RhoC基因沉默对口腔鳞状细胞癌迁移和侵袭的影响

目的:分析RhoC对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞迁移和侵袭能力的影响及其潜在机制。方法:利用UALCAN和K-M plotter在线数据库预测分析RhoC在OSCC中的表达及其与病理分期分生存率的关系,并结合IHC实验检测OSCC组织中RhoC的表达水平。按照人RhoC基因构建两条小干扰RNA(siRNA)并将细胞进行实验分组。RT-qPCR检测转染后各组细胞RhoC的mRNA表达水平,Western blot法分析实验分组细胞中RhoC、FAK、MAPK、p-FAK、p-MAPK、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白表达;此外,比较各实验分组细胞的穿膜细胞数和划痕愈合面积分析细胞的侵袭和迁移活动。最终通过构建裸鼠肺转移模型对上述实验进行验证。结果:RhoC在OSCC中高表达,并和病理分期和病理分级等关联性大。RhoC的mRNA和蛋白相对表达量在OSCC中增高(P<0.01);RT-qPCR及Western blot结果显示,敲减RhoC表达后,RhoC的mRNA和蛋白表达水平显著下降(P<0.01),Western blot结果显示p-FAK、p-MAPK、MMP-2和MMP-9蛋白水平显著下降(P<0.05),FAK和MAPK蛋白表达无明显变化(P>0.05);细胞迁移和侵袭能力显著下降(P<0.01);实验组在动物活体荧光成像系统下发出的荧光强度显著低于对照组,且HE染色结果显示实验组裸鼠肺结节数量明显减少(P<0.05)。结论:RhoC基因可影响OSCC细胞的迁移和侵袭能力,其潜在机制可能是通过活化FAK和MAPK信号分子参与OSCC细胞的迁移和侵袭过程。

黏膜下注射地塞米松与甲泼尼龙对下颌阻生智齿拔除术后并发症的影响

目的评价下颌阻生智齿拔除术前黏膜下注射地塞米松与甲泼尼龙对控制其术后并发症的影响。方法选取2018年8月至2019年8月就诊于青岛大学附属青岛市市立医院口腔科,需要翻瓣、去骨拔除下颌阻生智齿的80例患者为研究对象,采用随机数字表法分为地塞米松组(28例)、甲泼尼龙组(25例)、对照组(27例),前两组分别在局部麻醉后于下颌阻生智齿颊侧前庭沟黏膜下注射地塞米松8mg、甲泼尼龙40mg,对照组不注射任何药物,比较三组患者术后局部肿胀、疼痛、张口受限的发生情况。结果地塞米松组7d视觉模拟评分法(visual analogue scale,VAS)总分低于对照组,差异有显著性(P<0.05)。术后第3天地塞米松组VAS评分低于其他两组,术后第4天地塞米松组VAS评分低于甲泼尼龙组,差异均有显著性(P<0.05)。术后第2天,地塞米松组与其他两组比较,肿胀程度较轻,差异有显著性(P<0.05)。术后第2天地塞米松组张口受限程度低于对照组,差异有显著性(P<0.05),术后第7天三组患者开口度基本恢复至术前正常状态,经比较差异无显著性(P>0.05)。结论下颌阻生智齿拔除术前黏膜下注射地塞米松8mg可安全、有效地减轻术后肿胀、疼痛、张口受限等并发症。

