毛细管电泳检测肺癌基因突变的方法学研究

建立了一种毛细管电泳快速高效检测聚合酶链反应(PCR)扩增产物以及限制性内切酶酶切产物的方法,使其更好地用于基因诊断。以聚环氧乙烷(poly(ethylene oxide),PEO)为筛分介质,用涂层的毛细管柱(37 cm×75μm,有效长度27 cm)分离pUC19 DNA/MspⅠ(HpaⅡ)Marker标准DNA片段。考察了筛分介质的质量浓度、pH值、毛细管柱的温度和运行电压。在1×TBE(pH8.2)电泳液、电压15 kV、温度15℃,于10 min内成功分离了Marker标准DNA片段。该方法快速、灵敏、准确,用于临床76例肺癌患者正常组织和肿瘤组织p53基因和ras基因点突变情况的检测,结果满意。

毛细管电泳和聚丙烯酰胺电泳法检测肺癌组织p53基因突变效果分析

目的筛选检测肺癌组织p53基因突变的优良方法,为临床早期诊断肺癌提供依据。方法分别运用毛细管电泳(CE)与聚丙烯酰胺电泳(PAGE)—限制性片段长度多态性(RFLP)两种方法对38例肺癌及癌旁正常组织p53基因第249位密码子点突变进行检测。结果RFLP-CE可检测到p53基因第249位密码子的野生型26 bp片段,用时<20 m in;RFLP-CE和RFLP-PAGE均能检测到基因突变,对29例非小细胞肺癌组织p53基因第249位密码子检测的突变率分别为31.03%(9/29)、20.69%(6/29),P<0.05。结论RFLP-CE可为大规模进行肺癌的早期诊断提供简便可靠的方法。

肺癌组织蛋白质混合物检测方法学研究

采用无胶筛分毛细管电泳-激光诱导荧光法(NGS-CE-LIF)检测蛋白质,考察了分离条件对分离的影响,并对提取的肺癌组织蛋白质混合物进行分析,与毛细管电泳紫外检测(CE-UV)及常规蛋白质检测手段聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)进行比较。异硫氰酸酯(FITC)衍生蛋白质,筛分介质为0.05%(w/V)聚环氧乙烷(PEO,Mr=300000),以TBE缓冲液(pH10.0)为电极缓冲液,分离电压为15kV,柱温15℃,氩离子激光器(λex=488nm,λem=520nm)检测。在此条件下可对6.5～200kDa范围的蛋白质进行分离,分离效果较好,15min内完成分离,理论塔板数(N)均值为9.12×104/m,检出限为0.28mg/L。结果表明,本方法具有筛分介质浓度调节简便,分离效果好,时间短等优点,具有一定的实际应用价值;对提取肺癌组织蛋白质混合物进行检测,检测效率和效果优于CE-UV及PAGE。

毛细管电泳法检测肺癌p53基因第七外显子的突变

p53基因点突变在肺癌的发生过程中起重要作用,检测基因点突变的方法学研究将有助于临床准确诊断肺癌。本实验用PCR扩增包含249位密码子的肺癌及癌旁正常组织p53基因第七外显子,扩增样品分别经96℃变性和HaeⅢ酶切处理,以CE-SSCP、CE-RFLP、PAGE-SSCP和PAGE-RFLP对其突变情况进行检测,并从上样量、时间、检出限和检出率4个方面进行比较。PAGE凝胶浓度为15%;CE筛分介质PEO浓度3.0%,pH8.2,电压15kV,温度15℃,λex=488nm,λem=520nm荧光检测。检出率由高到低分别为:CE-SS-CP>PAGE-SSCP>CE-RFLP>PAGE-RFLP。CE-SSCP可作为大规模肺癌早期诊断的简便可靠的方法。

