蛇苔细胞色素C(Cyt C)的序列分析及功能预测

通过核酸序列比对,在蛇苔cDNA文库中获得细胞色素C(Cyt C)基因序列,并对其编码的蛋白质产物从同源性、氨基酸组成、理化性质、亚细胞位点、结构和功能等进行生物信息学分析和预测。结果表明,该cDNA序列具有完整的开放阅读框(ORF,104～442bp),推测编码蛋白为112个氨基酸,与向日葵、荞麦、玉米等Cyt C存在着较高的保守性(相似性分别为84%、85%和84%),同属于细胞色素C超家族;蛇苔Cyt C蛋白的分子量为11998.7Da,不含信号肽,成熟的Cyt C起始于Ala2,其活性位点为Cys23、Cys26、His27和Met89;对蛋白质的翻译后修饰预测表明Ala2存在乙酰化修饰,Lys81和Lys95分别进行三甲基赖氨酸修饰。这些特点与其他植物Cyt C保持一致,表明该基因为蛇苔cyt c基因,在进化上相对保守。

大肠杆菌TOP10F’中重组质粒pBAD/gⅢA-NTF2稳定性考察

本实验考察了基因工程菌E.coliTOP10F’重组质粒pBAD/gⅢA-NTF2的稳定性。结果表明,该基因工程菌在连续传代30代后,质粒的目的基因片断没有缺失,具有结构稳定性;在无抗生素选择压力下,经传10代后,菌株的质粒没发生质粒丢失现象,20代后各代菌种质粒保有率低于100%,但50代后的菌种质粒保有率仍高达88%。因此,表现出一定的分离稳定性。该基因工程菌在优化培养基和优化条件下的整个发酵过程中,始终表现出良好的结构和分离稳定性。

蛇苔过氧化物酶基因的序列分析与功能预测

过氧化物酶在生物界分布极广,在细胞代谢的氧化还原过程中起重要的作用。为深入研究蛇苔过氧化物酶的理化性质及功能,对其同源性,亚细胞定位,结构和功能等进行了生物信息学预测和分析。结果表明:该序列有1050bp长的开放阅读框,编码349个氨基酸,与拟南芥等的POD相似性较高(相似性为71%)。预测R68、F71、H72、P170、H200和D276为该酶的活性位点,C41与C122、C74与C79、C128与C328、C207与C239形成四对二硫键,对蛋白质的功能、天然构象和稳定性有重要作用,为研究苔类植物过氧化物酶的作用机制和功能等奠定了基础。

珙桐中一个与低温相关基因的克隆及其表达研究(英文)

低温诱导膜蛋白是由低温诱导表达蛋白基因编码的一类疏水性蛋白,在植物抵御寒冷环境时起着一定的保护作用。从珙桐cDNA文库中获得一个未知基因(DiRCI),该基因长539bp,其中包括174bp的开放阅读框,92bp的5′末端非编码区和273bp的3′末端非编码区,编码57个氨基酸残基蛋白,在氨基酸水平上同源性较高的是车前草的低温诱导膜蛋白(登入号:ACA66247.1),其相似性为89.5%。半定量RT-PCR分析发现,25℃以上,该基因在珙桐各器官中基本上均未表达,但经8℃低温处理时,在成熟叶片、叶柄和成熟未萌发的种子中均有表达,但是在根中基本没有表达,进一步研究发现该基因在24h～48h内表达量增多并达到最高值,48h后其表达量逐渐减弱直至消失,说明该基因确实与低温诱导相关,从而初步推测该基因为低温诱导膜蛋白基因。该基因的克隆丰富和保存了珙桐基因资源,并为进一步研究冷胁迫的分子机制奠定了基础。