浅析汽车零部件制造企业的消防安全管理

汽车制造业在国家经济发展中占有举足轻重的地位,是国民经济的重要支柱之一,而汽车零部件制造企业的安全运行是保证整车厂正常生产的前提,因此零部件制造企业的生产安全备受关注,消防安全又是重中之重。由于企业员工较多,一旦发生人员伤亡事故,不仅会给受害者的家庭带来毁灭性的打击,还会对社会稳定造成影响。为了保障员工的生命财产安全以及企业的健康发展,企业必须抓好消防安全管理工作。

淋巴管内皮细胞的体外培养与鉴定

目的探讨淋巴管内皮细胞的培养技术与鉴定方法,为开展有关方面的研究提供技术支持。方法取猪的淋巴管内皮细胞进行体外细胞培养,采用免疫组织化学、光镜与透射电镜进行观察。结果猪的胸导管内皮细胞具有一般淋巴管内皮细胞的特征。在细胞消化过程中,应用0.1～1.0mg/mL的多聚赖氨酸喷涂培养皿有利于细胞生长。在培养的细胞中,采用VEGFR-3和LYVE-1因子鉴定淋巴管内皮细胞的方法可靠。综合法纯化淋巴管内皮细胞,获得较纯的内皮细胞。结论猪的胸导管是淋巴管内皮细胞培养的较理想来源;建立了稳定可行的淋巴管内皮细胞的体外培养方法。

鸡蛋清中溶菌酶提取技术的研究

对鸡蛋清中溶菌酶的提取及纯化技术进行探究,从而获得纯度、活性、浓度均较高的溶菌酶。采用弱酸性阳离子交换树脂法提取,离心透析纯化,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。结果表明,用此方法提取的溶菌酶纯度较高,酶活力为7793U/mg。

沙利度胺通过诱导G_1阻滞和凋亡抑制血管内皮细胞增殖

沙利度胺是一种抗血管生成药物,临床上用于治疗多种肿瘤,但其抗肿瘤血管生成机制尚不十分清楚.本文采用MTT法观察沙利度胺对体外培养的血管内皮细胞增殖的影响.结果发现,沙利度胺能够抑制血管内皮细胞的增殖,其IC50为16.47μg/mL;然后采用Hoechst染色和流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,发现沙利度胺能够诱导内皮细胞凋亡,并干扰细胞的周期,出现G0/G1期阻滞.最后,通过Western印迹方法分析沙利度胺对血管内皮细胞Bcl-2蛋白表达的影响,发现抗凋亡的Bcl-2蛋白表达水平随沙利度胺浓度增大而降低.初步结果提示,沙利度胺可能通过阻遏抗凋亡分子Bcl-2表达,激活诱导G1期阻滞的信号通路而抑制内皮细胞新生,从而抑制肿瘤生长.诱导内皮细胞凋亡及G1期阻滞的具体分子机制正在研究中.

妊娠期糖尿病研究现状及临床早期干预意义

妊娠期糖尿病(GDM)的发病与胰岛素抵抗(IR)和分泌缺陷有关。近年来有关IR的研究多集中在几个潜在的候选因子上,如脂联素,瘦素,肿瘤坏死因子(TNF-α)及血浆游离脂肪酸。脂联素水平与IR负相关,减肥可增加脂联素水平。母体血清瘦素浓度与IR呈负相关,孕早期高血浆瘦素水平,被认为对孕期GDM发病有较高预测价值。GDM具有多基因遗传易感性,TNF-α基因308G→A变异,可增加孕妇患妊娠期糖尿病的危险性。A等位基因可能通过增加TNF-α的释放参与IR,导致GDM的发病。血浆游离脂肪酸(FFA)是IR的重要调节因素,GDM孕妇FFA水平增高。目前GDM的早期预测,早期干预正在成为可能与必要。