含有金纳米粒子的筛分介质对不同长度DNA片段的毛细管电泳分离

探讨了含有金纳米粒子(GNPs)的筛分介质在毛细管电泳(CE)中对不同长度DNA片段的分离。以聚环氧乙烷(PEO)-金纳米粒子(GNPs)-TBE为CE筛分介质,用涂层的毛细管柱(37 cm×75μm,有效长度27 cm)分离DNAMarker D和1 kbp DNALadder Marker标准DNA片段,考察了CE过程中各参数(如筛分介质质量浓度、分离电压、温度和筛分介质pH值)对不同长度DNA片段分离的影响。对比了新型筛分介质与不含GNPs的PEO-TBE筛分介质的分离效果,并将新型筛分介质用于实际样品的检测。结果表明,在筛分介质中添加GNPs后能够改进CE的分离效果,且分离时间短。方法较适于分离较宽范围的DNA片段。

影响毛细管电泳分离生物大分子的因素

目前毛细管电泳在分离方面的应用越来越广泛,但重复性一直是制约其应用的主要问题。随着毛细管电泳技术的发展,影响毛细管电泳结果的因素也发生着变化。本文对影响毛细管电泳分离生物大分子的因素进行综述,希望对使用毛细管电泳的使用者者有所帮助。

浅析高校社团对提升大学生就业力的作用——基于苏南部分高校的调查分析

高等教育的扩招导致了毕业生的数量骤增,大学生就业难问题日益突显,全面提升大学生就业力已成为解决大学生就业问题的有效途径。高校社团是学生进行自我教育、自我管理、自我服务的重要平台,在提升大学生综合素质和就业力方面起到重要作用。本文基于问卷调查,从实证的角度对高校社团的作用路径进行了具体分析。

装修垃圾制备衍生燃料技术研究

随着城市化进程的不断加快,装修过程中产生的垃圾随之增多,装修垃圾处置过程中一般会产生占装修垃圾质量约5%的可燃垃圾,这部分可燃垃圾的体积却占到装修垃圾总体积的20%以上,目前暂无成熟处置方式可借鉴,可燃垃圾的处置成为装修垃圾处置企业的困扰。本文主要从装修垃圾可燃垃圾组分、可燃组分制备RDF工艺及装修垃圾基RDF性能等方面开展试验,试验结果表明:装修垃圾基RDF具有较高的热值和挥发分、较低的灰分,具有一定市场价值,其工业化生产可完善装修垃圾处置链条,提高装修垃圾资源化利用率。

余泥渣土活化改性技术研究

采用双因素改性试验,石灰石粉改性剂和除砂后的余泥渣土混合物在750℃下煅烧1.5h后加入硅烷偶联剂的方法进行改性。结果表明:煅烧可以提高余泥渣土活性,但提高的幅度不大,只有80%,而加入石灰石粉改性剂后活性指数达到90%,石粉改性剂用量在10%时,7d活性指数达到97%,改性效果最佳,可用作矿物掺合料。

胶凝材料对改性渣土泡沫混凝土性能的影响

主要研究了胶凝组分配合比对经过活化处理的余泥渣土泡沫混凝土的容重、抗压强度、孔径尺寸等的影响。结果表明,普硅水泥比例越高,改性渣土泡沫混凝土容重越大,孔径越小,抗压强度越高。相同容重的两种改性渣土泡沫混凝土,其中普硅水泥比例较泡沫混凝土孔径更小、强度更高,整体孔结构均匀。

利用再生骨料混凝土制备园林用品及工艺品

以建筑废弃物破碎后的再生骨料替代天然骨料为原料制备再生骨料混凝土园林用品及工艺品,设计制备不同配合比的再生骨料混凝土试件,并分析评价其对混凝土坍落度、力学性能及表观质量的影响。结果表明,水灰比和砂率对再生骨料混凝土性能均有影响,且水灰比对其性能的影响最大。胶凝材料用量为397kg/m3、水灰比0.44、砂率45%时,混凝土的抗压强度34.1MPa,试件颜色均一、表面光滑无气孔,确定为再生骨料混凝土最优配合比。

