结核病免疫机制及疫苗研究进展

结核病是一种棘手的重大传染病。虽然存在一些有一定疗效的治疗药物,亦有预防性疫苗———卡介苗(BCG);但结核病仍在世界范围流行,且发病率和病死率居高不下。结核病的免疫病理机制及疫苗研究近年来取得了一定的进展。结核分枝杆菌通过Toll样受体(TLR)等模式识别受体,激活巨噬细胞的天然免疫反应,清除细菌和调节获得性免疫反应。包括主要组织相容性复合物(MHC)限制的CD4+和CD8+T细胞,以及CD1限制的T细胞和γδT细胞参与抗结核获得性免疫反应,其中记忆性T细胞与调节性T细胞具有重要的免疫调节作用。但是,人们对结核病发生机制的认识仍然不足,限制了对结核病治疗药物和新型疫苗的研发。由于BCG对成人缺乏有效的保护力,故研制新型的结核疫苗是预防结核病的当务之急。当前处于实验阶段的候选疫苗包括重组BCG、减毒结核分枝杆菌和可用于加强BCG的亚单位疫苗,后者又包括痘苗病毒载体疫苗、核酸疫苗、新型佐剂辅助的蛋白疫苗。目前可行的疫苗免疫策略主要是使用BCG或其他疫苗初次免疫,然后选择亚单位疫苗加强免疫。然而,疫苗的免疫策略、免疫剂量、免疫途径、强化免疫次数和免疫时机都有待研究。反映疫苗保护力的免疫指标不明确、很难确定哪类疫苗进入临床试验、缺乏临床试验场地、疫苗效果评价需要很长时间及耗资巨大,增加了结核疫苗研究的难度和风险。

初发Graves′病患者^(131)碘治疗前后肾功能指标的观察与分析

探讨初发Graves′病患者^(131)碘治疗前、后肾功能指标的变化及意义,从而判断Graves′病肾功能情况,并了解其与甲状腺功能的相关性。采用化学发光免疫分析法,测定42例初发Graves′病患者^(131)碘治疗前、后血清FT3、FT4、sTSH、β2-MG及尿液β2-MG、白蛋白,并和30例健康对照组进行比较。^(131)碘治疗前血FT3、FT4、β2-MG及尿β2-MG、Alb明显升高,与治疗缓解后及对照组相比有显著差异(均P<0.05);治疗缓解后与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论可知是从降低医疗成本角度,^(131)碘治疗比内科药物治疗和手术治疗具有明显的优势。

结核分枝杆菌ESAT6-RpfE亚单位疫苗的构建与免疫原性研究

目的构建Mtb ESAT6-RpfE(早期分泌抗原靶6-复活促进因子E)的原核表达载体,表达和纯化融合蛋白,并对其免疫原性进行研究。方法分别以Mtb H37Rv及临床株的基因组为模板,PCR扩增esat6、rpfE基因,依次插入pET30a质粒并在大肠埃希菌BL21中表达纯化ESAT6-RpfE蛋白。采用完全随机的方法将C57BL/6小鼠分组,每组6只,共进行了两次实验,第一次实验分为ESAT6、RpfE、ESAT6-RpfE、PBS、BCG五组,佐剂为二甲基三十六烷基胺(dimethyl-dioctyldecyl ammonium bromide,DDA);第二次实验有ESAT6-RpfE、PBS、BCG三组,佐剂为DPG[DDA+poly(I:C)+明胶]。分别于0、3、6周皮下免疫C57BL/6小鼠。末次免疫8周后,用特异性抗原ESAT6及RpfE刺激,检测其分泌IFN-γ的水平;ELISA检测血清特异性抗体IgG2b、IgG1。结果PCR扩增的esat6、rpfE基因序列与GenBank报道一致;融合蛋白主要以包涵体形式表达;亚单位疫苗免疫动物能够分泌RpfE特异性IFN-γ的脾淋巴细胞数量[(427.13±100.46)]显著高于PBS组(26.13±22.34;q=7.924,P<0.001);分泌ESAT6刺激特异性IFN-γ的脾淋巴细胞数量[(506.50±140.40)]明显高于PBS组(19.25±14.75;q=11.36,P<0.001)和BCG组(125.5±46.41;q=8.882,P<0.001)。ESAT6-RpfE免疫组能诱导产生特异性抗体。结论成功构建并表达ESAT6-RpfE融合蛋白。此融合蛋白可在C57BL/6小鼠中诱导抗原特异性的免疫应答,可作为新型结核亚单位疫苗的候选疫苗予以进一步研究。

二甲基三十六烷基铵及卡介苗多糖核酸佐剂在结核亚单位疫苗加强BCG免疫中的效应研究

目的 探讨二甲基三十六烷基铵（dimo-thylidioctyl ammonium bromide,DDA）和卡介苗多糖核酸（BCC-PSN）佐剂在结核融合蛋白疫苗加强卡介苗（BCG）免疫中的不同免疫辅助效应.方法 选择DDA、BCG-PSN作为融合蛋白AMM（Ag85B-MPT64190-198-Mtb8.4）的佐剂,在BCG初免小鼠后,AMM疫苗加强免疫两次,其中一组联合使用两种佐剂（DDA/BCG-PSN）,另一组单独以DDA作为佐剂,同时设立BCG或磷酸缓冲液（PBS）免疫组为对照.应用ELISA及ELISPOT检测免疫小鼠的体液与细胞免疫反应,最后一次加强免疫后第12周,以H37Rv尾静脉攻毒并检测小鼠肺脾组织细菌载量和病理改变,评价不同佐剂疫苗的保护效果.结果 在BCG初免基础上,联合佐剂组（AMM/DDA/BCG-PSN）和单独佐剂组（AMM/DDA）加强免疫两次后,脾脏淋巴细胞经抗原Ag85B和PPD（purified protein derivative）刺激后,皆可产生分泌较BCG组高的IFN-γ.毒力株攻击后菌落形成单位（colony-forming unit,CFU）计数显示,联合佐剂组（AMM/DDA/BCG-PSN）脾脏荷菌量少于PBS组和BCG组（P〈0.05）;而单独佐剂组（AMM/DDA）肺部荷菌量少于PBS组和BCG组（P〈0.05）.组织病理分析结果 表明AMM/DDA/BCG-PSN组肺组织病理损伤较轻,而AMM/DDA组病理损伤个体差异较大.结论 DDA是较为理想的结核亚单位疫苗佐剂,能诱导较强的细胞免疫和免疫保护作用;BCG-PSN可能具有免疫调节作用,可以减轻免疫病理损伤.