妊娠期糖尿病及高危孕妇生活方式干预研究进展

近年来,肥胖与妊娠期糖尿病（GDM）在全世界范围内均呈增长趋势。CHU等[1]对近几年关于妊娠妇女肥胖及GDM的20项研究进行Meta分析结果表明,GDM发病率为1.3%~19.9%。而体质量超标、肥胖、特别肥胖的妇女较正常体质量指数的妇女发生GDM的OR值分别为2.14、3.56、8.56,可见肥胖是GDM的高危因素。

血管生成抑制素和反应停对淋巴管内皮细胞生成的影响

目的:探讨血管生成抑制素和反应停对淋巴管内皮细胞增殖和游走的影响及作用机制。方法:淋巴管内皮细胞取自猪的胸导管。采用划线法和MTT法观察血管生成抑制素和反应停对淋巴管内皮细胞增殖和游走的影响。Hoechst染色检测细胞凋亡。结果:划线法和MTT法均显示血管生成抑制素和反应停对淋巴管内皮细胞的增殖和游走有明显的抑制作用。Hoechst染色证实,经血管生成抑制素和反应停处理后的淋巴管内皮细胞,核周围有凋亡小体。结论:血管生成抑制素和反应停对淋巴管内皮细胞的增殖和游走具有明显的抑制作用,且有剂量依赖性。血管生成抑制素和反应停具有促进细胞凋亡的作用。

蛋黄卵磷脂的提取方法研究

用溶剂法提取蛋黄卵磷脂,用定磷法检测所得产品的含磷量,并以此作为产品质量的评价标准;研究了乙醇浓度、抽提次数、萃取温度及金属沉淀剂对实验结果的影响,得出最佳实验条件为,用95%的乙醇抽提4次,萃取温度为25℃,以ZnC l2作为金属沉淀剂.

兔主动脉血管内皮细胞的分离与体外培养

用0.125%胰酶-0.01%EDTA对兔主动脉血管内皮细胞进行分离,在含20%胎牛血清的DMEM培养液中培养,根据内皮细胞特有的形态学特征采用免疫组化方法进行了鉴定.结果显示血管内皮细胞的体外原代培养、传代生长均良好,第Ⅷ因子和VEGFR-3抗体免疫组化均为阳性结果.

64例小儿糖尿病诊疗体会与研究新进展

目的通过对小儿糖尿病患者的诊断和治疗方法的研究以及对研究新进展的探讨,以指导临床上准确地诊断和选择合适的治疗方法,提高对小儿糖尿病的诊治和管理水平。方法选择自2013—2014年在该院进行诊治的小儿糖尿病患者64例,均为1型糖尿病。对其临床资料(主要包括诊断和治疗)进行回顾性分析及治疗新进展。其中,全部病例采用综合治疗方法,包括糖尿病患者教育、医学饮食治疗、运动治疗和药物治疗(胰岛素)及自我监测,并积极处理糖尿病的各种并发症(感染、酮症酸中毒等)和对症治疗(纠正水电解质及酸碱平衡紊乱)。每日每餐餐前2 h、餐后2 h和睡前进行BG测定并记录。治疗过程中,根据患者的自身情况适当地调整治疗方法和改变药物用量。结果经过上述正规治疗后,20例患者的血糖在治疗当天血糖均降至14 mmol/L以下,尿酮体转为阴性,脱水症状明显改善,神志渐渐清晰;5~7 d内35例患者的血糖控制在11 mmol/L以下,患者精神状态渐佳,开始少量进食;治疗2~4个礼拜后,所有患者血糖均控制至6.9~7.6 mmol/L,"三多一少"症状均有不同程度的减轻。在医院治疗一个月后,所有的患者均出院,并继续给予维持治疗。结论小儿糖尿病的治疗需及时,家属或监护人尽量在小儿发病24 h内赶往最近医院治疗。小儿糖尿病及时经正规治疗后,血糖多可得到有效的控制,并可有效地缓解各种症状和防治糖尿病各种并发症。另外,小儿糖尿病的治疗需要一直进行,必须用胰岛素治疗才能维持正常的机体代谢,防止酸中毒昏迷的发生^([1])。