透水系数快速检测装置适用性研究

针对发明专利《一种透水系数快速检测装置》202023208431.7中提供技术原理,设计装置原型机,通过原型机的透水系数检测试验,分析判定该发明装置的适用性情况。采用对比法标定原型机,通过excl软件分析,得出时间与透水系数之间的转换关系宜为指数关系或对数关系,并通过对原型机的适用情况分析表明,该发明装置的适用范围为工程现场一般质量监测。

护患纠纷产生的原因及预防措施

随着社会的进步,病人运用法律武器维持自己的正当权益,已逐渐成为人们的共识,并逐渐成为社会关注的热点。然而护患纠纷的发生却呈上升趋势,如何提高服务质量,加强专业素质训练,增进彼此沟通,优化护患关系,避免护理纠纷,将是未来实际工作中的重点内容。那么在医疗纠纷中认真分析护理工作过程产生的护患纠纷,对完善护理服务质量是十分有益的。

毛细管电泳-限制性：片段长度多态性分析检测胃癌H-ras基因点突变

建立一种毛细管电泳快速高效检测限制性内切酶酶切产物的方法,使其更好地用于基因诊断.以甲基纤维素(Methyl cellulose,MC)为筛分介质,用pUC19 DNA/MspI(HpaⅡ)Marker标准DNA片段为实验对象,通过考察筛分介质的浓度、pH值、毛细管的温度和运行电压优化出分离小于600bp的双链DNA片段的最适条件,并将此方法应用于临床59例胃癌患者肿瘤组织H-ras基因12位密码子点突变情况的检测.MC是一种良好的筛分介质,运用其进行毛细管电泳对于遗传性疾病的诊断将更加快速、准确、简便、灵敏。

高效毛细管电泳用于以聚环氧乙烷为筛分介质分离DNA的机理研究

用毛细管电泳以聚环氧乙烷(PEO)为筛分介质对pUC19DNA/Msp Ⅰ(HpaⅡ)Marker中的12条DNA片段进行了分离,并尝试用Ogston模型、爬行模型以及线性模型对分离机理进行研究,最终发现26～147bp的小片段,在低电场强度时能很好地符合Ogston模型理论,而190～501bp中等长度的DNA片段电泳迁移率与其尺寸间存在很好的负相关的线性关系,为此,提出一种新的线性模型来进行解释.此外,还探讨了PEO的浓度和电场强度对分离的影响.其结论可更好地从理论上指导对中小片段DNA的分离,对肿瘤基因突变点的分析和PCR扩增产物的分离分析具有重要的意义.

