Nephrin和Podocin在3种膜性肾病表达中的差异及其意义

目的比较足细胞裂孔膜蛋白Nephrin和Podocin在特发性膜性肾病(IMN)及两种常见继发性膜性肾病V型狼疮性肾炎(LN-V)与乙型肝炎病毒相关性膜性肾病(HBV-MN)中表达的差异,探讨Nephrin和Podocin在膜性肾病发病中的作用。方法选取2005年1月～2008年6月行肾穿刺活检确诊的IMN15例、LN-V12例、HBV-MN9例,另取5例正常肾脏组织作对照,收集尿常规、24h尿蛋白定量、肝肾功能、血脂和尿C3等临床检验指标,肾组织标本行间接免疫荧光激光共聚焦显微镜观察各组足细胞裂孔膜蛋白Nephrin和Podocin表达的改变。结果3组病例24h尿蛋白定量、血清白蛋白、血清肌酐和尿C3差异无统计学意义,LN-V组尿红细胞计数高于IMN组,LN-V组及HBV-MN组血清总胆固醇、三酰甘油低于IMN组;间接免疫荧光激光共聚焦显微镜显示3组膜性肾病Nephrin和Podocin表达均较对照组减弱,但以IMN组最为明显,LN-V与HBV-MN两组间无差别。结论足细胞裂孔膜蛋白Nephrin和Podocin在原发性及继发性膜性肾病中表达均减弱,免疫介导的足细胞损伤所致足细胞裂孔膜蛋白减少可能参与了原发性与继发性膜性肾病蛋白尿的发生;但IMN中Nephrin、Podocin表达减弱较继发性膜性肾病更为明显,推测后者蛋白尿的发生还有其他因素参与。

羟氯喹在风湿免疫病中应用的研究进展

羟氯喹(hydroxychloroquine,HCQ)最初用于治疗疟原虫感染,作用机制与氯喹类似,由于其安全性良好、疗效可靠,现已被广泛用于治疗风湿免疫病,具有抗炎、调节免疫、抗感染等作用。基于HCQ的研究应用现状,本文就其药理作用、作用机制、在风湿免疫病中的应用及妊娠安全性等相关文献进行综述。

Heymann肾炎RAP全长及氨基端融合蛋白表达载体的构建及表达

目的构建大鼠Heymann肾炎致病源RAP全长和氨基端多肽原核融合表达载体,表达并纯化融合蛋白。方法采用RT-PCR法获得RAP全长的cDNA,将其与pGEM-T克隆载体连接并转化,筛选阳性克隆测序;设计针对RAP全长和氨基端的引物进行PCR扩增,获得相应的DNA。纯化后与PGEX-4T-1载体连接,亚克隆到感受态细菌BL21中,经IPTG诱导,表达融合蛋白并纯化,经SDS-PAGE和Western Blot检验。结果酶切分析、PCR及DNA序列测定结果表明成功构建了重组原核表达载体pGEX-4T-1-RAP1083/258,并表达出RAP全长70kD和氨基端36kD的融合蛋白。Western Blot结果显示分别在70、36 kD处出现特异性条带,与理论相符。结论RAP1083/258与pGEX-4T-1融合基因表达载体的成功构建及其融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达,为后续研究RAP不同区段在Heymann肾炎发病机制中的作用奠定了基础。

