超抗原VEGF-SEA融合基因的克隆与表达

目的:构建血管内皮生长因子-葡萄球菌肠毒素A(VEGF-SEA)基因的原核表达质粒,获得VEGF-SEA融合蛋白。方法:制备VEGF-SEA基因片段,插入pET40b构建重组质粒pET40b-VEGF-SEA,经序列分析正确后转化大肠杆菌BL21(DE3),进行IPTG诱导表达蛋白。用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达蛋白的相对分子质量及表达形式,并对产物采用His·Bind Buffer kit试剂盒纯化。结果:获得VEGF-SEA基因片段长1130bp,经序列分析与预期完全一致,其表达出目的蛋白的大小约为66.2ku,以包涵体形式表达,经纯化,纯度达到90%以上。结论:表达载体pET40b-VEGF-SEA构建成功,VEGF-SEA融合蛋白获得高效表达,本实验为进一步研究VEGF-SEA蛋白的活性及其功能,探讨超抗原抑制肿瘤生长作用奠定了基础。

人细胞毒性T淋巴细胞TALL-104抗癌细胞活性的检测

检测人细胞毒性T淋巴细胞TALL-104对癌细胞的杀伤活性以及此杀伤活性对白细胞介素-2的依赖性,动态观察其体外增殖能力。用台盼兰拒染法计算细胞扩增倍数;用MTT法检测细胞毒杀伤活性,实时观察细胞的杀伤过程。结果表明,在200 IU/ml IL-2刺激下,TALL-104细胞增殖能力较强;在效靶比5∶1,作用时间为24 h,TALL-104细胞表现出对癌细胞MCF-7和A-431较高的杀伤率分别为50.4%和69.5%;当作用时间在72 h以内,效靶比不高于10∶1时,杀伤率随作用时间和效靶比的增加而明显升高(P<0.05);最大杀伤率分别为79.8%(MCF-7细胞)和90.4%(A431细胞)。因此,TALL-104细胞体外增殖能力较强,其细胞毒活性不严格依赖于IL-2的存在。