移和形态变化的影响,并探索Rho/ROCK和MAPK信号转导通路在其中的作用。方法原代培养大鼠VSMCs,并通过转染二甲基精氨酸二甲胺水解酶hDDAH2过表达载体,L精氨酸(1mM)或ROCK抑制剂Y27632等预处理,观察细胞RhoA蛋白与底物rhotekin蛋白结合程度,ROCK底物MYPT-1磷酸化程度、VSMC迁移能力和细胞骨架及黏着斑定位情况。结果 (1)ADMA诱导平滑肌细胞Rho/ROCK信号转导通路;(2)Rho/ROCK和ERK信号通路交联介导ADMA对平滑肌细胞迁移能力的诱导作用;(3)ADMA通过Rho/ROCK诱导平滑肌细胞骨架无序排列、黏着斑定位改变;(4)L精氨酸对上述变化有逆转作用。结论 ADMA通过Rho/ROCK和ERK1/2信号交联诱导VSMC迁移和表型转化,而L精氨酸逆转ADMA引起的改变。

芒柄花素对PDGF-BB所致血管平滑肌细胞迁移和增殖的影响

目的研究芒柄花素(Formononetin,Formo)对血小板源性生长因子BB型(PDGF-BB)所致血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响并探讨其可能的机制。方法组织块贴壁法培养SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞,结晶紫染色法观察芒柄花素(0.3、1、3、10μM)对PDGF—BB(40ng/ml)所致的VSMC增殖的影响;BrdU摄取法考察芒柄花素对PDGF—BB所致DNA合成率的影响;划痕实验研究芒柄花素对PDGF—BB所致细胞迁移活力的影响;免疫沉淀法检测芒柄花素对PDGFR磷酸化水平的影响。结果芒柄花素在1-10μM浓度范围内呈剂量依赖性抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖和DNA合成(p<0.05),芒柄花素在3、10μM浓度下抑制PDGF-BB诱导的VSMC迁移(p<0.05)。芒柄花素抑制PDGF-BB对PDGFR受体磷酸化的激活作用。结论芒柄花素抑制PDGF-BB诱导的VSMC迁移和增殖,其作用机制可能与其抑制平滑肌细胞上PDGFR受体磷酸化有关。