Tregs及IL-6、IL-10、TNF在急性分泌性中耳炎患者中的变化及意义

目的:检测CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)及IL-6、IL-10、TNF在急性分泌性中耳炎患者急性期外周血及耳积液中的变化。方法:采用BD CBA Flex Set IL-6、IL-10、TNF试剂盒,利用流式细胞术微球阵列法检测10例正常对照组外周血、37例(37耳)急性上呼吸道感染诱发急性分泌性中耳炎患者(患者组)外周血及耳积液中3种细胞因子水平及外周血Tregs细胞的比例。结果:患者组Tregs细胞的百分比明显高于正常对照组[(12.82±4.56)%vs.(6.695±1.09)%,P<0.05]患者组外周血IL-6、IL-10、TNF浓度与正常对照组比较无统计学意义(P>0.05),患者耳积液中3种细胞因子的浓度均明显高于患者及正常对照组外周血(P<0.05)。结论:急性分泌性中耳炎患者Tregs细胞高表达,耳积液中3种细胞因子浓度明显升高。

人骨髓间充质干细胞分离方法的比较

目的:探讨人骨髓间充质干细胞原代培养过程中最佳的分离方法。方法:留取暨南大学第一附属医院骨科2004-10/2005-06健康供者的骨髓10份,分别采用羟乙基淀粉沉淀法,淋巴细胞分层液分离法,氯化铵裂解红细胞法,全骨髓法四种方法分离骨髓有核细胞,观察四种方法在细胞出现伸展的时间,原代培养的时间方面的差异,流式细胞仪对培养得到的间充质干细胞进行表面标志检测。结果:①在其他条件相同的情况下,羟乙基淀粉沉淀法10份标本全部培养成功,淋巴细胞分层液分离法10份中有9份得到间充质干细胞,氯化铵裂解红细胞法10份中仅1份得到间充质干细胞,全骨髓培养法10份中有3份得到间充质干细胞。②羟乙基淀粉沉淀法细胞出现伸展和原代培养的时间短于淋巴细胞分层液分离法犤乙基淀粉沉淀法:羟(54.0±3.0h,(12.4±1.4)d;淋巴细胞分层液分离法:(74.0±5.2)h,(14.6±0.9)d,)P<0.01犦③流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞表面表达CD13,CD29,。CD44,不表达造血细胞的标志CD45,CD34。结论:经比较羟乙基淀粉沉淀法明显优于其他分离方法,在人骨髓间充质干细胞的培养过程中建议使用此种物理沉降方法分离骨髓有核细胞。

脐血间充质干细胞的分离鉴定及其向脂肪和成骨的分化

目的分离鉴定脐血(UCB)中的间充质样干细胞(MLSC),探索其向脂肪和成骨分化的可行性。方法用羟乙基淀粉沉淀法分离脐血有核细胞,利用细胞贴壁生长特性分离纯化脐血间充质样干细胞;流式细胞仪检测其表面标志;多种成分联合诱导其向脂肪、成骨方向分化,细胞化学染色检测诱导后的细胞变化。结果培养得到一组间充质样干细胞,不表达造血细胞的标志(CD34/CD45/CD14)及内皮细胞的标志CD106,强表达间充质细胞的标志CD29、CD44和CD13,在适当的诱导条件下可向脂肪及成骨方向分化。结论脐血中含有间充质样干细胞,表达间充质干细胞的表面标记,并可以向脂肪、成骨方向分化,因此可以作为组织工程的种子细胞。

肺耐药蛋白基因和多药耐药相关蛋白基因在急性白血病骨髓细胞中的表达及临床意义

为了研究肺耐药蛋白基因和多药耐药相关蛋白基因在急性白血病骨髓细胞中的表达及其临床意义 ,采用半定量逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测初治急性白血病、复发难治白血病及正常对照骨髓细胞肺耐药蛋白基因 (lungresistanceprotein ,LRP)及多药耐药相关蛋白基因 (multidrugresistanceprotein ,MRP)的表达。结果显示 ,正常对照骨髓细胞LRP表达阴性 ,初治急性髓细胞白血病 (AML)组及复发难治组LRP表达水平与正常对照组相比明显升高 ,增高的LRPmRNA水平与对初次化疗不敏感及预后差有关 ,LRP表达阳性患者的完全缓解率明显低于表达阴性者。经直线相关分析发现 ,LRP表达与MRP表达水平成正相关。结论 :LRP可能是一项新的耐药指标 ,其高表达与急性髓细胞白血病的疗效及预后密切相关 ,同时检测LRP和MRP的表达可以指导治疗 ,估计预后。

