禽腺病毒血清4型和8b型串联截短Fiber2-Fiber蛋白在毕赤酵母中的优化表达

【目的】在毕赤酵母中构建禽腺病毒(FAdV)血清4型和8b型串联截短Fiber2-Fiber蛋白表达系统,并探索适宜的表达条件。【方法】以前期构建的重组质粒pCold-Fiber2-Fiber为模板,用PCR法扩增Fiber2-Fiber片段,连接pPICZαA载体。经双酶切和测序鉴定后的阳性重组质粒pPICZαA-Fiber2-Fiber电转化毕赤酵母GS115。经MD平板和不同浓度Zeocin抗性筛选后进行PCR扩增和测序鉴定得到阳性菌株;用甲醇诱导表达阳性菌株,72 h后收集蛋白上清进行SDS-PAGE和液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)鉴定。采用单因素变量法对不同pH(5.0、6.0、7.0和8.0)、甲醇浓度(0.5%、1.0%、1.5%和2.0%)、时间(24、48、72和96 h)进行表达条件优化,用SDS-PAGE鉴定,并用间接ELISA和Western blotting验证重组蛋白的反应原性。【结果】成功构建了重组质粒pPICZαA-Fiber2-Fiber,对表达72 h后的上清进行SDS-PAGE发现1条约70 ku的特异条带,经LC-MS/MS鉴定为目的蛋白。串联截短Fiber2-Fiber蛋白的最优诱导条件为pH 6.0、1%甲醇、诱导时间72 h。间接ELISA和Western blotting结果显示该重组蛋白能与FAdV-4和FAdV-8b阳性血清特异性结合。【结论】Fiber2-Fiber串联截短蛋白可在毕赤酵母中稳定表达并具有良好的反应原性,为禽腺病毒双价亚单位疫苗的研发奠定基础。

高钛钢在盐雾环境中的腐蚀行为

研究了高钛结构钢在室内盐雾干、湿循环加速腐蚀环境中的腐蚀行为,并与商用09CuPCrNi耐候钢和新型贝氏体耐候钢进行了对比。结果表明:高钛结构钢在腐蚀前期具有较好的耐腐蚀性能,但当腐蚀45 d后,锈层的保护能力逐渐弱于后两种钢的;因高钛钢具有均匀单一的显微组织,基体内部电位差较小,其初期腐蚀较缓慢;但当钢表面为锈层所覆盖后,因其腐蚀过于均匀,锈层与基体的界面平整,结合不牢固,锈层易脱落,其保护性随腐蚀时间的延长而逐渐减弱。

综合护理在眼科老年性白内障手术护理中的效果及满意度分析

目的分析在眼科老年性白内障手术护理中应用综合护理的效果与满意度。方法选取2019年11月~2020年11月赤峰市医院收治的94例接受手术治疗的老年白内障患者为研究对象,应用方便抽样法将患者分为参照组和研究组,每组47例。对照组患者予以常规护理,研究组患者予以综合护理,比较两组患者护理效果、护理满意度、情绪状态、生活质量、并发症情况。结果研究组护理总有效率高于参照组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组各项护理满意度评分均高于参照组,差异有统计学意义(P<0.05);护理后,研究组各项症状自评量表(SCL-90)评分均低于参照组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组各项生活质量简表(SF-36)评分均高于参照组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组并发症发生率明显低于参照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在眼科老年性白内障手术护理中实施综合护理具有显著的效果,可使护理总有效率增高,能够减轻疾病与手术造成的不良情绪,可促进生活质量与护理满意度提升,同时还可降低并发症的发生率,具有理想的临床应用价值。

