不同分离方法及培养条件对兔骨髓间充质干细胞生长增殖及生物学特性的影响

背景:目前用于分离骨髓间充质干细胞的方法主要有全骨髓贴壁法、密度梯度离心法、流式细胞仪分离法、免疫磁珠法,后两种方法可获得较为纯化的骨髓间充质干细胞,但对细胞活性影响较大,甚至导致细胞完全失去活性。目的:观察不同分离方法、培养条件下,兔骨髓间充质干细胞生长增殖及生物学特性的变化。设计、时间及地点:细胞学体外对比观察,于2006-01/2007-06在中国医科大学附属盛京医院感染病实验室完成。材料:日本雄性大耳白兔3只,由中国医科大学实验动物中心提供。Mesen Cult干细胞培养基为Vancouver BC公司产品,DMEM/F12(1∶1)培养基、LG-DMEM培养基均为Hyclone公司产品。方法:无菌抽取兔髂前上棘骨髓,采取两种方法分离骨髓间充质干细胞。全骨髓贴壁分离法是将骨髓液注入等体积的Hanks液中,4℃1000r/min离心5min,弃上清,用Hanks液重复洗涤。Percoll密度梯度分离法是将相当于2倍骨髓液体积的1.073g/mL Percoll分离液加入15mL无菌离心管内,再将抗凝的骨髓沿管壁缓慢加至分离液面上,4℃800r/min离心30min,吸取分离液面上的白色云雾状单个核细胞层,用无血清L-DMEM培养液冲洗。将分离的骨髓间充质干细胞浓度调整为1×106,设立3组,分别加入MesenCult干细胞培养基、DMEM/F12培养基、L-DMEM培养基,各组培养基中均含有20%的胎牛血清、100u/mL青霉素、100u/mL链霉素,于37℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度培养箱中培养。主要观察指标:不同分离方法、培养条件对细胞形态、生长特征、增殖的影响,细胞超微结构变化,传代后冻存复苏情况。结果:全骨髓贴壁分离法1周后可见少许贴壁细胞伸出伪足,10～12d形成散在细胞集落,16～18d融合成单层;Percoll密度梯度分离法培养1～2d后可见部分细胞贴壁,5～7d形成散在细胞集落,2周后融合成单层并铺满平底。不同培养条件下的第3代骨髓间充质干细胞,MesenCult组细胞增殖能力、贴壁率、BrdU标记指数均略优于DMEM/F12组、LG-DMEM组,但差异无显著性意义(F=0.179,P>0.05;F=0.098,P>0.05;χ2=0.39,P>0.05)。透射电镜下可见核仁,细胞器少,为低分化的幼稚细胞。复苏第9代冻存的细胞,4h后贴壁率约60%,细胞增长活跃。结论:Percoll密度梯度法和全骨髓贴壁法分离的兔骨髓间充质干细胞,前者可获得较均匀一致的单核细胞,在细胞增殖、清除造血细胞干扰等方面明显优于后者;MesenCult、DMEM/F12、LG-DMEM培养液均适用于兔骨髓间充质干细胞的培养;细胞冻存复苏后生长增殖状况良好。

基于职业发展的学生岗前素质培养研究

本文结合高职院校的实际，试图以工作岗位和职业特点为切入点，探索学生就职前的职业素质教育新途径，为高职院校全面、有效地开展职业素质教育提供新的思路和操作经验。

子宫内膜离子通道对子宫内膜容受性的影响

子宫内膜容受性是自然妊娠和辅助生殖技术成功妊娠的关键因素之一。子宫内膜离子通道是调节子宫内膜接受性和胚胎植入的重要方法。子宫内膜接受性是指在一定的时间内,胚囊能够定位、黏附并穿透子宫内膜,从而引起子宫内膜间质的一系列变化,即胚胎植入的能力。离子通道的异常表达可导致子宫内膜接受损伤和(或)植入失败。进一步研究探讨子宫内膜离子通道对子宫内膜容受性的影响,可以更好地了解胚胎植入的复杂过程,并为诊断和治疗植入失败提供新的目标。本文就离子通道对子宫内膜容受性的影响进行综述。

自拟补肾活血方治疗多囊卵巢综合征月经过少合并月经稀发的临床观察

目的观察自拟补肾活血方对多囊卵巢综合征月经过少合并月经稀发患者的临床疗效。方法选取2019年1月—12月就诊于河北省中医院的多囊卵巢综合征月经过少合并月经稀发患者60例,按照随机数字表法将其分为两组,各30例。治疗组给予自拟补肾活血方,对照组给予右归胶囊,均服药3个月经周期。观察两组患者在月经失血图(PBAC)评分、月经周期、中医证候积分和临床疗效方面的差异。结果治疗后,两组患者的PBAC评分均较治疗前升高,中医证候积分均较治疗前降低,且治疗组PBAC评分显著高于对照组,中医证候积分显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后,治疗组月经周期较治疗前缩短(P<0.05),对照组月经周期治疗前后差异无统计学意义(P>0.05),治疗组治疗后月经周期显著短于对照组(P<0.05)。治疗组临床疗效显著优于对照组(P<0.05)。结论自拟补肾活血方治疗多囊卵巢综合征月经过少合并月经稀发效果显著,能明显改善患者月经血量、月经周期、中医证候。

自拟除湿清热止血方治疗经间期出血湿热证的临床疗效研究

目的:探讨应用自拟除湿清热止血方治疗经间期出血湿热证患者的临床疗效。方法:选择就诊于河北中医学院第一附属医院妇科门诊的经间期出血属湿热证的患者50例随机分为两组,观察组给予自拟除湿清热止血方口服,对照组给予优思明口服,两组均治疗3个月经周期;治疗前后依照患者的病情状况进行中医证候评分,并观察临床综合疗效、止血情况、不良反应等,对实验所得的数据进行统计分析,并对结果进行解释及讨论。结果:①观察组与对照组治疗前后证候积分差异均有统计学意义(P<0.05),且两组治疗后的中医证候积分差异有统计学意义(P<0.05);②观察组与对照组综合疗效总有效率分别为88%、80%(22/25、20/25),两组综合疗效的分布无统计学差异(P>0.05);③观察组与对照组止血疗效总有效率分别为92%、88%(23/25、22/25),两组止血疗效分布无统计学差异(P>0.05);④观察组与对照组不良反应发生率分别为4%、32%(1/25、8/25);两组患者不良反应发生情况差异有统计学意义(P<0.05)。结论:应用自拟除湿清热止血方治疗经间期出血湿热证效果良好,虽与口服避孕药(优思明)综合疗效及止血效果相当,但用药时间稍短,副作用小,且能从根本上调节患者身体机能,缓解患者伴随症状,故对治疗经间期出血湿热证有较大的推广价值。

中医药防治卵巢过度刺激综合征的临床研究进展

卵巢过度刺激综合征(OHSS)是辅助生殖技术(ART)的一个重要并发症,现代医学尚无特效医治措施,目前临床上多以预防为主,辅以对症治疗。中医药治疗方法多样,疗效显著。兹对近年来中医药防治OHSS的临床研究进展进行综述。