膜性肾病肾活检组织中TRPC6和podocalyxin表达改变及其意义

目的检测膜性肾病(membranous nephropathy,MN)患者肾活检组织中肾小球足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(transient receptor potential cation channel 6,TRPC6)和podocalyxin的表达和分布,探讨足细胞蛋白TRPC6和podocalyxin在MN蛋白尿发生中的作用。方法采用常规组织病理以及免疫组化检查,并行免疫荧光双套色染色于激光共聚焦显微镜下观察TRPC6、podocalyxin在各组肾组织中表达及分布的改变,以计算机图像分析系统进行半定量分析。结果对照组肾组织podocalyxin沿肾小球毛细血管壁连续均匀分布,阳性荧光信号表达强,MN组表达减弱,且分布不均或节段性缺失,部分呈点状、短线状不连续分布,肾病综合征组较非肾病综合征组减弱更明显;TRPC6在对照组肾小球有一定的表达,沿肾小球基膜呈均匀连续线型分布,MN组TRPC6荧光强度有不同程度增强,且呈点状、团块状不均匀分布,肾病综合征组较非肾病综合征组更明显。结论 TRPC6和podocalyxin在正常肾组织沿肾小球基膜呈连续线状均匀分布;MN患者肾小球内TRPC6表达增加,podocalyxin表达减少,且分布形式亦发生变化,提示TRPC6和podocalyxin等足细胞相关蛋白表达改变及分布异常可能是MN蛋白尿发生的重要病理机制。

膜性肾病肾活检组织中nephrin和podocin表达改变及其意义

目的:检测膜性肾病(MN)患者肾活检组织中nephrin、podocin的表达和分布,分析MN蛋白尿与nephrin和podocin表达改变的关系,探讨肾小球足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin和podocin在MN蛋白尿发生中的作用。方法:选取2005年1月至2008年1月经肾穿刺活检病理确诊为II、III期MN的患者22例,其中肾病综合征组15例(MN-A组),非肾病综合征组7例(MN-B组),临床上排除系统性红斑狼疮、乙肝相关性肾病、糖尿病肾病以及肿瘤等继发性肾脏疾病;另取5例因肾脏肿瘤行一侧肾切除的远端相对正常肾脏组织作为对照(对照组)。收集并分析患者的主要临床表现、内生肌酐清除率(Ccr)、尿常规、24h尿蛋白定量、血清白蛋白(Alb)、血脂等相关临床资料;按常规方法取肾组织制备3μm厚石蜡切片,行HE、PAS、PASM、Masson染色普通光镜以及免疫组化(IgG、IgA、IgM、C3、C4、C1q)检查;各组肾组织行nephrin、podocin及IV型胶原α3链免疫荧光双套色染色,激光共聚焦显微镜下观察nephrin、podocin在两组MN及对照组肾组织中表达及分布的改变,以计算机图像分析系统进行半定量分析。结果:22例MN病理分期分别为II期14例,III期8例;肾小球内免疫球蛋白及补体的沉积以IgG和C3为主,呈颗粒状沿毛细血管袢弥漫性分布。对照组肾组织免疫荧光染色可见nephrin和podocin沿肾小球毛细血管袢呈均匀连续线样分布;MN患者肾小球内nephrin与podocin表达皆明显减弱,免疫荧光强度降低,分布不均,部分区域有节段性缺失,部分由线状分布变成颗粒状分布,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);MN-A组与MN-B组比较,MN-A组肾小球nephrin和podocin的平均表达量均低于MN-B组,差异有统计学意义(P<0.05),且尿蛋白量与nephrin或podocin表达呈负相关。结论:MN患者肾小球内nephrin和podocin表达量均降低,分布形式亦发生改变,部分呈节段性缺失或不连续颗粒状分布,并与尿蛋白排泄量呈负相关,提示nephrin和podocin表达的减少及分布异常可能与蛋白尿发生及蛋白尿程度有关;但其损伤的始动因素仍需进一步探讨。

低蛋白合并α-酮酸饮食对被动型Heymann肾炎大鼠肾小球足细胞Nephrin表达的影响

目的观察低蛋白合并α-酮酸饮食对被动型Heymann肾炎大鼠肾小球足细胞Nephrin表达的影响。方法将40只SD大鼠分为对照组、模型组(PHN组)、低蛋白饮食组(LPD组)和低蛋白合并α-酮酸饮食组(LK组),对照组经尾静脉注射1 mL/100 g生理盐水,其他三组经尾静脉注射1 mL/100 g新西兰大耳兔抗FX1A血清。对照组、PHN组饮食蛋白占饲料质量的10%,LPD组饮食蛋白占饲料质量的5%,LK组饮食蛋白占饲料质量的5%(其中α-酮酸提供1%的蛋白)。4周后检测各组24 h尿蛋白定量、血清肌酐、TG、TC及血清白蛋白,激光共聚焦显微镜免疫荧光检查大鼠肾小球足细胞Nephrin表达情况。结果激光共聚焦显微镜显示,PHN组、LPD组肾小球内Nephrin荧光强度较对照组明显减弱,且部分节段有缺失;LK组肾小球内Nephrin荧光强度较对照组减弱。结论低蛋白合并α-酮酸饮食对被动型Heymann肾炎大鼠具有肾脏保护作用。