体外诱导脐血间充质干细胞向胰岛β样细胞分化的初步研究

探讨脐血间充质干细胞能否在体外向胰岛β样细胞分化,并探索其诱导条件。在无菌条件下采集正常产妇脐血,用羟乙基淀粉沉淀法分离脐血中的有核细胞,进而采用贴壁筛选法获得脐血间充质干细胞。纯化后的脐血间充质干细胞用表皮生长因子、β-巯基乙醇、高糖、激活素A和肝细胞生长因子进行诱导。观察诱导后的细胞形态变化,采用胰岛素免疫荧光染色对诱导后的细胞进行鉴定,定量检测胰岛素分泌水平及其对葡萄糖刺激的反应性。结果发现,经过诱导后,细胞形态发生明显变化,形态变圆而且聚集成团;诱导后细胞的胰岛素免疫荧光染色为阳性;而且细胞能分泌少量胰岛素,并对糖刺激具有反应性。由此提示,在体外,脐血间充质干细胞具有向胰岛β样细胞分化的潜能。

NK细胞及IL-2、IL-4、IFN-γ在上呼吸道感染诱发急性分泌性中耳炎患者的表达

目的检测上呼吸道感染诱发急性分泌性中耳炎患者急性期外周血NK(CD3-CD16+CD56+)细胞、B(CD3-CD19+)细胞及IL-2、IL-4、IFN-γ的变化。方法采用BD CBA Flex Set IL-2、IL-4、γ-干扰素试剂盒,利用流式细胞术微球阵列法检测37例急性上呼吸道感染诱发急性分泌性中耳炎外周血3种细胞因子水平及NK、B淋巴细胞的比例。结果患者组NK细胞的百分比为(17.62±8.44)%,明显低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);B细胞在患者外周血中的比例为(13.44±5.41)%,比例明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);患者组外周血IL-2、IL-4、IFN-γ浓度与正常对照组比较无统计学意义(P>0.05)。结论急性分泌性中耳炎存在NK细胞低表达,B淋巴细胞高表达,外周血细胞因子浓度无改变。

重症先天性中性粒细胞减少症基因突变和急性白血病转化

重症先天性中性粒细胞减少症(SCN)是一种罕见的骨髓衰竭性疾病,外周血中性粒细胞绝对值明显减少,具有强烈的向骨髓增生异常综合征(MDS)/急性髓细胞白血病(AML)转化的风险,目前发现与SCN相关的异常基因有14种,ELANE是SCN最常见的致病基因。粒细胞集落刺激因子(G-CSF)是目前主要的治疗手段。在治疗过程中经常会有CSF3R突变,可导致SCN转化为AML。深入研究SCN/AML转化机制有助于该疾病诊治。本文就SCN患者的遗传学及表型多样性,G-CSF对SCN的治疗作用及风险,SCN患者集落刺激因子3受体(CSF3R)突变影响G-CSF信号传导,CSF3R突变是SCN转化为急性白血病的重要因素和了解SCN/AML转化机制有助于疾病诊治等问题作一综述。

高糖诱导人脐血间充质干细胞向胰岛样细胞分化

目的:探讨脐血间充质干细胞向胰岛样细胞分化的潜能。方法:分离脐血有核细胞,将其置于Mesen-cult TM培养基中进行培养,并利用贴壁法进行纯化、扩增。扩增后的脐血间充质干细胞用含体积分数5%胎牛血清的H-DMEM持续诱导。采用胰岛素免疫荧光染色对诱导后的细胞进行鉴定,定量检测胰岛素分泌水平及其对葡萄糖刺激的反应性。结果:诱导后,细胞形态发生明显变化,变圆而且聚集成团;细胞的胰岛素免疫荧光染色为阳性;而且细胞能分泌少量胰岛素,并对糖刺激具有反应性。结论:在高糖环境中,脐血间充质干细胞具有向胰岛样细胞分化的潜能。

多种生长分化因子体外联合诱导人脐血间充质干细胞向肝样细胞的分化(英文)

