草鱼胞质苹果酸脱氢酶(cMDH)的序列克隆及分析

以实验室构建的草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肠道cDNA文库苹果酸脱氢酶(cMDH)EST序列为基础,采用末端快速扩增法(RACE),从健康雌性草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肠道细胞RNA中获得1391 bp的草鱼肠道cMDH的cDNA序列(NCBI登录号:EU569765)。结果显示:该序列包含62 bp的5′非编码区(5′-UTR),330 bp的3′非编码区(3′-UTR),典型加尾信号AATAA位于polyA起点上游16 bp。开放阅读框ORF长999 bp,共编码333个氨基酸,预测蛋白等电点为6.67,大小为36 kDa。多序列比对显示草鱼胞质苹果酸脱氢酶具有典型的苹果酸脱氢酶功能区保守序列,该酶与斑马鱼cMDH相似度最高达到95.5%,与模式植物拟兰介的相似度为57.8%,其预测三级结构具有典型cMDH功能区。Southern杂交结果表明草鱼cMDH属于多拷贝基因家族。

草鱼腺苷酸基琥珀酸裂解酶克隆及序列分析

腺苷酸基琥珀酸裂解酶(Adenylosuccinate lyase,ADSL)是嘌呤核苷酸合成过程中的关键酶。研究以草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肠道cDNA文库为基础,应用PCR、RT-PCR和RACE技术,成功获得了草鱼肠道组织腺苷酸基琥珀酸裂解酶基因的cDNA全长和基因组DNA全长。该基因全长1584 bp,包含一个1449 bp的开放阅读框,编码482个氨基酸,与其他脊椎动物比对显示,其序列具有较高的保守性。草鱼腺苷酸基琥珀酸裂解酶基因组DNA由13个外显子和12个内含子组成,其外显子拼接位点非常保守,遵循GT-AG原则。

普通变形杆菌TWN3株DNA疫苗的初步研究

普通变形杆菌TWN3分离自死亡大口鲇,菌的DNA文库已构建成功,通过免疫印迹法从文库中筛选到TWN3抗原片段PV4,将其克隆到真核表达载体pcDNA3上,构建DNA疫苗pcDNA3-PV4。肌肉注射免疫小鼠进行真核表达检测。免疫组织化学分析DNA疫苗在接种局部肌肉中抗原的表达,ELISA检测小鼠血清中的IgG及IFN-γ含量。免疫pcDNA3-PV4疫苗的小鼠肌肉细胞中检测到PV4相关抗原蛋白的表达,外周血中的IgG及IFN-γ显著高于免疫pcDNA3组。对小鼠进行免疫保护试验,免疫DNA疫苗的小鼠对TWN3菌有免疫力。初步显示构建的DNA疫苗有一定效果。试验结果为鱼类水体试验提供了参考依据,同时随着TWN3株菌DNA疫苗研究的深入,将对该疫苗最终大规模用于鱼类提供理论基础。

浅谈化工液体公路装车中的安全环保隐患和防范措施

液体公路装车的产品大多为易燃易爆、有毒有害,易挥发逸散的危险化学品,对环境和操作人员构成极大威胁。本文对液体公路装过程中存在的安全环保隐患进行了探讨和分析,提出了解决措施。

草鱼胸腺素β_(11)的cDNA克隆及序列分析

以前期构建的草鱼肠道cDNA文库中β胸腺素EST序列为基础,应用cDNA末端快速扩增(RACE)技术扩增草鱼胸腺素β_(11)(thymosinβ_(11),Tβ_(11))的cDNA序列全长(NCBI登录号:HM120850),该序列长320 bp,5'非翻译区47 bp,3'非翻译区141 bp,包含一个132 bp的开放读码框,编码43个氨基酸残基,蛋白质等电点为5.17,分子大小为4892 Da.与其他脊椎动物的同源性对比结果显示,草鱼与斑马鱼胸腺素β_(11)的同源性最高,达到93.0%.结构预测显示草鱼胸腺素β_(11)拥有典型的β胸腺素家族典型的二级结构.

重金属对双孢菇菌丝合成巯基化合物和抗氧化酶的影响

研究了不同浓度的Cu、Zn、Pb、Cd(氯化盐)分别对双孢菇菌丝进行短时间(1d)和长时间(8d)诱导时,菌丝体内可溶性蛋白,巯基化合物和抗氧化酶等的变化.结果显示:高浓度的重金属在长时间诱导后显著降低菌丝可溶性蛋白含量;长时间诱导条件下,Cu、Zn显著增加巯基化合物含量,Cd则显著降低巯基化合物含量;超氧化物歧化酶(SOD)在重金属长时间诱导后活性显著增加,Cd诱导增加最明显;经过长时间诱导,低浓度Cu和高浓度Zn显著增加CAT酶活;经过1d和8d诱导后,Pb使CAT酶活性显著提高.