禽腺病毒4型fiber-2与8b型fiber截短融合蛋白的原核表达及其免疫原性分析

利用原核表达系统表达Ⅰ群禽腺病毒血清4型(FAdV-4)fiber2和8b型(FAdV-8b)fiber全长蛋白、截短蛋白及二价融合蛋白,并评价其免疫原性。基于FAdV-4 fiber2和FAdV-8b fiber抗原性好的截短片段(FP和BP),利用SOE-PCR构建二价融合片段(BP-FP),分别对截短蛋白、融合蛋白及全长(FL和BL)在大肠杆菌中进行表达,采用SDS-PAGE和Western blot对重组蛋白进行鉴定。纯化后的重组蛋白免疫SPF鸡并攻毒,计算各组存活率、间接ELISA检测免疫鸡血清抗体水平、qPCR检测泄殖腔拭子排毒量和肝脏中细胞因子IL-4、IFN-γ和TNF-αmRNA表达水平以及进行组织病理观察。结果显示:构建的重组质粒均在大肠杆菌中成功可溶表达;BP-FP4组存活率为58.3%,其他组存活率均为100%;全长组(FL组和BL组)抗体水平均高于各自片段组(FP组和BP组),但差异不显著(P>0.05);攻毒后3和7 d C8b组排毒量均显著高于免疫组(P<0.05),攻毒后7 d BP-FP8b组排毒量显著高于BP和BL组(P<0.05),BL组和BP组差异不显著(P>0.05);免疫组IL-4、IFN-γ和TNF-αmRNA表达均显著高于阴性对照组(P<0.05),FL组IFN-γ和TNF-αmRNA表达均显著低于BP-FP4组(P<0.05),FL组和FP组差异不显著(P>0.05),BL组IL-4和IFN-γmRNA表达均显著低于BP-FP8b组(P<0.05)。组织病理观察发现,攻毒组肝脏病变最严重,FP组与BP组次之,FL组与BL组无明显病变。本研究表明FAdV-4 fiber2和FAdV-8b fiber的全长蛋白和截短蛋白免疫保护效果优于融合蛋白,截短蛋白可替代全长蛋白用于制备禽腺病毒亚单位疫苗。

基于牛支原体P48蛋白间接ELISA检测方法的建立

为了建立一种准确快速的牛支原体(Mycoplasma bovis)抗体检测方法,对牛支原体P48蛋白进行原核可溶性表达,采用SDS-PAGE、Western blot对蛋白进行鉴定,将鉴定正确的P48重组蛋白作为抗原,对影响ELISA的各个因素进行方阵优化,建立间接ELISA检测方法,对其特异性、敏感性、重复性进行测试,并进行临床样品检测。结果显示:抗原包被浓度为5μg/mL,4℃包被过夜;10%马血清为最佳封闭液,封闭时间为2 h;一抗最佳稀释度为1∶160,孵育时间为1 h;酶标二抗最佳稀释度为1∶12 000,孵育时间为30 min;最佳显色时间为20 min。表达纯化的P48蛋白可以与牛支原体血清、乳样发生特异反应,建立的间接ELISA方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,与商品化牛支原体ELISA抗体检测试剂盒总体符合率为91.11%。结果表明,本研究建立了一种特异性、敏感性、重复性良好的牛支原体抗体间接ELISA检测方法,为牛支原体病防控及抗体水平检测提供了一种有效方法。

论人教版高中语文教材写作部分的优缺点和教学策略

在新课程改革的推动下,教材改编也几经变化,通过不断地实验、探索,一直在努力的改进当中。在高中语文教学中,写作能力的培养无疑是最重要的一项教学任务,写作不仅可以培养学生的观察能力、思辨能力和语言表达能力,还可以丰富他们的知识储备,有助于提高学生的综合素质。人教版的高中语文教材也已经使用了一段时间,现笔者对教材中写作部分的优缺点和教学策略给出自己的一些建议。

帮胃肠道减龄，中医来助阵

胃肠道是人体内最大的微生态环境,它的正常或失调对人体的健康和寿命有着举足轻重的影响。因此，我们不能坐以待毙，等到胃肠道“年老体弱”了再来“亡羊补牢”，而应该从现在做起，让胃肠道年轻起来。

2018-2019年山东部分地区规模化奶牛场牛病毒性腹泻病毒感染血清学调查

为了了解2018年4月—2019年12月山东省部分地区规模化奶牛场牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的感染情况,采用商品化酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒对山东省13个地市5901份送检样品进行了BVDV抗原检测,879份送检样品(823份血样、56份大缸奶样)进行了BVDV抗体检测。结果显示,所检BVDV抗原样本总阳性率为0.49%、血样BVDV抗体样本总阳性率为75.94%、大缸奶BVDV抗体样本总阳性率为94.64%。菏泽地区BVDV抗原样本阳性率最高,为1.07%;滨州地区血样BVDV抗体样本阳性率最高,为96.77%;德州、聊城、潍坊、日照、威海、泰安地区均在送检奶样中检测到BVDV抗体,样本阳性率达100%。2018年4—6月送检样品BVDV抗原阳性率最高,为1.94%;2019年1—3月送检血样BVDV抗体阳性率最高,为90.91%。中规模牧场送检样品BVDV抗原阳性率最高,为0.79%;大规模牧场送检血样BVDV抗体阳性率最高,为84.47%。结果表明山东地区BVDV的感染情况较为严重,存在地域和季节性差异,应引起有关单位高度重视,本调查以期为山东省牛病毒性腹泻病毒的防控与净化提供帮助。

