氧化型低密度脂蛋白对心脏瓣膜成肌纤维细胞的增殖及骨相关蛋白表达的影响

目的通过观察猪主动脉瓣成肌纤维细胞在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)作用下时,细胞的增殖变化以及是否表达骨相关蛋白,探讨心脏瓣膜钙化的病理机制。方法以原代培养的猪主动脉瓣成肌纤维细胞作为研究对象,用与心脏瓣膜钙化有关的病理因素ox-LDL处理细胞,将细胞随机分为4组:对照组(Ctrl)、氧化型低密度脂蛋白组(25μg/ml ox-LDL)、氧化型低密度脂蛋白+阿托伐他汀组(25μg/ml ox-LDL+50μg/ml Ator)、阿托伐他汀组(50μg/ml Ator)。采用流式细胞学技术测定各组细胞在24、48和72 h的增殖变化,利用Western blot和Real-time PCR检测72 h各组细胞的α-平滑肌蛋白(α-SMA)活性以及骨形成蛋白2(BMP2)、碱性磷酸酶(ALP)的基因表达;了解细胞是否异常激活以及是否向成骨细胞样表型转化。结果 ox-LDL分别处理成肌纤维细胞24、48和72 h后,细胞显示出时间依赖性的增殖加速(P<0.05);ox-LDL能使成肌纤维细胞α-SMA的表达明显增加(P<0.05)而成为活性细胞;骨相关蛋白BMP2、ALP的蛋白和m RNA在对照组和Ator组仅有低水平表达,而在ox-LDL组表达显著升高(P<0.01);Ator对ox-LDL的这种病理性影响可以起到一定的抑制作用(P<0.05)。结论 ox-LDL促使心脏瓣膜成肌纤维细胞激活、分化、增殖以及向成骨细胞样表型转化,进而导致心脏瓣膜的钙化。阿托伐他汀可能通过阻遏成肌纤维细胞的增殖起到对心脏瓣膜钙化的防治作用。

阿托伐他汀抑制心脏瓣膜成肌纤维细胞向成骨细胞样表型转化

目的:通过观察猪主动脉瓣成肌纤维细胞在受氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)作用时,阿托伐他汀(Ator)对细胞凋亡的影响以及是否表达骨相关蛋白,来探讨阿托伐他汀对心脏瓣膜钙化的防治机制。方法:以原代培养的猪主动脉瓣成肌纤维细胞作为研究对象,用ox-LDL处理细胞。将瓣膜间质细胞随机分为4组:对照组(Ctrl),ox-LDL组(25 mg·L-1ox-LDL),oxLDL+Ator组(25 mg·L-1ox-LDL+50 mg·L-1Ator),Ator组(50 mg·L-1Ator)。采用流式细胞学技术测定各组细胞在24,48,72 h的凋亡变化,利用Western印迹法和Real-time PCR检测72 h各组细胞的α-平滑肌蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)活性,以及骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2),碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的基因表达。结果:ox-LDL分别处理成肌纤维细胞24,48,72 h后,细胞显示出时间依赖性的凋亡加速(P<0.05),加入Ator后,细胞的凋亡速度明显减低(P<0.05)。ox-LDL组α-SMA的表达明显增加(P<0.05),成为活性细胞,加用Ator并未对α-SMA蛋白产生影响(P>0.05)。骨相关蛋白BMP2、ALP和mRNA在对照组和Ator组仅有低水平表达;而在ox-LDL组表达显著增加(P<0.01),加入Ator后,BMP2、ALP的表达明显下降(P<0.05)。结论:ox-LDL促使心脏瓣膜成肌纤维细胞分化、凋亡加速以及向成骨细胞样表型转化;Ator可以抑制ox-LDL所诱导的细胞凋亡,并对细胞的激活,以及向成骨样细胞表型分化可以起到一定的抑制作用,对心脏瓣膜钙化有防治作用。