梨花药愈伤组织诱导和悬浮培养体系的建立及应用

【目的】建立梨悬浮细胞体系,并利用悬浮细胞体系获得高质量悬浮细胞,进行遗传转化和原生质体的分离。【方法】以新梨7号花药为试材,诱导获得梨花药愈伤组织,研究了细胞悬浮系建立和影响悬浮细胞增殖的主要因子。【结果】花药在1/2 MS+1.0 mg·L^(-1)2,4-D+0.4 mg·L^(-1)NAA+30 g·L^(-1)蔗糖+7 g·L^(-1)琼脂(pH值为5.8~6.0)培养基上诱导的愈伤组织,经4~5次继代得到了黄白色、颗粒状,状态相对较好的愈伤组织;将愈伤组织接种于液体培养基中,于28℃,200 r·min-1的黑暗条件下悬浮振荡培养,经4~5次悬浮继代培养建立了悬浮细胞系,适宜的启动和增殖培养基为:MS+1.5 mg·L^(-1)2,4-D+1.0 mg·L^(-1)6-BA+30 g·L^(-1)蔗糖,细胞生长曲线呈“S”型,活细胞率达81.98%,近圆细胞率达83.66%,可作为遗传转化的受体,转化率为20.00%。也可直接用于原生质体的分离,原生质体产量达3.67×10^(6)个·mL^(-1),活力可达92.00%。【结论】建立了梨悬浮细胞培养体系,利用所建体系获得了高质量的悬浮细胞,可直接用于遗传转化和原生质体的分离。