牛病毒性腹泻病毒E_(60~145aa)^(rns)片段可溶表达及抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗体间接ELISA检测方法,本研究对山东地区规模化奶牛场BVDV主要流行亚型的E^(rns)蛋白进行表位分析,原核可溶表达优势抗原表位片段E_(60~145aa)^(rns),经Western blot及LC-MS/MS鉴定后作为ELISA包被抗原,对影响ELISA试验的各个因素进行优化,并进行特异性、敏感性、重复性试验等。结果显示,间接ELISA方法优化后的条件为:0.25μg/mL抗原包被37℃2 h后4℃过夜,10%马血清封闭时间1.5 h,1∶5稀释一抗孵育1.5 h,1∶8000稀释二抗孵育60 min,显色25 min。该方法特异性、灵敏性及重复性良好,与商品化BVDV抗体检测试剂盒总体符合率为88.04%,符合率良好。本研究建立了一种特异性、灵敏性及重复性良好的BVDV抗体间接ELISA检测方法,为山东地区BVDV防控及临床检测提供了一种有效工具。

规模化肉鸡场化学药物及中药安全用药

现代肉鸡规模化养殖模式下肉鸡场安全用药至关重要,用药安全与否关系到肉鸡的生命安全、生产力的高低、产品质量的优劣和环境保护。本文章对大量规模化肉鸡场进行了调查,对规模化肉鸡场常用化学药物和中药种类、不同药物的用药原则、不同用药模式等进行了综述。

浅谈思维导图在古诗词教学中的应用

古诗词教学是中学语文教学中的重要内容,但目前的古诗词教学存在着诸多的问题。要想让学生准确把握古诗词的主题思想,提升学生的古诗词鉴赏能力,语文教师可以将思维导图应用到古诗词教学之中,以此提高学生的学习兴趣,让学生走近古诗词,深入理解古诗词作品的内涵,帮助学生积累古诗词的知识,提升学生对于古诗词的鉴赏水准,从而提高学生的语文核心素养。

细节描写——用我的手，写我心

阳光可从拨开生活的阴霾．可从驱走冰冷与孤独．可从引领我们走出困境……没有阳光的时候期盼阳光．拥有的时候也要懂得珍惜。可能在你的生命中阳光无时无刻不在．只需要一双发现的眼睛。请从“阳光”为话题．完成一篇作文。

山东省部分地区规模化奶牛场副结核病血清学调查

为了解山东部分地区奶牛副结核病的感染情况,采用ELISA方法对2018年2月-2019年11月期间山东省9个地区18个不同规模奶牛养殖场2岁以上所有泌乳奶牛进行副结核病的血清抗体水平检测,并运用统计学软件进行数据分析。结果显示,2018年2月-2019年11月期间山东省9个地区总体抗体阳性率为17.80%(579/3253),2019年阳性率(22.31%;441/1976)高于2018年阳性率(11.24%,138/1227)。不同地区和不同月份的抗体阳性率差异均较大,济南地区最高,为40.75%(P>0.05),威海地区最低,为5.98%(P>0.05);济南与其他地区抗体阳性率均差异显著(P<0.05),威海与潍坊差异不显著(P>0.05),与其他地区差异显著(P<0.05);8月份最高为80.00%,2月份最低,为6.27%。不同饲养规模的抗体阳性率由高到低依次为中型牛场20.14%(P>0.05)、大型牛场15.57%(P>0.05)、小型牛场15.30%(P>0.05),不同规模的养殖场之间牛副结核病阳性率均差异不显著(P>0.05)。此次调查表明,牛副结核感染在山东省普遍存在,应引起有关部门的重视,采取有效的综合防控措施进行防控。

150例早期胃癌及癌前病变内镜黏膜下剥离术标本的处理及病理学评估探析

目的:探析150例早期胃癌及癌前病变内镜黏膜下剥离术标本的处理及病理学评估结果。方法:选取我院2018年6月到2019年6月诊治的150例早期胃癌及癌前病变患者,所有患者均行内镜黏膜下剥离术,术中按规范处理标本,分析其病理学评估结果。结果:150例患者的标本中,低级别上皮内瘤变17例,高级别上皮内瘤变77例,早期胃癌56例;病变分型中,0~Ⅱc型59例,0~Ⅱa型37例,0~Ⅱb型31例,0~Ⅰ型14例,0~Ⅲ型9例;伴溃疡形成11例。全部标本均垂直切缘阴性,4例高级别上皮内瘤变与6例早期胃癌水平切缘阳性。56例早期胃癌中,39例浸润深度为pT1a,10例为pT1b1,7例为pT1b2,水平切缘均阴性;均无脉管浸润。结论:对早期胃癌及癌前病变内镜黏膜下剥离术标本进行规范化处理及病理学评估,能够准确反映手术情况,对指导患者的进一步治疗及预后评估具有显著作用。