乙肝病毒相关性膜性肾病足细胞Nephrin表达的改变

目的:观察乙型肝炎病毒相关性膜性肾病(hepatitis B virus associated membranous nephropathy,HBV-MN)肾小球足细胞Nephrin的表达,以探讨其发病意义。方法:经肾活检病理检查确诊的HBV-MN患者8例及原发性膜性肾病(IMN)患者5例,采用间接免疫荧光激光共聚焦显微镜观察足细胞Nephrin表达的变化。结果:HBV-MN组肾小球内Nephrin荧光强度较IMN组明显减弱,且部分节段有缺失。结论:肾小球足细胞裂孔膜蛋白Nephrin表达降低可能在HBV-MN发病中起一定的作用。

洛伐他汀对肾小球系膜细胞iNOS表达及氧自由基水平的影响

目的观察洛伐他汀对脂多糖(LPS)刺激后大鼠肾小球系膜细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达及细胞培养上清液中羟自由基(·OH),丙二醛(MDA),总超氧化物歧化酶(tSOD)含量的影响。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测LPS作用大鼠系膜细胞后,洛伐他汀在不同时间段对系膜细胞iNOSmRNA表达的影响及分别检测细胞培养上清液中的·OH、MDA、tSOD的含量。结果系膜细胞在正常情况下iNOSmRNA无明显表达,LPS作用24h后能引起iNOSmRNA的显著表达,洛伐他汀可抑制LPS引起的系膜细胞iNOSmRNA的表达。LPS作用于大鼠系膜细胞后,可引起细胞培养上清液中·OH、MDA含量的增加及tSOD含量的减少;加入洛伐他汀后细胞培养上清液中·OH、MDA含量减少,tSOD含量没有明显的变化。结论洛伐他汀能抑制LPS引起的系膜细胞iNOSmRNA表达的增加及下调LPS引起的细胞培养上清液中·OH、MDA含量的增加。

类风湿关节炎患者发生骨质疏松的危险因素分析及风险预测模型建立

目的:研究类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者发生骨质疏松的危险因素,并建立列线图预测模型。方法:共纳入283例RA患者,以8∶2的比例随机分成建模组(n=226)和验证组(n=57),分析RA患者发生骨质疏松的危险因素,建立预测模型。采用Bootstrap法对模型进行内部验证,验证组进行外部验证。利用ROC曲线的AUC和校准曲线对预测模型进行评价。结果:性别(P=0.046)、年龄(P=0.016)、病程(P=0.004)、红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)(P<0.001)和钙离子(calcium ion,Ca^(2+))浓度(P=0.004)是RA患者发生骨质疏松的独立危险因素(P<0.05)。根据以上危险因素,建立预测RA患者发生骨质疏松的列线图模型。校准曲线提示,建模组和验证组的预测值与实测值基本相符。建模组AUC为0.83,95%CI:0.78~0.88,验证组AUC为0.86,95%CI:0.78~0.88,表明此模型具有较好的预测效果。结论:以年龄、性别、病程、ESR及Ca^(2+)为预测因子构建的列线图模型可有效预测RA患者发生骨质疏松的概率。

Podocalyxin在各型肾病中的研究进展

足细胞,即肾小球脏层细胞,其足突同毛细血管内皮细胞和肾小球基底膜构成了肾小球的滤过屏障,足细胞属于高度分化细胞,损伤后不易再生。足细胞表面表达多种蛋白,其中Podocalyxin(PCX)是足细胞主要的特异蛋白,是肾小球主要带负电荷的蛋白分子,组成肾小球基底膜的电荷屏障,PCX蛋白在足细胞的成熟过程中固定于肾小球足细胞顶端,当肾脏损伤时,足细胞形态发生变化,如足突的消失、融合、收缩等,胞体的减少、假囊肿的形成,直至与肾小球基底膜剥离,脱落至肾小囊中随尿液排出。本文主要探讨PCX在各种肾病损伤中的研究进展。