上颌窦外提升术放置纳米羟基磷灰石材料同期植入种植体的临床效果

目的比较在上颌窦外提升术中放置纳米羟基磷灰石材料并同期植入种植体的方法与采用无植骨帐篷技术并同期植入种植体的方法在术后骨增量、骨密度以及种植体稳定性方面的临床效果。方法选取2017年9月至2019年9月就诊于青岛大学附属青岛市市立医院的80例上颌后牙缺失拟进行种植修复的患者,将其按照平行对照实验随机方法分为纳米组(放置纳米羟基磷灰石材料并同期植入种植体)和帐篷组(采用无植骨帐篷技术并同期植入种植体),各40例。术后6个月通过拍摄锥束计算机断层扫描和测量种植体稳定系数对成骨情况以及种植体的稳定性进行评估。结果术中共有3个上颌窦膜发生穿孔(帐篷组2个,纳米组1个),术后患者恢复良好,其余患者术后均未发生感染、创口裂开、血肿、水肿等,随访期间种植体未发生松动。术后6个月纳米组平均骨增量、平均骨密度高于帐篷组,差异有显著性(P<0.05);两组的种植体稳定系数均值差异无显著性(P>0.05)。结论在种植体稳定性方面,两种方法具有相似的临床效果。而在术后骨增量以及骨密度方面,放置纳米羟基磷灰石材料并同期植入种植体的方法优于无植骨帐篷技术并同期植入种植体的方法,适合在临床推广应用。

转移注意力法对牙源性颌骨囊肿手术患者焦虑和疼痛的影响

目的探讨分析转移注意力的心理干预方法对牙源性颌骨囊肿手术患者疼痛和焦虑的影响。方法选取2018年3月至2019年12月在青岛大学附属青岛市市立医院口腔科就诊的168例接受牙源性颌骨囊肿手术患者,按随机数表法随机分为观察组和对照组,每组84例。对照组给予常规护理治疗;观察组在常规护理治疗的同时增加转移注意力的心理干预方法,比较分析两组患者的疼痛和焦虑程度。结果术后,观察组的焦虑自评量表和疼痛数字评分法评分低于对照组,差异有显著性(P<0.05);观察组住院时间短于对照组,差异有显著性(P<0.05)。结论转移注意力的心理干预方法可以减少口腔颌面外科手术患者术后焦虑情绪,缓解术后疼痛。

两种牙龈翻瓣方式对下颌低位埋伏第三磨牙拔除术后反应的临床评价

目的评价两种不同牙龈翻瓣设计(舌向四角瓣与传统三角瓣)对下颌低位埋伏第三磨牙拔除术后反应的影响。方法选取2020年9月至2021年4月就诊于青岛大学附属青岛市市立医院口腔医学中心的53例要求拔除双侧下颌低位埋伏第三磨牙的患者作为研究对象,采用随机、临床自身对照临床试验设计,将患者两侧患牙一侧采用舌向四角瓣,另一侧采用传统三角瓣法拔除。记录两组手术时间、术后疼痛、张口受限、面颊部肿胀的发生情况,并进行比较分析。结果舌向四角瓣组手术时间长于传统三角瓣组(P<0.05)。术后第3天,舌向四角瓣组肿胀程度明显低于传统三角瓣组(P<0.05),然而张口程度方面两组间差异无显著性(P>0.05)。术后5d内,舌向四角瓣组疼痛强度及服用镇痛药数量明显低于传统三角瓣组(P<0.05)。结论虽然采用舌向四角瓣手术时间长于传统三角瓣,但舌侧四角瓣较传统三角瓣术后反应明显降低。

沉默PGGT1B对唾液腺腺样囊性癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨GGTase-I在唾液腺腺样囊性癌SACC-LM和SACC-83细胞增殖和凋亡方面的作用及其相关机制。方法:根据编码GGTase-I的PGGT1B基因序列,应用慢病毒介导的基因沉默技术,稳定敲低SACC-LM和SACC-83细胞中PGGT1B基因的表达。将细胞分为实验组(沉默目的 基因PGGT1B的细胞)、阴性对照组(未沉默目的基因PGGT1B的细胞)和空白对照组(只包含空载体的细胞)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞PGGT1B和RhoA的mRNA表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测GGTase-I、RhoA、RhoA膜蛋白、CyclinD1及p21的蛋白表达;采用CCK-8实验分析细胞的增殖行为;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡能力变化;通过裸鼠皮下成瘤实验观察PGGT1B编码的GGTase-I蛋白对SACC细胞成瘤能力的影响。采用SPSS 25.0软件包对数据进行统计学分析。结果:qRT-PCR检测结果显示,慢病毒感染SACC-LM和SACC-83细胞后,PGGT1B和RhoA的相对表达量降低(P<0.05);Western免疫印迹检测结果显示,RhoA相对表达量无显著改变(P>0.05),GGTase-I、RhoA膜蛋白的相对表达量下降(P<0.05),CyclinD1的相对表达量降低,p21的相对表达量增高(P<0.05);SACC-LM和SACC-83细胞增殖活性下降、凋亡能力增加(P<0.05);裸鼠皮下肿瘤体积、质量下降,生长速度减慢。结论:通过沉默编码GGTase-I蛋白的PGGT1B基因,可降低RhoA蛋白活性,促进细胞凋亡、抑制细胞增殖,表明GGTase-I蛋白可对SACC-LM和SACC-83细胞的增殖行为和凋亡能力产生影响,有望成为SACC基因治疗的新靶点。