小儿糖尿病健康档案管理的应用价值

目的探讨对小儿糖尿病患者进行健康档案管理的应用价值。方法选取2014年4月—2015年4月该院儿科住院部收治的118例小儿糖尿病患者作为研究对象,随机平均分为研究组与对照组,对照组行常规教育指导,研究组在对照组的基础上建立电子健康档案进行管理,并发放家庭简易纸质健康档案对日常饮食、运动、血糖及用药情况进行检测。随访3个月,对比分析两组患者血液生化指标变化。结果对照组与研究组空腹血糖、餐后2 h血糖、糖化血红蛋白较干预前相比,均有下降,但仅研究组降低程度,差异有统计学意义(P<0.05),而研究组三大血液生化指标较对照组有显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组患儿合理饮食、体育运动、服药依从性、血糖监测等家庭管理行为明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。在研究过程中,研究组与对照组低血糖事件发生率分别为6.78%、20.34%,差异有统计学意义(P<0.05),经处理后均无严重并发症发生。结论对小儿糖尿病患者进行健康档案管理可及时反映患儿血糖变化情况及原因,并作出相应调整对策,有利于血糖稳定,改善患儿生活质量,具有重大的应用价值。

血管生成抑制素对体外培养的血管内皮细胞增殖与凋亡的影响

为研究血管生成抑制素对体外培养的血管内皮细胞生长的影响,采用MTT法观察细胞的增殖情况,利用Hoest染色和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果发现血管生成抑制素能够抑制血管内皮细胞的增殖,其IC50为1.19 mg/L,并干扰内皮细胞的周期,出现G0/G1期阻滞。

vWF-△Pro改善基于蛋白质剪接的双载体BDD-FⅧ基因转移

多聚体von Willebrand因子(vWF)的功能之一是保护凝血Ⅷ因子(FⅧ)免受蛋白水解引起的快速清除.前肽缺失突变体vWF(vWF-ΔPro)不能形成多聚体,但可以结合FⅧ蛋白.为探讨vWF-ΔPro对基于蛋白质反式剪接作用介导的双载体转FⅧ基因后连接的FⅧ蛋白的分泌和活性的影响,将vWF-ΔPro基因和融合SspDnaB内含肽的B结构域缺失型FⅧ(BDD-FⅧ)断裂基因共转染293细胞进行转基因的瞬时表达,用Western印迹检测了单独转染vWF-ΔPro基因细胞的vWF-ΔPro表达量和蛋白形式,并检测了其对FⅧ的结合力;用ELISA法观察分泌至培养上清中的剪接的BDD-FⅧ,并用Coatest法检测由其产生的生物活性.结果显示,vWF-ΔPro转基因细胞呈现二聚体蛋白表达形式,其结合FⅧ的能力与转野生型vWF基因细胞相近;vWF-ΔPro共转染细胞上清中剪接BDD-FⅧ蛋白浓度为198±21ng/mL,活性为1.78±0.18IU/mL,明显高于未转染vWF-ΔPro基因的细胞对照(91±12ng/mL和1.05±0.13IU/mL),与共转染野生型vWF基因细胞对照相近(221±19ng/mL和1.95±0.22IU/mL),表明vWF-ΔPro可显著改善内含肽剪接的BDD-FⅧ蛋白的分泌和生物活性.为vWF-ΔPro转基因的基于蛋白质剪接技术双AAV载体转BDD-FⅧ基因动物体内实验提供了依据.