背景:肝细胞自身增殖能力有限,近几年关于各类干细胞向肝细胞分化的成功报道很多,包括胚胎干细胞、骨髓细胞、胰腺干细胞、神经干细胞及各种来源的间充质干细胞等。目的:探讨应用多种生长分化因子体外联合诱导人脐血间充质干细胞向肝样细胞分化的可行性。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2005-10/2006-04在暨南大学医学院血液病研究所完成。材料:胎儿脐带血来源于顺产及剖腹产的健康孕妇,由暨南大学第一附属医院产科提供,产妇均签署知情同意书。方法:体外分离培养人脐血间充质干细胞,胰酶-EDTA消化传代。取传至第3代细胞,按5×104/cm2接种,48h后去除原培养基,PBS洗涤后,第1阶段用含地塞米松、肝细胞生长因子、表皮生长因子、ITS的F12培养基诱导2周,第2阶段用含地塞米松、肝细胞生长因子、致瘤素M、ITS的F12培养基继续诱导2周。主要观察指标:流式细胞仪检测脐血间充质干细胞表面标志的表达,RT-PCR检测肝细胞相关基因的表达,免疫荧光染色检测肝细胞相关蛋白的表达,透射电镜观察细胞超微结构。结果:培养的细胞不表达造血细胞系标志CD34,CD45,CD14;亦不表达CD54,CD49f,HLA-DR;部分表达内皮细胞标志CD106;强表达CD29,CD44及CD13。诱导4周后,甲胎蛋白、白蛋白、ck-18及tat基因均呈阳性表达;免疫荧光染色显示细胞浆中甲胎蛋白、白蛋白、ck-18均呈阳性;细胞胞浆中出现脂滴及糖原的沉积,细胞表面有微绒毛,出现双核细胞,初步具备了肝细胞的超微结构特征。结论:联合应用地塞米松、肝细胞生长因子、表皮生长因子、致瘤素M及ITS等多种生长分化因子,可在体外成功诱导人脐血间充质干细胞向肝样细胞分化。

基于诊断学内容模块整合的临床思维能力构建与评价

目的:探讨如何科学地将诊断学内容优化整合,提高医学生临床思维能力。方法:在临床医学2015级特色班49名学生中实行诊断学内容模块整合教学,并辅以加强临床思维能力训练,学期末从病历书写、技能操作及临床思维考核、理论笔试考核等方面与同年级普通班37名学生进行分析比较。结果:技能操作及临床思维培养方面,模块整合教学效果明显优于传统教学模式,特色班考核成绩高于普通班(P<0.05),期末理论考核及总评成绩特色班均明显高于普通班(P<0.01),病历书写特色班未显示出优势(P>0.05)。结论:基于诊断学内容模块整合的教学模式,有助于学生掌握理论知识,提高技能操作水平及临床思维能力。

体外诱导脐血间充质干细胞向胰岛β样细胞的分化(英文)

背景:目前,国内外对骨髓间充质干细胞、胰腺干细胞向胰岛β样细胞分化的研究报道较多,但关于脐血间充质干细胞向胰岛β样细胞分化的研究报道较少。目的:验证脐血间充质干细胞能否在体外向胰岛β样细胞分化,并探索其诱导条件。方法:在无菌条件下采集正常产妇脐血,用羟乙基淀粉沉淀法分离脐血中的有核细胞,进而采用贴壁筛选法获得脐血间充质干细胞。纯化后的脐血间充质干细胞用表皮生长因子、β-巯基乙醇、高糖、激活素A和肝细胞生长因子进行诱导。观察诱导后的细胞形态变化,采用胰岛素免疫荧光染色对诱导后的细胞进行鉴定,定量检测胰岛素分泌水平及其对葡萄糖刺激的反应性。结果与结论:经过诱导后,细胞形态发生明显变化,形态变圆而且聚集成团;诱导后细胞的胰岛素免疫荧光染色为阳性;而且细胞能分泌少量胰岛素,并对糖刺激具有反应性。在体外,脐血间充质干细胞具有向胰岛β样细胞分化的潜能。

干细胞与糖尿病

最近几年干细胞在再生医学及一些急性损伤或退行性病变中的作用越来越受到人们的重视,对于一些长期困扰人们的慢性疾病,如果可以通过干细胞治疗达到缓解甚至治愈的目的,其应用前景及意义将是巨大的。全世界范围内大有1.5亿人受到糖尿病的折磨,而这一疾病多是由于胰岛中的β细胞相对或绝对不足造成的,研究人员试图在体外通过多种方法将各种来源的干细胞分化生成健康足量的胰岛β细胞,移植以糖尿病模型体内观察降血糖作用,目的是为以后的临床应用提供理论依据。在此将最近几年干细胞与糖尿病的相关基础研究做一综述。

