3种抗糖皮质激素抗体的制备、纯化与鉴定

采用活性酯法合成地塞米松(DEX)、倍他米松(BET)、双氟米松(FLM)3种免疫原和包被原,用免疫原分别免疫2只新西兰大白兔,5次免疫后进行采血获得抗血清。用盐析与DEAE-纤维素离子交换联用的方法纯化抗血清,再用间接酶联免疫法测定抗血清的效价,其中较好的抗血清效价分别高达345600、614400、307200,具有较好的亲和性,可以满足抗原抗体反应的动力学要求。

糖皮质激素ELISA检测方法的建立及群选性抗体的筛选

设计间接竞争ELISA方法,并优化二抗稀释比、竞争时间、PBS溶液的pH值3个条件参数。优化后的地塞米松、倍他米松、双氟米松3种抗体的间接竞争ELISA曲线的IC50分别为2.66、7.36、6.12ng/ml。通过3种抗体的交叉反应来评估其群选特性。结果表明,地塞米松抗体的群选性最强,对双氟米松的交叉反应率高达120%、倍他米松73%、曲安息龙37%、泼尼松龙21%,而对其他3种内源性类糖皮质激素交叉反应率均小于0.1%,然后地塞米松以0.375、0.75、1.5、3.0ng/g分别添加到鸡肉样本中测定回收率,所得回收率在61.3%～80.3%之间,变异系数小于15%。在实际样本检测中,将ELISA方法的测定结果与LC-MS的结果进行比较,两者具有很好的相关性。

微囊藻毒素-LR对小鼠毒性机制的研究

目的:探讨微囊藻毒素-LR(MC-LR)引起小鼠机体损伤可能的作用机制。方法:通过腹腔注射单次给予小鼠30μg/kgbw剂量的MC-LR,测定其在给药后1、4、8h的脏器系数和一些血液生化指标。结果:短时间内(给药后4h)肝脏系数显著增加,肾脏系数变化不明显;血液CAT含量显著上升,BUN先显著上升再显著下降;CAT活力显著上升;SOD变化不明显。结论:MC-LR首先攻击肝细胞,产生大量的自由基,破坏细胞膜,进而损伤了肝细胞,影响氨基酸的代谢,使肝脏充血、肿胀;接着又引发肾功能不全,使肾小管过滤能力降低;最后,随着时间的推移,对机体造成了潜在的永久伤害,但机体的修复功能使这种伤害表观上不可见,即MC-LR对机体造成的损害在一定程度上是可逆的。