葡萄糖3-脱氢酶产生菌的筛选和产酶培养

从土壤中筛选分离得到1株葡萄糖3-脱氢酶产生菌,经生理生化初步鉴定为产酸克雷伯菌(Klebsiella oxyto-ca)。将菌株D8进行产酶优化培养,经过单因素法确定优化培养条件:乳糖为C源,酵母膏为N源,250 mL摇瓶装液量为50 mL,培养基的初始pH为7,33℃培养时G3DH酶比活力最高,达到1.45 U。

基因工程菌糖基转移酶的分离纯化与酶学性质研究

将含重组质粒pET28b-Val G在BL21（DE3）宿主菌中成功表达,以镍柱亲和层析、超滤脱盐及真空冷冻干燥结晶获得糖基转移酶并初步研究酶学性质。在10-40°C或pH 5-11下,该酶还能保持较好的稳定性,且最适反应温度及p H分别为30°C与8.0。1 mmol/L金属离子Ca^2＋、Mg^2＋、Mn^2＋、Co^2＋对酶反应有着显著的促进作用,而Cu^2＋、Zn^2＋对酶反应有强烈的抑制效果。当酶反应进程中酶活达到最大时,底物及产物的最适浓度分别为8μmol/L与2μmol/L。以底物井冈羟胺A足量为前提,双倒数作图法表明Km B为35.275μmol/L,Vm为0.153μmol/（L·min）,酶对井冈羟胺A的亲和力较尿苷二磷酸葡糖（UDPG）好,因此在全细胞酶催化过程中对提高UDPG供应量的研究是有必要的。