类风湿关节炎的治疗新进展

类风湿关节炎是一种常见的全身自身免疫性疾病,可引起关节肿痛、畸形及不同程度的残疾,影响患者的生活质量。随着对发病机制的深入研究,出现了越来越多的治疗类风湿性关节炎的药物,除非甾类抗炎药、糖皮质激素及传统合成改善病情抗风湿药物外,生物制剂体现了明显的优势,具有广泛的应用前景。本文重点对类风湿性关节炎治疗药物的新进展进行综述。

树突细胞在狼疮性肾炎发病机制中的研究进展

树突细胞(dendritic cells,DC)是目前已知功能最强的抗原提呈细胞,是连接固有免疫和适应性免疫的桥梁,在调控机体细胞免疫及体液免疫中发挥重要作用。系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种典型的多系统受累的非特异性自身免疫性疾病,肾脏是常见的受累器官。狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)时树突细胞在肾脏中聚集,通过表达多种受体、共刺激分子及炎症因子参与相关的免疫炎症反应,而免疫炎症反应是狼疮性肾炎发生发展的重要机制,树突细胞有望成为治疗肾脏损伤和延缓病程的新靶点。

雷帕霉素在狼疮性肾炎治疗中的研究进展

狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)是系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)发生率最高的并发症,其确切的免疫发病机制尚未完全明了。LN的治疗,目前虽有糖皮质激素和免疫抑制剂广泛使用,但仍有部分患者对这些治疗方法疗效欠佳。雷帕霉素(rapamycin,RAPA)强烈的免疫抑制作用就为LN的治疗提供了新的选择。本文就RAPA在LN治疗中的研究进展作一综述。

Heymann肾炎致病原受体相关蛋白羧基端病理性抗原决定簇的定位

目的：探讨Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎（ＨＮ）致病原受体相关蛋白（ＲＡＰ）羧基端１０８个氨基酸多肽链上是否存在致肾炎的抗原决定簇。方法：应用ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ技术，扩增了编码ＲＡＰ羧基端１０８个氨基酸多肽链的ｃＤＮＡ。应用基因重组及亚克隆技术，高效表达了特异性的ＲＡＰ融合蛋白（ＲＡＰ－ｆｐ），并制备了针对该ＲＡＰ－ｆｐ的多抗血清。结果：该多抗血清体外免疫荧光定位于肾小管刷状缘。体内结合试验的直接免疫荧光和免疫电镜表明，在肾小球足突细胞和肾小球基膜之间，形成了典型的被动型Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎（ＰＨＮ）免疫复合物。结论：本实验说明天然羧基端ＲＡＰ在体内能被循环抗体结合，在原位形成免疫复合物。首次证明了在ＲＡＰ羧基端１０８个氨基酸多肽链上至少存在一个病理性抗原决定簇。

活血化瘀药物在抗Thy-1抗体肾炎中的实验研究

目的 为了探讨活血化瘀中药在抗Thy-1抗体肾炎中的作用及其机理。方法 利用大鼠抗Thy-1抗体系膜增殖型肾炎模型,以强的松为对照,研究中药补肾活血汤、保肾康对此模型的干扰。并以免疫组化法,观察肾组织中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达。结果 实验组大鼠24小时尿蛋白定量、血尿程度、肾脏病理改变及系膜区PCNA阳性细胞数的改变均较模型组明显为轻。结论补肾活血汤及保肾康对系膜增殖型肾炎有治疗作用。