酸性区3融合重链促进基于蛋白质内含子的双载体B域缺失型凝血因子Ⅷ转基因表达

最近的研究表明,蛋白质内含子(intein)介导的B区缺失型凝血因子Ⅷ(BDD-FⅧ)的轻链和重链剪接可顺式促进后者的分泌,而且剪接反应在细胞内、外均可发生.为进一步提高基于蛋白质内含子的双载体转BDD-FⅧ基因的功效,将具有促进重链分泌作用的位于Pro1640～Ser1690的酸性区3(acidic region-3,AR-3)引入重链,检验对蛋白质内含子剪接的BDD-FⅧ蛋白分泌和活性的影响.用融合蛋白内含子的附加ar-3重链(HCAR3IntN)基因和轻链(IntCLC)基因共转染培养的HEK293细胞,分别用ELISA和Coatest法定量分析分泌至培养上清中剪接BDD-FⅧ蛋白量和生物活性,并用免疫印迹观察了细胞内的BDD-FⅧ剪接.结果显示,共转HCAR3IntN和IntCLC基因细胞,分泌至上清的剪接BDD-FⅧ蛋白量和活性分别为(173±26)μg/L和(1.31±0.15)U/ml,明显高于未添加ar-3的蛋白质内含子融合重链(HCIntN)与轻链(IntCLC)基因共转染细胞[(102±12)μg/L和(0.79±0.09)U/ml],提示AR-3对蛋白质内含子剪接的BDD-FⅧ蛋白分泌和活性有明显改善作用.而且,分别转HCAR3IntN和IntCLC基因细胞混合培养后的上清中,亦检测到剪接的BDD-FⅧ蛋白和活性[(35±7)μg/L和(0.28±0.08)U/ml],表明蛋白质内含子可进行不依赖细胞机制的蛋白质剪接.另外,转基因细胞总蛋白呈现明显的可与FⅧ多克隆抗体进行反应的剪接BDD-FⅧ蛋白条带,直观地反映细胞内BDD-FⅧ的剪接.为动物模体内运用蛋白质反式剪接技术的双腺相关病毒载体(AAV)转BDD-FⅧ基因实验提供了依据.

内含肽介导的氯离子通道蛋白CFTR的反式剪接

研究利用内含肽(intein)的蛋白质反式剪接功能在大肠杆菌中对囊性纤维化跨膜传导调节因子(cystic fibrosis transmembrane regulator,CFTR)的反式剪接作用.CFTR基因突变导致一种常染色体隐性遗传疾病囊性纤维化(cystic fibrosis,CF).将CFTR的cDNA于剪接反应所需的保守性氨基酸残基Ser660前断裂为N端和C端,分别与split mini Ssp DnaB内含肽的106个氨基酸残基的N端和48个氨基酸残基的C端编码序列融合,构建到原核表达载体pBV220.诱导表达后SDS-PAGE可见预期大小剪接形成的CFTR蛋白条带,Western印迹用CFTR特异性抗体进一步证明为剪接所产生的CFTR蛋白,表明内含肽可有效催化CFTR的反式剪接.

不同葡萄糖、酵母粉浓度对大杯伞深层培养的影响

采用深层培养和正交试验的方法对大杯伞在不同葡萄糖、酵母粉和MgSO4浓度下深层培养的影响进行了研究。结果表明,适宜葡萄糖浓度为2.0%、2.5%和3.0%,适宜酵母粉浓度为0.4%、0.5%和0.6%,最适培养基为葡萄糖2.5%,酵母粉0.5%,硫酸镁0.2%。

二硫键形成促进双载体转断裂B区缺失型凝血因子Ⅷ基因

双载体共转B区缺失型凝血因子Ⅷ(BDD-FⅧ)重链和轻链基因是克服腺相关病毒载体(AAV)容量限制的一种策略,但重链分泌的低效性产生链不均衡性,影响转基因的功效.假设重、轻链链间二硫键形成可提高双载体转BDD-FⅧ基因的功效,本文将BDD-FⅧ的重链A2区的Met662和轻链A3区的Asp1828突变为Cys.双载体培养的COS-7细胞共转染突变重链和轻链基因,Western blot显示细胞内二硫键交联的重、轻链蛋白形成,ELISA和Coatest分析细胞培养上清的BDD-FⅧ重链分泌量和生物活性,分别为(109±13)μg/L和(0.65±0.12)U/ml,明显高于共转野生型重链和轻链基因细胞((71±11)μg/L和(0.35±0.05)U/ml).结果表明,链间二硫键形成可提高双载体转BDD-FⅧ基因的功效,为进一步动物体内运用双AAV载体转BDD-FⅧ基因提供了实验依据.