射血分数保留的心力衰竭患者维生素D与N末端脑钠肽前体、同型半胱氨酸关系及三者与预后的关系研究

背景全世界有10亿人存在维生素D缺乏或不足,其中40%~80%是老年人,而射血分数保留的心力衰竭(HFpEF)患者维生素D缺乏或不足发生率更高。N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)与同型半胱氨酸(Hcy)是预测HFpEF患者预后强有力指标。但HFpEF患者维生素D与NT-proBNP、Hcy之间的关系尚不明确,且三者与患者预后的关系更知之甚少。目的分析HFpEF患者维生素D与NT-proBNP、Hcy的关系及三者与患者预后的关系。方法选取青海省第五人民医院2016年1月—2018年1月收治的HFpEF患者103例为研究对象。收集患者临床资料,包括年龄、性别、体质指数(BMI)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、6 min步行距离(6MWD)、纽约心脏病协会(NYHA)分级、基础疾病[冠状动脉疾病(CAD)、高血压、高脂血症、糖尿病、慢性阻塞性肺疾病(COPD)]及药物[包括血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)或血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂(ARB)、β-受体阻滞剂、利尿剂、他汀类药物]治疗情况。同时收集患者血液指标[包括NT-proBNP、Hcy、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、血红蛋白(Hb)、空腹血糖(FBG)、肌酐(Cr)、估算肾小球滤过率(eGFR)、尿酸(UA)、维生素D]及心功能指标[包括左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室重量指数(LVMI)、左心房容积指数(LAVI)、左房室瓣舒张早期血流速度峰值与左房室瓣环舒张早期运动速度峰值的比值(E/E’)]。维生素D≥30μg/L为正常,20~<30μg/L为不足,<20μg/L为缺乏。所有患者随访2年或随访至患者发生不良事件(全因死亡、行心脏移植和/或植入左心室辅助装置)。结果103例患者中,维生素D正常15例(14.6%),不足57例(55.3%),缺乏31例(30.1%)。维生素D不足患者NT-proBNP、Hcy高于维生素D正常患者,eGFR低于维生素D正常患者(P<0.05);维生素D缺乏患者6MWD短于维生素D正常患者,CAD发生率、高血压发生率、糖尿病发生率、LAVI、NT-proBNP、Hcy、UA高于维生素D正常患者,eGFR、LVEF低于维生素D正常患者(P<0.05);维生素D缺乏患者NT-proBNP、Hcy、UA高于维生素D不足患者(P<0.05)。维生素D与NT-proBNP、Hcy均呈负相关(r值分别为-0.653、-0.635,P值均<0.001)。103例患者中,共28例(27.2%)发生不良事件,其中10例患者全因死亡、3例患者行心脏移植、15例患者植入左心室辅助装置。维生素D不足患者累积不良事件发生率高于维生素D正常、缺乏患者(P<0.05);维生素D缺乏患者累积不良事件发生率高于维生素D正常患者(P<0.05)。根据NT-proBNP四分位数,103例患者中,NT-proBNP≤98.2 ng/L 25例,>98.2~<212.0 ng/L 26例,212.0~<564.8 ng/L 26例,≥564.8 ng/L 26例。NT-proBNP≥564.8 ng/L患者累积不良事件发生率高于NT-proBNP≤98.2 ng/L患者、NTproBNP为>98.2~<212.0 ng/L患者、NT-proBNP为212.0~<564.8 ng/L患者(P<0.05);NT-proBNP为212.0~<564.8 ng/L患者累积不良事件发生率高于NT-proBNPP≤98.2 ng/L患者、NT-proBNP为>98.2~<212.0 ng/L患者(P<0.05)。根据Hcy四分位数,103例患者中,Hcy≤10.2μmol/L25例,>10.2~<15.6μmol/L 26例,15.6~<23.2μmol/L26例,≥23.2μmol/L 26例。Hcy≥23.2μmol/L患者累积不良事件发生率高于Hcy≤10.2μmol/L患者、Hcy为>10.2~<15.6μmol/L患者(P<0.05);Hcy为15.6~<23.2μmol/L患者累积不良事件发生率高于Hcy≤10.2μmol/L患者、Hcy为>10.2~<15.6μmol/L患者(P<0.05)。多因素Cox比例风险回归分析结果显示:年龄、6MWD、NYHA分级、糖尿病、NT-proBNP、Hcy、UA、维生素D、LVEF、LAVI是HFpEF患者发生不良事件的独立影响因素(P<0.05)。结论HFpEF患者维生素D不足或缺乏发生率较高。HFpEF患者维生素D与NT-proBNP和Hcy呈负相关,且三者均是患者预后的影响因素。