补肾活血汤治疗系膜增生性肾炎的临床研究

目的:探讨活血化瘀中药补肾活血汤对系膜增生性肾炎的疗效及其作用机制。方法:将96例经皮肾穿刺活检证实的系膜增生性肾炎患者分成两组,两组患者在接受一般及对症治疗的同时,治疗组50例用补肾活血汤加苯那普利(洛汀新)治疗,对照组46例加用苯那普利治疗。治疗前及治疗2月后分别观察24 h尿蛋白定量、血尿素氮、肌酐、尿红细胞、尿纤维蛋白原降解产物(FDP)、尿补体C3、尿N-乙酰β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)及尿β2-微球蛋白(β2-MG)的变化。结果:两组治疗前、后24 h尿蛋白定量及尿红细胞均有显著下降。补肾活血汤治疗组总有效率明显高于苯那普利对照组(P<0.05)。治疗组经治疗后尿FDP、尿NAG及尿β2-MG有明显下降,而对照组则下降不明显。结论:补肾活血汤对系膜增生性肾炎具有治疗作用,其作用机制可能与降低尿中FDP有关。

足细胞抗原与肾小球疾病

肾小球足细胞的损伤及其相关蛋白的表达异常是蛋白尿形成的主要原因,足细胞表面抗原在肾小球疾病发病机制中发挥了重要作用。人类膜性肾病第一个足细胞抗原-中性内肽酶以及第一个裂孔隔膜组成分子Nephrin的发现开辟了足细胞研究的新纪元。随着足细胞抗原在肾小球疾病及蛋白尿产生机制中的深入研究,将为临床进一步揭示肾小球疾病的发病机制和寻找特异有效的防治蛋白尿的新的分子靶点提供理论依据。

2种Heymann肾炎受体相关蛋白融合蛋白的制备及其意义

目的:构建Heymann肾炎致病原受体相关蛋白(RAP)全长和羧基端多肽的原核融合表达载体,表达并纯化相应的融合蛋白。方法:通过RT-PCR法获得RAP全长的cDNA,将其与pGEM-T克隆载体连接并转化,对阳性克隆进行测序分析,设计针对RAP全长和羧基端带有EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切位点的特异引物,通过PCR合成RAP全长359个氨基酸和羧基端108个氨基酸的DNA。纯化后与含有GST的pGEX-4T-1载体体外重组连接,亚克隆到感受态细胞BL21中,经IPTG诱导,表达的融合蛋白通过GST-Sepharose 4B亲和层析法纯化,并经SDS-PAGE和Western Blot检测。结果:酶切分析、PCR及DNA序列测定结果表明成功构建了重组原核表达载体pGEX-4T-1-RAP1083和pGEX-4T-1-RAP324,含有重组质粒的大肠杆菌BL21经诱导后表达出RAP全长70ku和羧基端40ku的融合蛋白。Western Blot结果显示分别在分子质量70ku、40ku处出现特异性条带,与理论相符。结论:成功构建了RAP1083、RAP324与pGEX-4T-1融合基因表达载体,融合蛋白在大肠杆菌中高效表达,为后续研究Heymann肾炎的分子发病机制奠定了基础。

172例原发性肾小球疾病血尿肾活检检临床病理分析

目的:探讨原发性肾小球疾病血尿的病理类型及其与临床的关系,明确肾穿刺对肾小球性血尿的诊断及指导临床治疗的价值。方法:172例原发性肾小球疾病血尿分为4组,A组单纯性发作性肉眼血尿45例,B组发作性镜下血尿44例,C组持续性肉眼血尿36例,D组持续性镜下血尿47例。所有患者均行肾穿刺活检,对肾组织行光镜、免疫病理、电镜检查。分析病理类型与临床表现之间的关系。结果:172例肾小球性血尿患者病理分型:非IgA系膜增生性肾炎(32.55%)、IgA肾病(40.70%)及轻微病变(9.87%)共计143例(83.13%),为原发性肾小球疾病血尿的主要类型。本组患者经肾穿刺活检后均得到明确诊断,其中46例更正了原诊断。结论:临床与病理相结合的诊断正确率远高于单纯临床诊断。对单纯血尿患者,尤其是持续性肉眼或镜下血尿患者行肾穿刺活检是必要的。