靶向乙型肝炎病毒的外源性microRNA的构建及作用

【目的】探讨靶向乙型肝炎病毒的外源性microRNA(amiRNA)的构建及其抑制HBV复制的作用。【方法】应用Invitrogen公司miRNA在线设计软件(BLOCK-iT^(TM) RNAi Designer)针对HBV基因设计4条amiRNA序列;构建amiRNA真核表达质粒,Lipofectamine2000转染至人肝癌细胞株HepG2.2.15;荧光定量PCR检测HBV-DNA,ELISA检测HBsAg和HBeAg表达水平。【结果】设计合成的4条amiRNA均可下调培养体系中HBV-DNA水平以及HBsAg和HBeAg水平,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。其中以miR3抑制HBV-DNA复制的效果最为显著。【结论】靶向HBV基因适当位点设计合成的amiRNA在体外可以有效抑制HBV的复制。

肺耐药蛋白基因在急性白血病中的表达及临床意义

目的 检测急性白血病患者肺耐药蛋白 (Lungresistanceprotein ,LRP)基因mRNA表达 ,探讨其与多药耐药和预后的关系。方法 采用半定量逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测 47例急性白血病患者及 7例正常对照骨髓细胞LRP基因的表达。结果 正常骨髓细胞LRP基因表达阴性 ,2 5例初治急性髓细胞白血病 (AML)患者中 1 7例LRP基因表达阳性 ,1 2例初治急性淋巴细胞白血病 (ALL)中仅 1例阳性 ,1 0例复发难治患者 8例阳性 ,初治AML组及复发难治组较正常对照组相比表达率明显升高 ,差异有显著性 (P =0 .0 0 1 ) ,LRPmRNA表达水平与初次化疗不敏感及预后差有关 ,LRPmRNA阳性患者的完全缓解率明显低于表达阴性者 (分别为 3/1 1 ,4/5 ,P <0 .0 5)。结论 LRP基因表达水平与急性髓细胞白血病化疗效果及预后密切相关 ,是一项新的耐药指标 ,检测LRP的表达可以指导治疗 。

肺耐药蛋白基因在急性白血病中的表达及意义

目的 :检测急性白血病患者肺耐药蛋白 (lung resistance protein,LRP)基因 m RNA表达 ,探讨其与多药耐药和预后的关系。方法 :采用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT-PCR)技术检测 47例急性白血病患者及 7例正常对照者骨髓细胞 LRP基因的表达。结果 :正常骨髓细胞 LRP基因表达阴性 ,2 5例初治急性非淋巴细胞白血病 (ANLL)患者中 1 4例 LRP表达阳性 ,1 2例初治急性淋巴细胞白血病 (ALL)中仅 1例阳性 ,1 0例复发难治患者 8例阳性 ;初治 ANLL组及复发难治组较正常对照组相比表达率明显升高 ,差异有显著性 (P=0 .0 0 1 ,P=0 .0 2 4) ,LRP m RNA表达水平与初次化疗不敏感及预后差有关 ,LRP阳性患者的完全缓解率明显低于表达阴性者 (分别为 3 / 1 1 ,4/ 5 ,P<0 .0 5 )。结论 :LRP基因表达水平与急性非淋巴细胞白血病化疗效果及预后密切相关 ,是一项新的耐药指标。检测 LRP的表达可以指导治疗 。

体外诱导人骨髓间充质干细胞向胰岛β样细胞分化的研究

目的:探讨体外诱导人骨髓间充质干细胞(MSCs)向胰岛β样细胞分化。方法:在无菌条件下从正常成人骨髓中分离间充质干细胞,体外培养传3代后用表皮生长因子(epidermal growthfactor,EGF)、β-巯基乙醇和高糖培养基诱导MSCs向胰岛β样细胞分化。观察MSCs在诱导前后的形态变化;用胰岛素免疫细胞化学染色检测胰岛素的表达;用双硫腙染色鉴定胰岛β样细胞。结果:未经诱导的MSCs在培养体系中呈贴壁生长,长梭形,经诱导分化后,细胞逐渐变圆,并聚集成团;胰岛素免疫细胞化学表明细胞团内的细胞呈胰岛素染色强阳性反应;双硫腙染色阳性。结论:人骨髓间充质干细胞可在体外被定向诱导分化为胰岛β样细胞。

