基于芯片筛选肝内胆管细胞癌差异表达的环状RNA_000585并探讨其潜在的作用机制

目的通过对肝内胆管细胞癌(iCCA)和配对的癌旁组织的circRNA芯片比较分析,发现并验证iCCA中异常表达的circRNA,进而揭示其潜在的机制。方法收集2019年7月—12月收治的3例iCCA患者肿瘤组织标本,采用微阵列芯片杂交的方法检测iCCA和癌旁组织中circRNA的差异表达,并收集同一时期15例iCCA患者样本,采用实时定量PCR(RT-PCR)验证差异表达的circRNA。通过生物信息学分析寻找差异表达的circRNA的下游分子,并进一步采用RT-PCR对潜在分子进行验证。计量资料组间比较采用配对样本t检验;计数资料组间比较采用χ2检验或Fisher精确检验。结果采用1.5倍作为差异表达界值,结果发现iCCA相比癌旁组织中117个circRNAs出现上调,104个circRNAs出现下调。采用3倍作为界值,发现iCCA中10个circRNAs出现上调(circRNA_002172、circRNA_002144、circRNA_001588、circRNA_000166、circRNA_000585、circRNA_000167、circRNA_402608、circRNA_006853、circRNA_001589、circRNA_008882),3个circRNAs出现下调(circRNA_406083、circRNA_104940、circRNA_006349)。收集15例病理证实的iCCA及癌旁组织,采用RT-PCR进行验证差异表达的circRNA,结果发现circRNA_000585在iCCA中表达显著升高(t=3.607,P=0.003)。进一步通过生物信息学分析发现circRNA_000585/miR-615-5p/AMOT/YAP可能是iCCA发生的潜在通路,RT-PCR验证发现该通路中miR-615-5p在iCCA中显著下调(t=5.724,P<0.001),而AMOT和YAP分子在iCCA中显著上调(t值分别为2.664、2.986,P值分别为0.019、0.0098)。结论多种circRNAs在iCCA中出现异常表达,其中circRNA_000585在iCCA中显著上调,其可能通过circRNA_000585/miR-615-5p/AMOT/YAP信号通路在iCCA的发生中发挥重要作用。