基于白蛋白-红细胞分布宽度评分、肺炎严重程度指数危险分级构建重症社区获得性肺炎患者入院后90d内预后的Nomogram模型及其预测价值研究

背景据统计住院重症社区获得性肺炎(SCAP)患者病死率超过50%,而早期识别死亡风险高的SCAP患者并及时干预对改善患者预后具有重要意义。目前,临床上尚未构建预测SCAP患者死亡风险的Nomogram模型。目的基于白蛋白(Alb)-红细胞分布宽度(RDW)评分、肺炎严重程度指数(PSI)危险分级构建SCAP患者入院后90 d内预后的Nomogram模型并评估其预测价值。方法选取2017年1月—2019年1月青海省第五人民医院重症监护室收治的SCAP患者216例,根据入院后90 d内预后分为存活组(n=158)和死亡组(n=58)。收集患者入院24 h内临床资料(包括年龄、性别、吸烟情况、基础疾病、气管插管情况、脓毒性休克发生情况)和实验室检查指标〔包括白细胞计数(WBC)、中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、血小板与淋巴细胞比值(PLR)、单核细胞与淋巴细胞比值(MLR)、C反应蛋白(CRP)、血红蛋白(Hb)、血肌酐(Scr)、Alb、RDW〕,计算患者Alb-RDW评分并评估PSI危险分级。绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)以评估相关连续变量预测SCAP患者入院后90 d内预后的最佳截断值;采用多因素Logistic回归分析探讨SCAP患者入院后90 d内预后的影响因素,采用R版3.5.2中的“rms”软件包构建SCAP患者入院后90 d内死亡风险的Nomogram模型,并绘制ROC曲线以评估其预测价值。结果ROC曲线分析结果显示,年龄、WBC、NLR、PLR、MLR、CRP、Hb、Scr、Alb、RDW预测SCAP患者入院后90 d内预后的最佳截断值分别为65岁、12.58×10^9/L、6.24、220.54、0.61、118.52 mg/L、103.58 g/L、91.72μmol/L、29.98 g/L、14.15%。死亡组患者中年龄≥65岁、吸烟、气管插管、脓毒性休克、WBC≥12.58×10^9/L、NLR≥6.24、Hb<103.58 g/L、Scr≥91.72μmol/L、Alb<29.98 g/L、RDW≥14.15%、Alb-RDW评分1分及2分、PSI危险分级Ⅲ级及Ⅳ~Ⅴ级者所占比例均高于存活组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,年龄≥65岁、气管插管、NLR≥6.24、Alb<29.98 g/L、RDW≥14.15%、Alb-RDW评分1分及2分、PSI危险分级Ⅲ级及Ⅳ~Ⅴ级是SCAP患者入院后90 d内死亡的危险因素(P<0.05)。将年龄、气管插管、NLR、Alb-RDW评分、PSI危险分级作为预测因子,构建SCAP患者入院后90 d内死亡风险的Nomogram模型。ROC曲线分析结果显示,Nomogram模型预测SCAP患者入院后90 d内死亡的曲线下面积(AUC)为0.862〔95%CI(0.729,0.916)〕,分别高于Alb-RDW评分的0.742〔95%CI(0.682,0.796)〕及PSI危险分级的0.755〔95%CI(0.696,0.808)〕(P<0.05)。结论基于Alb-RDW评分、PSI危险分级构建的Nomogram模型对SCAP患者入院后90 d内死亡风险的预测价值高于单独Alb-RDW评分及PSI危险分级。

降钙素原、C反应蛋白清除率对脓毒性休克患者的预后价值

目的:探讨降钙素原清除率(PCT-c)、C反应蛋白清除率(CRP-c)在脓毒性休克患者28 d内病死率的价值。方法:选取我院在2016-01—2019-02期间收治的223例脓毒性休克患者,根据28 d内的死亡事件分为生存组(165例)与死亡组(58例)。采用酶联荧光法测定血清PCT浓度,采用免疫比浊法测定血清CRP浓度。之后在第2天、第3天、第5天以同样方式测定血清PCT及CRP浓度。计算PCT-c2/1、PCT-c3/1、PCT-c5/1、CRP-c2/1、CRP-c3/1、CRP-c5/1。结果:脓毒性休克患者病死率为26.0%。生存组患者的SOFA评分低于死亡组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。死亡组患者第1天、第2天、第3天、第5天的血清PCT及CRP浓度均高于生存组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。PCT-c3/1的AUC为0.797,最佳截断值为0.68;CRP-c3/1的AUC为0.802,最佳截断值为0.55。SOFA评分(OR:2.261,95%CI:1.738~2.940)、PCT-c3/1≤0.68(OR:3.544,95%CI:2.324~6.968)及CRP-c3/1≤0.55(OR:3.874,95%CI:1.065~7.099)为脓毒性休克患者死亡的独立危险因素(P<0.05)。结论:PCT-c及CRP-c对于预测28 d内脓毒性休克患者病死率的价值相当且均具有较高的临床价值,建议将其纳入常规的监测指标中,进一步完善该类患者治疗指导方案。