结合区部分缺失的纤维素酶基因的克隆与表达及酶学性质初步测定

从梧桐腐枝上分离到一株可降解纤维素的细菌菌株,发现克隆于该菌株的内切纤维素酶基因(egt)结合区部分缺失(8 bp),导致移码并提前终止,全长1 146 bp,编码381个氨基酸,分子量为40.06 kD.克隆含有完整结合区的基因(eg),通过酶学性质研究,表明两者均仅具有羧甲基纤维素钠活性,纤维素酶EGT和EG的最适反应温度分别为45 ℃和55 ℃,EGT更加耐高温.最适pH均为7.0,都具有较好的pH稳定性. Mn^2+、Fe^2+对两者具有激活作用,Zn^2+、Ca^2+、K ^+、NH4^2+ 和Mn^2+对其都具有抑制作用.EGT的 K m=3.09 mg/mL,比酶活为98.4 U/mg;EG的 K m=8.654 mg/mL,比酶活为53.53 U/mg. EGT结合区的部分缺失导致酶与底物的亲和能力更好,同时比酶活提高183%,水解能力更强.

一株极端嗜盐真菌的筛选及初步研究

利用含10%Na Cl的查氏培养基从晒干海鱼上分离到一株极端嗜盐真菌.为了对真菌进行理化鉴定,对分离菌株MF1和购买的标准菌株Phialosimplex salinarum DSM 27530在不同培养基上的培养特征、显微形态特征、耐盐性和在15%Na Cl的条件下的碳源利用能力进行分析检测,发现分离菌株生长盐度范围为0%33%,最适生长盐度为15%,并能够在15%Na Cl的条件下利用淀粉、脂肪、木质素、脱脂奶粉或纤维素为唯一碳源生长,说明该菌株在该条件下产生了相应的酶系.随后,对分离菌株和标准菌株的8个位点基因序列进行克隆与测序,最后进行多基因联合系统发育分析,确定分离菌株MF1属于Phialosimplex.由于分离菌株具有极高的盐度耐受能力和在高盐环境下产生丰富酶系的特性,因此该菌株在耐盐机理和工业应用上具有潜在的研究和应用价值.

劲酒传统发酵过程中可培养功能细菌群落的动态变化初步研究

运用稀释培养方法,将小曲清香型劲酒传统发酵过程中入池、发酵第四天和出窖时酒醅中的可培养细菌分为九大功能群(蛋白质降解细菌群、淀粉降解细菌群、纤维素降解细菌群、木质素降解细菌群、脂肪降解细菌群、产乙酸细菌群、产乳酸细菌群、产丁酸细菌群和产己酸细菌群),探究小曲清香型劲酒传统发酵过程中各种可培养功能细菌群的组成以及动态变化.结果表明,数量较多的优势功能细菌群为产乙酸细菌群、产乳酸细菌群和产丁酸细菌群.对分离的各功能群的细菌进行核糖体RNA亚基编码基因(16SrDNA)序列分析,发现小曲清香型劲酒传统发酵过程中的可培养细菌主要为乳酸菌和芽孢杆菌两大类,分别属于3个属、10个种.

发酵液中乙醇含量的测定方法

在重铬酸钾比色法的基础上,建立了一种测定发酵液中乙醇含量的分析方法。结果表明,回收率为98.58%~102.14%,相对标准偏差(RSD)为1.52%(n=6);测定了5种样品中的乙醇含量,该方法与生物传感器法相比,没有显著差异(P>0.05)。