胃癌应用纤维内镜活检胃黏膜诊断的临床病理分析

目的探讨胃癌应用纤维内镜活检胃黏膜诊断的临床病理分析。方法采用随机数字表法将2016年12月至2017年12月收治的243例疑似胃癌患者。胃黏膜活检标本应用福尔马林液进行固定,石蜡包埋,实施制片,HE染色,应用光镜观察切片。结果 243例患者中通过病理诊断出胃癌患者41例,检出率为16.87%,胃镜下诊断胃癌33例,与病理诊断相符率为80.49%。患者的平均年龄为17～81岁,男性发生率高于女性。其中6例未分化胃癌确诊为恶性淋巴瘤,3例初诊时漏诊,复片后诊断为胃癌。结论纤维内镜在临床中普及有利于及时发现胃癌,特别是早期胃癌有着重要意义,利于及早发现及早开展治疗。针对病理医师而言,在具体工作中,对胃黏膜进行诊断,一定保持认真的工作态度,综合性分析,对比再进行总结,从而提高诊断准确率。

北京阮祥燕医生擅长治疗由多囊卵巢综合征引起的不孕症

（一）我是在2001年结的婚。婚后两年多我都没有怀孕。去医院检查后，我被确诊患了由多囊卵巢综合征引起的不孕症。我曾到很多医院进行诊治，但没哈效果。看见和我差不多的姐妹都当上了妈妈，我的心里别提有多着急了。2003年8月，

球齿钎头用中颗粒硬质合金GM06牌号的研制

硬质合金由于硬度高、抗压能力强、耐磨性好等优异性能,在地质矿山凿岩工具上得到了广泛应用。本文通过调整WC粒度,改进生产工艺,成功制备出了中颗粒GM06牌号硬质合金,通过在现场凿岩测试,取得了理想的使用效果。

关于新高考制度引导下的高中语文课程改革探讨

二十世纪以来,我国高中教育受到高考的影响,在一定程度上,高考成为了高中学科教学的目标和方向。然而在现在不断变更的高考制度,创新化的教学理念和不断前进的教学模式下,无不推动着高中教学远离应试教育,逐渐向教育本质的轨道发展。本文结合近期高考的相关信息,以高中语文课程为研究对象,对于新高考制度对高中课程的影响进行讨论。

牛病毒性腹泻病毒可视化一步RT-LAMP检测方法的建立

为建立可视化一步RT-LAMP检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的方法,根据GenBank中的BVDV的5′UTR序列,设计2组RT-LAMP引物,经过反应温度、反应时间、Mg^(2+)和甜菜碱的终浓度的优化,特异性及灵敏性试验,对3种常用显色指示剂钙黄绿素-MnCl_(2)、羟基萘酚蓝和中性红的显色效果进行评估,并使用商品化ELISA试剂盒与本方法进行对照试验。结果显示,经优化本方法在66℃30 min即可完成反应,采用中性红作为显色指示剂,检测BVDV可产生特异阳性反应;对BVDV RNA检测下限最低达0.021 pg/μL;对13份临床样品检测结果与商品化ELISA检测试剂盒相符率100%。结果表明,所建立的BVDV可视化一步RT-LAMP检测方法的特异性、灵敏性较好,可为BVDV临床快速检测提供帮助。

某区医院护士功能性胃肠病危险因素研究

了解某区医院护士的功能性胃肠病情况,分析引起护士功能性胃肠病的主要原因,为主管部门提出针对性的干预措施。方法:选取某区二级医院,随机抽取值班护士315名。对选取的学生发放问卷进行调查。对问卷的调查结果进行一般情况的描述研究,并进行单因素分析;对单因素研究差异有统计学意义的变量进行赋值进行多因素分析。结果:此次调查共215人,不同年龄段,不同科室之间比较差异均没有统计学意义(P>0.05),护士是否暴饮暴食、是否规律吃饭、是否吃饭太快之间比较差异均有统计学意义(P<0.05);是否暴饮暴食、是否规律饮食、是否吃饭太快是此次调查是否检出功能性胃肠病的影响因素。结论:某区医院的护士功能性胃肠病检出较多,相关部门应引起重视,针对危险因素提出干预措施。