红杜仲不同乙醇浓度提取物对HaCaT细胞抗氧化作用的比较及其抗氧化机制的研究

目的本研究对红杜仲不同乙醇浓度提取物抑制H_2O_2诱导的HaCaT细胞氧化应激损伤作用进行筛选。方法以不同浓度乙醇进行回流提取分别获得了30%、50%、70%及95%乙醇提取的四种红杜仲醇提取物(Parabarium micranthum ethanol extract,PEE),利用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-Diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl,DPPH)法测定其体外清除自由基的能力。以人永生化表皮细胞HaCaT为研究对象,通过不同浓度H_2O_2处理细胞并筛选以200μmol/L作为建立H_2O_2诱导的氧化应激损伤模型的最适浓度。设立对照组、H_2O_2损伤组和红杜仲-H_2O_2组。通过微板法和比色法测定内源性抗氧化酶活力及细胞存活率,2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(2,7-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光探针检测细胞内氧自由基(reactive oxygen species,ROS)水平,逆转录PCR测定Nrf2 mRNA表达量。结果不同乙醇浓度提取的PEE在体外均具有清除DPPH自由基的作用,效果最强的70%乙醇提取的PEE的IC(50)为7.6 mg/L;在细胞水平上,H_2O_2诱导使得HaCaT细胞内抗氧化酶SOD及CAT活力降低,50%、70%及95%乙醇提取的PEE能够显著提高细胞内抗氧化酶活力。其中70%乙醇提取的PEE的作用最为显著,抗氧化酶活力的提高表现出剂量依赖性,并且能显著提高细胞存活率、降低细胞内ROS的水平(与氧化应激组比,P<0.05或P<0.01)。同时,70%乙醇提取的PEE能够显著诱导抗氧化相关信号通路基因Nrf2 mRNA的表达。结论 70%乙醇提取的PEE可能通过激活Nrf2抗氧化信号通路,提高抗氧化酶活性,降低ROS水平,从而具有保护HaCaT细胞免受H_2O_2诱导的氧化损伤作用。

红杜仲的美白活性及其途径研究

目的研究红杜仲的不同乙醇浓度醇提物对黑色素瘤B16细胞系酪氨酸酶活性、黑素合成的影响,初步探讨红杜仲作为皮肤美白剂或色素沉积药物的可行性。方法以不同浓度乙醇进行回流分别获得30%、50%、70%、95%乙醇提取的得到4种红杜仲醇提物(PEE30、PEE50、PEE70、PEE95),选取对蘑菇酪氨酸酶抑制活性最强的提取物;再以B16造模,采用MTS法、Na OH裂解法、L-DOPA氧化法分别测定其对B16细胞的影响;Western blot检测PEE作用后Tyrosinase、TRP-1蛋白表达水平的变化。结果各红杜仲醇提物在体外均具有抑制蘑菇酪氨酸酶的作用,效果最强的为PEE70。在不影响B16细胞的浓度内,PEE70明显降低B16细胞酪氨酸酶活性和黑素的合成量(P<0.001)。Western blot结果表明,PEE70能够显著抑制黑素合成相关蛋白Tyrosinase、TRP-1的表达。结论 PEE能直接抑制B16细胞黑色素的合成,可用于美白产品或者色素沉积药物的开发,且上述变化通过抑制酪氨酸酶活性来完成。