产胶原蛋白酶菌株的构建及性质分析

使用聚合酶链式反应(PCR)法扩增了解淀粉芽孢杆菌(Bacillus.amyloliquefaciens TCCC11319)的胶原蛋白酶基因col,并在枯草芽孢杆菌(Bacillus.subtillis WB600)中进行表达。收集重组菌株的发酵酶液,以此来分析胶原蛋白酶性质。酶学性质研究表明:酶的最适反应温度为40℃,在30~40℃具有良好的温度稳定性;最适反应p H值为8.0,在pH值7.0~8.0的条件下稳定,表明是一种中性酶;金属离子Ca^(2+)、Mg^(2+)对酶有明显的激活作用,而Mn^(2+)、Cu^(2+)、Fe^(2+)对酶有明显的抑制作用,其中Cu^(2+)对酶的抑制作用最显著。酶学性质的研究结果对胶原蛋白酶在制革固体废弃物处理应用中具有很好的指导意义。

地衣芽孢杆菌角蛋白酶kerA基因的异源表达及性能研究

从地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis) ATCC16580中克隆得到角蛋白酶基因kerA,将其构建在芽孢杆菌表达载体p LIYU-2上,再转化到解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens) TCCC111018中,构建出高产角蛋白酶重组菌株TCCC111018/p LIYU-2-kerA。重组菌株在羽毛发酵培养基中12h内即可将羽毛全部降解,在摇瓶发酵培养基中36h酶活力达到1 361. 54U/m L。重组角蛋白酶最适温度为65℃,最适p H值为9,在40～60℃和p H值9～11范围内具有良好的稳定性。蛋白电泳(SDS-PAGE)分析表明,重组角蛋白酶分子质量约为31kD。Na^+,K^+、Ca^(2+)及Mg^(2+)能显著促进角蛋白酶活力,Cu^(2+)和Fe^(3+)对重组角蛋白酶有明显的抑制作用。高效液相色谱(HPLC)分析显示,羽毛酶解液中以缬氨酸、异亮氨酸和苯丙氨酸为主,另外也含有较多的酪氨酸和胱氨酸,游离氨基酸浓度为14. 59μmol/m L。

解淀粉芽孢杆菌TCCC11319在降解制革固体废弃物中的应用

应用解淀粉芽孢杆菌TCCC 11319的发酵酶液制成的酶粉来处理制革固体废弃物:裸皮屑、原料皮屑、铬革屑和浸灰皮屑,并从酶解温度、p H、酶浓度3个方面初步确定其最佳酶解条件,为后期制革固体废弃物酶法处理工艺的开发奠定基础。通过高效液相色谱(HPLC)进一步分析了废弃物酶解液中氨基酸成分,为后续酶解产物的进一步应用提供理论依据。

解淀粉芽孢杆菌TCCC11319在降解制革固体废弃物中的应用(续)

应用解淀粉芽孢杆菌TCCC11319的发酵酶液制成的酶粉来处理制革固体废弃物:裸皮屑、原料皮屑、铬革屑和浸灰皮屑,并从酶解温度、p H、酶浓度3个方面初步确定其最佳酶解条件,为后期制革固体废弃物酶法处理工艺的开发奠定基础。通过高效液相色谱(HPLC)进一步分析了废弃物酶解液中氨基酸成分,为后续酶解产物的进一步应用提供理论依据。