阻断Sonic Hedgehog信号对不同人肝癌细胞生长的影响

目的:研究阻断Sonic Hedgehog(Shh)信号对不同人肝癌细胞生长的影响,探讨阻断Shh信号抑制肝癌细胞生长的机制。方法:RT-PCR法检测Shh信号分子在3株人肝癌细胞(BEL-7402、Huh7和HepG2)中的表达,并检测Shh阻断抗体作用后BEL-7402细胞Shh信号效应分子表达变化;MTT法检测人肝癌细胞增殖活性;流式细胞术检测人肝癌细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白表达。结果:Shh信号分子在3株人肝癌细胞中均有表达,Shh阻断抗体可以下调Shh信号效应分子patched(Ptch)、Gli1和Gli2的表达;Shh阻断抗体可以抑制3株肝癌细胞生长,增加G0/G1期细胞,并诱导细胞凋亡;Shh阻断抗体作用后,BEL-7402细胞pro-caspase-3、pro-caspase-8和pro-caspase-9蛋白表达水平下降,cleaved caspase-3、cleaved caspase-8和cleaved caspase-9蛋白表达水平升高。结论:阻断Shh信号可抑制Shh高表达的人肝癌细胞生长,阻滞细胞周期于G0/G1期,并诱导肝癌细胞凋亡。

人骨髓源干细胞向胰岛素分泌细胞分化(英文)

目的:探讨人骨髓源干细胞向具有功能的胰岛素分泌细胞分化的可能性。方法:从人骨髓分离间充质干细胞。采用表皮生长因子、β-巯基乙醇和高糖培养基诱导其向胰岛素分泌细胞分化。经诱导后,用RT-PCR检测胰岛β细胞相关基因的表达,并采用免疫细胞化学染色检测胞浆胰岛素的表达。此外,诱导后细胞分泌的胰岛素定量及胰岛素释放实验将采用化学发光法进行检测。将经诱导后的细胞移植到糖尿病小鼠的右侧肾被膜下。在移植后16 d持续检测小鼠的血糖水平,最后对右侧肾脏进行免疫组化检测。结果:经诱导后,细胞能表达胰岛β细胞相关基因;免疫细胞化学染色也能检测到胞浆有胰岛素的表达;而且这些细胞能对糖刺激有所反应。细胞被移植到糖尿病小鼠的肾被膜下,能起降血糖作用。其肾脏的免疫组化显示:肾被膜下有胰岛素阳性细胞。结论:人骨髓源干细胞具有向胰岛素分泌细胞分化的潜能,这将为糖尿病细胞治疗提供丰富的细胞来源。

维甲酸治疗急性早幼粒细胞白血病致高白细胞反应的处理

应用羟基脲 (Hu)和联合化疗 (DA)方案配合维甲酸 (ATRA)治疗急性早幼粒细胞白血病 (APL) 5 1例。结果 15例应用羟基脲者白细胞在用药后 4 (3～ 7)天开始下降 ,10例获 CR(6 7% ) ,达 CR所需时间 36 (31～72 )天 ,输注红细胞 4 U,血小板 16 .2 U ,所需费用 10 6 4 3(9191～ 15 197)元。 36例应用 DA方案者白细胞开始下降天数 6 (5～ 9)天 ,2 2例获 CR(6 1.1% ) ,达 CR所需时间 4 4 (31～ 99)天 ,平均输注红细胞 9.3U、血小板 37U ,所需费用 2 16 6 4 (92 4 6～ 32 4 0 7)元。提示羟基脲对维甲酸治疗 APL出现的高白细胞反应具有控制效果快、达 CR时间较短、所需费用低。

人脐血间质干细胞一般特性及其多向分化潜能

【目的】观察人脐血间质干细胞增殖能力、细胞表面分子标志及多向分化潜能。【方法】从人脐血中分离出单个核贴壁细胞并进行体外培养。将细胞以单克隆抗体标记后用流式细胞仪进行检测。向培养细胞中加入成骨、成软骨和成脂肪诱导剂,检测其多向分化能力。【结果】脐血间质干细胞原代培养时间为7周。流式细胞分析显示这些细胞CD29、CD13、CD44等表达为阳性,但是它们不表达造血干细胞表面标志物。加入成骨诱导剂会导致细胞碱性磷酸酶的表达。采用微球培养法并加入软骨诱导剂对细胞进行诱导,用阿尔新蓝染色显示有蛋白多糖表达。在加入成脂诱导剂后,会导致细胞形态学改变,且油红O染色为阳性。【结论】通过体外传代培养的方法可以从人脐血单个核贴壁细胞中得到纯化的间质干细胞,脐血有望成为间质干细胞的替代来源。