沉默RhoA基因对腺样囊性癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨RhoA基因对唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoidcysticcarcinoma,SACC)细胞的迁移和侵袭能力的影响。方法将液氮冻存的20例SACC及正常癌旁组织研磨匀浆,分别提取总RNA和总蛋白检测RhoA的表达情况。同时构建RhoA⁃siRNA转染2个细胞株SACC⁃LM和SACC⁃83细胞进行细胞学实验,实验分为实验组(转染RhoA⁃siRNA基因),阴性对照组(转染siRNA⁃NC基因)和空白对照组。通过qRT⁃PCR检测各组细胞RhoA的mRNA表达并确定转染效率;Western blot分析各组细胞RhoA及上皮-间充质转换(epithelial⁃mesenchymal transition,EMT)标志分子(E⁃cadherin、N⁃cadherin、Vimentin)的蛋白表达;Transwell实验及划痕实验分析各组细胞侵袭和迁移能力的变化。结果与正常癌旁组织相比,RhoA mRNA和蛋白相对表达量在SACC组织中增高(P<0.01);实验组与对照组相比,RhoA mRNA的相对表达量和蛋白的相对表达量降低,E⁃cadherin蛋白的相对表达量增加,N⁃cadherin、Vimentin蛋白的相对表达量降低(P<0.01);实验组细胞侵袭和迁移能力降低(P<0.01)。结论RhoA在SACC组织中表达增高;体外沉默RhoA基因可有效抑制SACC⁃LM和SACC⁃83细胞迁移和侵袭能力,其可能通过作用EMT影响SACC细胞迁移和侵袭能力。

低能量激光对灼口综合征治疗的临床研究

目的探讨低能量激光治疗对灼口综合征的疗效。方法选取青岛大学附属青岛市市立医院口腔医学中心于2018年8月至2019年6月收治的52例灼口综合征患者,采用随机数字表法分为低能量激光治疗组和谷维素-维生素B2-维生素E联合治疗组(药物治疗组),所有患者治疗前后均填写视觉模拟评分表(visual analogue scale,VAS)比较治疗前后疼痛变化。结果治疗前后低能量激光治疗组与药物治疗组患者VAS评分均降低(P<0.05),患者痛感下降。治疗后两组VAS评分差异无显著性(P>0.05)。结论低能量激光治疗可有效改善患者灼口综合征症状。

RhoE在舌鳞状细胞癌中的表达及其对细胞迁移和侵袭的影响

目的初步探讨RhoE在舌鳞状细胞癌(TSCC)中的表达水平,及其对TSCC细胞迁移和侵袭的影响及相关机制。方法选取在青岛大学附属青岛市市立医院口腔医学中心颌面外科2017—2019年手术切除的TSCC原发灶48例,采用免疫组织化学法检测标本(TSCC组织、癌旁组织)中RhoE的表达水平,并提取标本的RhoE mRNA和蛋白进一步检测RhoE的表达水平。选取TSCC SCC-4和CAL-27细胞系进行体外实验,采用瞬时转染法过表达RhoE,并应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及蛋白质免疫印记法检测过表达效率;细胞划痕实验及Transwell细胞侵袭实验分别检测TSCC细胞的迁移和侵袭能力;蛋白质免疫印记法检测相关蛋白Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(ROCK1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达水平;采用GraphPad Prism 8.2.1软件对实验数据进行统计学分析。结果TSCC组织中RhoE的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05);在体外实验中,与空白对照组和阴性对照组相比,过表达实验组TSCC细胞的迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05),过表达实验组ROCK1、MMP-2及MMP-9表达显著降低(P<0.05)。结论RhoE在TSCC组织中低表达,上调TSCC细胞中RhoE表达可显著抑制其迁移和侵袭能力,提示RhoE可能在调控TSCC转移、侵袭等恶性生物学行为过程中发挥作用,为TSCC的基因治疗提供新的靶点。

