雪灵芝粗多糖对小鼠免疫细胞增殖与功能的体外激活作用

为观察雪灵芝粗多糖(Arenaria kansuensis crude polysaccharide,AKCP)对体外培养的小鼠脾淋巴细胞、NK细胞和腹腔巨噬细胞增殖与功能的影响。以不同浓度AKCP作用于体外培养的上述细胞48 h,采用中性红吞噬实验及NO释放实验检测巨噬细胞功能,MTT法检测脾淋巴细胞增殖及NK细胞杀伤活性,流式细胞术检测脾淋巴细胞CD3^+、CD4^+、CD8^+亚群,ELISA法检测脾细胞培养上清中IL-2和IFN-γ水平。结果显示,AKCP各浓度组小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性和NO释放量、脾淋巴细胞刺激指数及培养上清中IFN-γ水平、NK细胞杀伤活性均高于空白对照组(P<0.05);AKCP中浓度组脾淋巴细胞CD3^+、CD4^+亚群及培养上清中IL-2水平也明显升高(P<0.05)。提示AKCP对小鼠免疫细胞的增殖与功能具有体外激活作用。

雪灵芝多糖的分离纯化及免疫活性评价

为分离纯化雪灵芝(Arenaria kansuensis)多糖,并对纯化组分进行分子量测定、单糖组分分析及免疫活性评价。实验采用水提醇沉法提取雪灵芝粗多糖(Arenaria kansuensis crude polysaccharide, AKCP);以DEAE-52纤维素柱对AKCP进行分离纯化,获得5个雪灵芝多糖组分AKP-1～AKP-5,进一步采用葡聚糖凝胶G-75柱对AKP-2进行分离纯化获得AKP-2a多糖组分。苯酚-硫酸法测定AKCP、AKP-2及AKP-2a的总糖含量分别为52%、70%和79%;凝胶渗透色谱-十八角度激光光散射(GPC-MALS)法检测AKP-2a的重均分子量Mw为2.07×10~5Da、数均分子量Mn为9.838×10~4Da;HPLC法检测AKP-2a是由半乳糖醛酸、甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、岩藻糖10种单糖组成,其摩尔比为1∶0.25∶0.01∶0.20∶0.11∶0.25∶0.61∶0.07∶0.21∶0.12;以MTT法检测体外培养小鼠脾淋巴细胞增殖,AKCP、AKP-2及AKP-2a各浓度组SI水平,均明显高于对照组(P<0.05)。经NO释放实验及IFN-γELISA检测,AKP-2a各浓度组小鼠腹腔巨噬细胞培养上清中二者的水平,较对照组呈浓度依赖性增高(P<0.01)。综上结果,本研究通过分离纯化,获得了总糖含量较高的雪灵芝多糖AKP-2a组分,初步确定其分子量范围及单糖组成,并证实其具有激活淋巴细胞增殖、促进巨噬细胞功能的生物活性。

藏药雪灵芝粗多糖对S180荷瘤小鼠肿瘤生长的影响

目的观察藏药雪灵芝粗多糖对S180荷瘤小鼠肿瘤生长的影响。方法建立S180荷瘤小鼠模型,将其随机分为对照组,环磷酰胺(CTX)组,AKCP高(AKCP-H)、中(AKCP-M)、低剂量(AKCP-L)组,连续给药10 d后处死,取瘤称重并计算抑瘤率;HE染色法观察瘤组织形态;荧光定量PCR及Western blot法检测瘤组织中增殖相关因子Cyclin D1、PCNA、Ki67,凋亡相关因子Bcl-2、Bax的m RNA和蛋白的表达。结果 CTX、AKCP-H、AKCP-M、AKCP-L组瘤体质量低于对照组(P<0.05),抑瘤率分别为58.033%、25.574%、31.803%、23.279%;HE染色显示,CTX组及AKCP各剂量组肿瘤组织出现不同程度坏死区及间质增多现象;与对照组比较,各实验组Cyclin D1、PCNA、Ki67、Bcl-2、Bax、Bcl-2/Bax的m RNA及蛋白表达无显著差异(P>0.05)。结论雪灵芝粗多糖在一定程度上抑制了S180荷瘤小鼠肿瘤生长,可能具有抑瘤作用。

雪灵芝粗多糖对S180荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的:建立S180荷瘤小鼠模型,探讨雪灵芝粗多糖(AKCP)对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法:Balb/c小鼠随机分为6组:正常组、模型组、香菇多糖(LNT,0.25 mg/kg)组和AKCP-H(200 mg/kg)、AKCP-M(100 mg/kg)、AKCP-L(50 mg/kg)剂量组,除正常组外,其余5组建立S180荷瘤小鼠模型。各组小鼠连续给与蒸馏水或药物8天后,观察瘤重、体重增率及免疫脏器系数,检测脾淋巴细胞增殖与CD3^(+)/CD4^(+)/CD8^(+)T细胞亚群、NK细胞杀伤活性,以及IL-2、TNF-α、IFN-γ在脾细胞中的mRNA表达及血清中含量等免疫功能指标。结果:AKCP-H组和LNT组瘤重显著低于模型组,二者抑瘤率分别为36.64%和26.35%。AKCP-H组的体重增率低于正常组和模型组。与正常组比较,模型组脾淋巴细胞增殖、NK细胞杀伤活性、CD3^(+)T细胞(包括CD3^(+)/CD4^(+)和CD3^(+)/CD8^(+))、血清IFN-γ水平均明显降低,而CD4^(+)/CD8^(+)细胞比例和血清TNF-α显著升高。AKCP-H、AKCP-L组和LNT组脾淋巴细胞增殖和NK细胞杀伤活性高于模型组。AKCP各剂量组CD3^(+)/CD8^(+)亚群高于模型组且CD4^(+)/CD8^(+)比值低于模型组,并恢复到正常组水平;AKCP-H组和LNT组脾细胞中IFN-γ的mRNA表达升高,AKCP-M、AKCP-L和LNT组血清IL-2、IFN-γ水平高于模型组。结论:雪灵芝粗多糖对S180荷瘤小鼠免疫功能具有激活作用,进而发挥间接性抑瘤效应。