人类GABARAPL2基因的亚细胞定位

为了对GABARAPL2 (GABAA 受体相关蛋白相似蛋白 2 )基因的功能进行初步分析 ,首先通过同源比较的方法将序列与其同源物进行比较 ,发现GABARAPL2的氨基酸序列与GABARAP(GABAA 受体相关蛋白 )高度同源 ,而GABARAP已证实通过结合细胞骨架的微管蛋白 ,使GABAA 受体聚集、定位在细胞膜上。本文采用PCR法从人脑组织的cDNA文库中扩增出GABARAPL2的cDNA ,克隆至T质粒载体中进行测序验证 ,然后以此为模板 ,引物中引入酶切位点再次PCR ,扩增出GABARAPL2的开放阅读框 ,并将其插入到加强型绿色荧光蛋白融合表达载体EGFP中 ,将绿色荧光蛋白标记的GABARAPL2和GABARAP分别转染HLF细胞株。结果两种蛋白的分布情况基本一致 ,在细胞质内和核内均有分布 ,而且核内的分布较胞质为多。结构功能域分析表明 ,GABARAPL2含有蛋白激酶C磷酸化位点和酪氨酸激酶磷酸化位点 ,可能通过磷酸化参与细胞骨架的变化。结论GABARAPL2和GABARAP不仅在胞质中作为受体相关蛋白协助受体的聚集、定位 。

人类GABARAPL1基因的染色体定位

目的 确定人类GABAA 受体相关蛋白相似蛋白 1基因在染色体上的位置。方法 根据该基因cDNA的 3′非翻译区序列设计一对RH定位引物 ,以人 /鼠体细胞辐射杂种板Genebridge 4(GB4) panel试剂盒中的杂种细胞株基因组DNA为模板 ,进行PCR扩增 ,经琼脂糖凝胶电泳检测后 ,按Sanger网站的RH定位分析系统进行统计学分析。结果 PCR法在一些杂种细胞株中扩增出特异的目的片段 ,经测序验证了该序列的准确性。通过Sanger网站统计分析表明 ,该基因与 12号染色体上的AFM 0 2 6tb5 (D12S77) ,AFM32 0xb5 (D12S35 8) ,AFM 2 0 5xg3(D12S310 ) ,AFM2 17xa7(D12S99) ,AFM 2 34wb6 (D12S16 6 4)位标紧密连锁 ,且LOD值均大于 3。经该染色体区带的物理图、遗传图及细胞图谱整合分析 ,将该基因定位在染色体 12 p12 .3区带的D12S77和D12S35 8位标之间。 结论 放射杂交定位法是一种新颖便捷的基因定位方法 ,通过此法成功地进行了人类GABAA 受体相关蛋白相似蛋白 1基因的染色体定位。

人类GABARAPL2基因的染色体定位

为了确定人类GABAA 受体相关蛋白相似蛋白 2基因在染色体上的位置 ,根据该基因cDNA的 3′非翻译区序列设计一对RH定位引物 ,以人 /鼠体细胞辐射杂种板Genebridge4(GB4) panel和G3 panel试剂盒中的杂种细胞株基因组DNA为模板 ,在一定的条件下进行PCR扩增 ,琼脂糖凝胶电泳结果分别输入Sanger和Stanford网站的RH定位分析系统进行统计学分析。结果PCR法在一些杂种细胞株中扩增出特异的目的片段 ,并经测序验证了其准确性。凝胶电泳结果在Sanger网站统计分析表明该基因与 16号染色体上的AFM 3 4 0 ye5 ,AFM 2 92xh5 ,AFM 3 2 0wf1,AFMa0 66xd5 ,AFM 2 49xc5位标紧密连锁 ;在Stanford网站统计分析表明该基因与 16号染色体上的SHGC— 14 5 7,SHGC— 5 3 4 15 ,SHGC— 6782 ,SHGC— 2 2 2 8,SHGC— 14 62 9位标紧密连锁 ,LOD值均大于 3。整合分析该染色体区带的物理图、遗传图及细胞图谱后 ,最终将基因定位在染色体 16q2 2 .3区带的D16s3 0 16和D16s5 15位标之间。结论放射杂交定位法是一种新颖便捷的基因定位的方法 ,通过此法成功地进行了人类GABAA 受体相关蛋白相似蛋白 2基因的定位。

Wilson病胆汁Cu,Zn与临床表型的关系

目的研究Ｗｉｌｓｏｎ病（ＷＤ）患者和非ＷＤ对照者胆汁铜、锌含量的变化，结合临床表型进一步探讨ＷＤ铜滞留的病因机制．方法不同分型、病情各异的ＷＤ患者２０例，有慢性肝损害的非ＷＤ患者２２例和健康自愿者１０例，均实施十二指肠引流术留取胆汁样本，采用原子吸收分光光度计检测各样本的铜、锌含量．结果ＷＤ患者的胆汁铜含量（μｍｏｌ／Ｌ，４４±０４ｖｓ４１７±２０，４２０±２６）和铜／锌比值（０１３±００２ｖｓ１５４±０２７，１５６±０２４）显著低于有慢性肝损害的非ＷＤ患者及健康自愿者（Ｐ＜００１），而胆汁锌含量无明显差异（Ｐ＞００５）．不同分型和病情状况的ＷＤ患者胆汁铜含量存有显著性差异（Ｐ＜００５；Ｐ＜００１）．结论肝胆系统铜排泄显著减少是ＷＤ患者铜滞留的关键，胆汁铜滞留与ＷＤ患者肝损害的程度和病情轻重有密切关系．

NF1基因附近一个新的STR位标的分离和鉴定

用人工合成的 (dC_dA) 15 寡聚核苷酸探针 ,从 1 7q1 1_q1 2区带显微切割探针池中分离得到一个含有 (CA)重复单位 1 6次的DNA片段 ,经在GenBank和GDB中检索确认是一个新的STR .这个新的STR在 5 0名中国人中存在 8种等位形式 ,多态信息量值高达 0 6 1 .连锁分析显示这个STR在一个 3代的NF1病人家系中的传递符合Mendel遗传规律 .用含有这个新的STR的 1 7kb的人基因组DNA片段为探针进行FISH ,将其定位在 1 7q1 1_q1 2区带 ,即NF1基因所在的区域 .这个新的STR的GenBank和GDB注册号分别为 :G32 1 1 2和D1 7S2 2 0 4.