体外沉默异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶对人舌鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响

目的通过小干扰RNA(siRNA)干扰技术体外沉默异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(Icmt)基因,探讨体外沉默Icmt对舌鳞状细胞癌(TSCC)细胞增殖和凋亡能力的影响。方法针对人Icmt基因序列设计并构建3条siRNA,经脂质体瞬时转染技术转染抑制TSCC细胞系CAL-27和SCC-4细胞Icmt表达,同时设置空白对照组(只加入转染试剂,不加入siRNA)和阴性对照组(转染NC-siRNA)。应用荧光组(荧光基团Cy3标记siRNA)检测siRNA转染效率,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测沉默Icmt后各组细胞的Icmt、RhoA mRNA表达,选取沉默效率最高组作为实验组进行后续实验。采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测转染后各组细胞Icmt、RhoA的蛋白表达及RhoA膜蛋白的表达、细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、p21蛋白表达及细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化的细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)蛋白的表达;细胞增殖活性检测试剂盒和流式细胞术检测细胞的增殖能力、细胞周期变化;Annexin V-APC/碘化丙啶(PI)荧光双染法检测各组细胞的凋亡能力。采用GraphPad Prism 8.2.1软件对实验数据进行统计学分析。结果与阴性对照组和空白对照组相比,实验组细胞Icmt mRNA和蛋白表达下降(P<0.05),RhoA mRNA和总蛋白表达无明显改变(P>0.05),但RhoA膜蛋白表达显著降低(P<0.05);细胞周期相关蛋白Cyclin D1表达下降,p21表达升高;同时检测到实验组ERK蛋白相对表达量较对照组相比无明显差异(P>0.05),但ERK的磷酸化水平明显下降(P<0.05)。CAL-27及SCC-4细胞周期发生改变,细胞比例在G1期增加,S期降低,G2期无明显改变,细胞周期被阻滞在G1/S期(P<0.05);细胞增殖活性下降、凋亡能力增加。结论体外沉默TSCC细胞Icmt基因,可降低RhoA膜靶向定位,抑制细胞增殖、诱导凋亡,提示Icmt在TSCC增殖和凋亡中可能发挥重要作用,可能作为TSCC基因治疗的分子靶点。

体外沉默异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶基因对舌鳞状细胞癌迁移和侵袭的影响

目的通过构建异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(ICMT)小分子干扰RNA(siRNA)沉默ICMT,研究沉默ICMT基因对舌鳞状细胞癌(TSCC)迁移和侵袭的影响。方法通过脂质体转染的方法将siRNA转染至人TSCCCAL-27和SCC-4细胞(ICMT-siRNA组),并设阴性对照组(转染NC-siRNA)和空白对照组(仅加转染试剂,不转染siRNA)。应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测转染后各组细胞中ICMT、RhoA的mRNA表达并明确沉默效率。蛋白质免疫印迹法检测各组ICMT、总RhoA、膜RhoA、Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(ROCK1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达。划痕实验测定细胞迁移能力,Transwell侵袭实验测定细胞侵袭能力。结果CAL-27和SCC-4细胞转染ICMT-siRNA后,实验组相较于阴性对照组和空白对照组ICMT基因和蛋白表达明显降低(P<0.05),RhoA基因和总蛋白表达比较的差异无统计学意义(P>0.05),RhoA膜蛋白、ROCK1、MMP-2、MMP-9表达降低(P<0.05)。迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05)。结论ICMT-siRNA可显著抑制人TSCCCAL-27和SCC-4细胞迁移及侵袭能力,其机制可能与RhoA-ROCK信号通路有关。