ΦC31位点特异性整合酶DNA结合功能域的鉴定

DNA结合功能域的确定是阐明位点特异性重组酶整合机制的关键,而对酶DNA结合功能域进行突变研究是提高酶整合效率和整合特异性的重要方法.为了鉴定ΦC31位点特异性整合酶的DNA结合功能域,依据对ΦC31整合酶序列的生物信息学分析结果,利用PCR和克隆技术在pET22b原核表达载体上构建ΦC31整合酶重组截短突变体表达质粒,将获得的表达质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌株扩大培养并用IPTG诱导融合蛋白的表达,经镍柱纯化获得了纯度达90%以上的重组蛋白,分子量也与预期大小一致,Western印迹确定了重组蛋白的特异性.凝胶迁移滞后实验显示野生型以及截短突变体蛋白ΦC311-528、ΦC311-472、ΦC311-413能与细菌附着位点DNAattB和噬菌体附着位点DNAattP结合的条带,而截短突变体ΦC311-353、ΦC311-279、ΦC311-120观察不到相应的结合条带.6个截短突变体质粒在体内重组活性蓝白斑实验中均表现为蓝斑,显示出皆丧失体内重组活性.研究证实,ΦC31整合酶半胱氨酸富集域(第353～413位氨基酸)具有DNA结合的功能,而C末端缬氨酸富集区(第528～613位氨基酸)也与其重组活性相关.这为进一步了解ΦC31整合酶的结构与功能,最终引导其结构进化,提高其特异性和整合效率奠定了基础.

依托试验站培养专业硕士研究生实践能力的探索

大学试验站作为产学研紧密结合的多功能平台,是新时期大学服务产业的重要基地,也是培养综合型与应用型高水平研究生人才的重要支撑。本文以西北农林科技大学安康水产试验示范站为例,阐述了大学试验站在研究生培养中的任务与试验站在试验与实践中的条件建设,总结了该试验站在专业硕士研究生培养中的主要做法与成效,提出了强化大学试验站建设的两方面建议,以期对研究生实践能力培养模式的建立和完善提供借鉴。

蒲公英根提取物对菜籽油的抗氧化效果

由蒲公英(Taraxacum mongolicum)根中获得了乙醇提取物,经高效液相色谱(HPLC)分析,其中含有绿原酸、咖啡酸、黄酮及蒲公英甾醇等多种抗氧化活性物质。为了确定蒲公英根提取物对食用油脂的抗氧化效果,将该提取物以不同质量分数分别添加到菜籽油中,采用Schaal烘箱加速氧化法,以过氧化值(POV)、酸价(AV)、硫代巴比妥酸(TBA)值为指标,以常用的市售食用油抗氧化剂丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)及维生素E油(VE)作为对照,对菜籽油进行了抗氧化效果比较试验。结果表明,蒲公英根提取物在菜籽油中的添加量和抗氧化效果呈显著的量效关系(P <0.05);以相同质量分数(0.02%)添加,提取物对菜籽油POV升高的抑制能力比BHA和VE强(P <0.05),较BHT稍弱(P> 0.05);对TBA值升高的抑制能力比BHT和VE强(P <0.05),较BHA稍弱(P>0.05);对AV升高的抑制能力较三者略强(P> 0.05)。蒲公英根提取物对菜籽油具有很好的抗氧化效果,有望成为一种绿色天然的新型食品抗氧化剂。

基于创建样板党支部提升高校管理服务水平的思考

为提升高校教工行政党支部的战斗堡垒作用,更好的发挥服务育人、管理育人职能,以草业与草原学院教工行政党支部创建校级样板党支部为例,探索支部建设、实践创新新途径。深入贯彻中央“一切工作到支部”的要求,积极做好党支部建设提质增效,不仅促进了党支部工作效率和水平的显著提升,而且还能够满足时代发展的真正需求。