内含肽介导三段vWF基因真核细胞转移的翻译后连接及其功能性多聚体形成

vWF(von Willebrand factor)是一种超大分子质量的血浆多聚体糖蛋白,在血栓形成和生理凝血过程中发挥重要作用,其质和/或量的缺陷导致血管性血友病(VWD),由于VWD为单基因病,且vWF为分泌性蛋白,基于基因转移的基因治疗无需特异的靶器官,因此VWD特别适合于基因治疗,但vWF基因过大(8.4 kb),难以为多数病毒载体特别是优点较多的腺相关病毒(AAV)载体承载.运用内含肽(intein)的蛋白质反式剪接功能,研究了三重载体真核细胞共转断裂3段的vWF基因,以期通过转基因翻译后的蛋白质剪接作用形成完整的功能性vWF蛋白.将vWF的cDNA于满足剪接所需的保守性氨基酸Cys1099、Ser2004的密码子前断裂为3段,分别与2种不同的内含肽即Ssp DnaE内含肽和Ssp DnaB内含肽编码序列融合,构建到真核表达载体pcDNA3.1(+),得到3个分别融合内含肽的vWF片段基因真核表达载体,共转染培养的293细胞,通过瞬时表达,电泳观察培养上清中的vWF多聚体形态,分析vWF蛋白量和凝血Ⅷ因子(FⅧ)结合力;通过共转FⅧ基因,分析了培养上清中的FⅧ蛋白量及生物活性.结果显示,通过内含肽的蛋白质反式剪接作用,共转内含肽融合的三片段vWF基因细胞上清,表现与正常人血浆和转vWF基因阳性对照细胞相似的vWF多聚体模式和FⅧ结合力,而且可明显提高转FⅧ基因后表达的FⅧ蛋白的分泌量和活性,提示剪接vWF蛋白的FⅧ载体功能的恢复.结果表明,内含肽可作为一种有效的技术手段进行三重载体共转断裂的vWF基因,为进一步基于内含肽的三重AAV转断裂vWF基因应用于VWD基因治疗研究、克服AAV的容量限制提供了依据.

双Intein介导3片段vWF的反式剪接

von Willebrand因子(vWF)基因突变导致血管性血友病(VWD),由于其基因过大在基因治疗研究中难以为多数病毒载体携带.利用双内含肽(intein)的蛋白质反式剪接功能研究断裂成3段的vWF基因分别表达后在蛋白水平的连接,旨在为vWF基因的3载体联合转移应用于VWD基因治疗研究提供依据.将vWF cDNA于满足剪接所需的保守性氨基酸Cys1099、Ser2004的密码子前断裂为3段(N、M和C),分别与splitSspDnaE intein的N端(En)、C端(Ec)和splitSspDnaB intein的N端(Bn)、C端(Bc)编码序列融合,构建到原核表达载体pET-28a(+)中的His-Tag的下游,得到3种表达载体pET-NEn、pET-EcMBn和pET-BcC.分别转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)细胞,经IPTG诱导表达后,以SDS-PAGE分析融合蛋白的表达,并进一步用His-Tag的特异性抗体进行分析;亲和层析纯化分别表达的带His-Tag标签的3段蛋白,复性后体外混合进行剪接实验以观察3片段vWF的连接.结果显示,3段预期大小的融合intein的vWF蛋白均有表达,用His-Tag抗体进行的Western印迹得到进一步证实;3段纯化的蛋白混合后可见明显的剪接条带形成,与vWF的预期分子量大小一致,表明双intein通过蛋白质反式剪接可有效连接3个片段的vWF,为进一步应用蛋白质剪接技术的3重载体真核细胞转vWF基因奠定了基础.