κ-卡拉胶五糖的制备及结构研究

本文以κ-卡拉胶（Kappaphycus striarum）为原料,经盐酸水解,强阴离子交换高效液相色谱（SAX-HPLC）分离纯化,得到了1种卡拉胶五糖。该五糖的结构经各种核磁共振波谱技术（1H-NMR,13C-NMR,1H-1H-COSY,1H-13C-HMQC）以及电喷雾离子化质谱（ESI-MS）得到了确证,其结构为:β-D-4-O-硫酸半乳糖（1→4）-α-D-3,6-内醚半乳糖-β-D-4-O-硫酸半乳糖（1→4）-α-D-3,6-内醚半乳糖-β-D-4-O-硫酸半乳糖。

海黍子多酚对亚油酸甲酯氧化的抑制作用

本文采用萃取硅胶柱层析分离技术 ,从海黍子 (Sargassum kjllmanianum)中分离获得 4种海藻多酚类物质 ,用油溶性自由基引发剂 (AMVN)引发氧化亚油酸甲酯 (Methyl linolenate,ML) ,用 HPL C测定亚油酸甲酯氢过氧化物 (ML- OOH)含量 ,以 BHT和 VE为对照 ,评价了海黍子多酚类物质的抗氧化能力。结果表明 :在自由基引发剂 (AMVN)作用下 ,获得的海藻多酚 (butylated hyohoxytoluene) (0 .2 % )对 ML氧化的抑制作用均比 BHT(0 .0 2 % )好 ,但不如 VE(0 .2 % )的效果好。

PAGE在海洋酸性寡糖分析中的应用

报道了聚丙烯酰凝胶电泳 (PAGE)法测定海洋酸性寡糖如卡拉胶、岩藻聚糖硫酸酯及褐藻胶及其衍生物的方法。实验结果表明 :PAGE对海洋酸性寡糖具有较高的分离能力。电泳后的凝胶经阿利辛蓝 (Alcianblue)染色并用扫描仪保存图象 ,所得图象通过专用分析软件对结果进行数字化分析 ,经和肝素寡糖标准品比较 。

HPLC-DAD-MS/MS法分析金银花中化学成分

目的采用高效液相色谱-二极管阵列检测器（HPLC-DAD）和液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）法分析金银花中的化学成分。方法 Hypersil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相A为水（0.1%甲酸）,B为乙腈（0.1%甲酸）,梯度洗脱,流速1.0 m L/min,DAD扫描波长范围为200~400 nm。质谱采用电喷雾离子源（ESI）,正、负两种离子检测模式同时对金银花中化学成分进行多级质谱裂解分析。以对照品及文献数据为对照,通过解析各成分的MS/MS谱图,指认各成分。结果共鉴定了17个金银花中的主要成分,包括6个有机酸类成分,3个黄酮类成分,及8个环烯醚萜。结论此法操作简单、快速、灵敏,适用于金银花中化学成分的分析和结构鉴定。

低分子肝素分析及结构表征方法的研究进展

低分子肝素是一类应用广泛的抗凝血药物,由于其强极性、微不均一性以及硫酸基团的不稳定性使得分析及表征其结构的工作有困难。本文综述了低分子肝素分析及结构表征方法,重点阐述了近年低分子肝素在电泳、色谱、质谱和核磁分析领域的研究进展,并展望了低分子肝素分析的发展趋势。

MALDI和ESI质谱鉴定肿瘤相关糖蛋白的N-糖链结构

N-糖基化是一种与疾病密切相关的蛋白翻译后修饰。为了建立糖蛋白的N-糖链结构分析方法,以唾液酸糖肽(SGP)为模式分子进行方法优化,再以人绒毛膜促性腺激素(hCG)为对象,经变性处理后用PNGase F酶解释放N-糖链,将酶解液用多孔石墨化碳小柱进行固相萃取,经纯化富集得到N-糖链后,再分别采用基质辅助激光解吸电离(matrix-assisted laser description ionization,MALDI)和电喷雾电离(electrospray ionization,ESI)两种方式对hCG的N-糖链进行结构分析。结果表明,经过质谱分析共鉴定到17种N-糖链,其中二天线的7种,三天线的5种,四天线的5种。在众多糖型中二天线糖链含量最多。MALDIMS主要得到单电荷峰,ESI-MS以带2个电荷的为主。利用MALDI-MS和ESI-MS技术可快速分析蛋白的N-糖链的结构,为进一步寻找肿瘤糖链标志物及肿瘤的早期预防诊断提供技术支持。

质谱技术表征糖药物结构的前沿进展

目前,小分子药物研究已经进入平台期,而大分子生物药物迅速发展起来。糖药物作为生物药中尤为重要的一类,被广泛应用于肿瘤、心脑血管疾病等的预防和治疗。然而无论骨架糖链还是修饰性糖链,都具有结构复杂且微不均一性的特点,这对现代分析技术提出了较高的要求。随着软电离技术、多级质谱技术的发展以及分辨率和灵敏度的提高,质谱技术已被广泛应用于糖类药物的分析和表征。对糖药物、质谱技术进行了简要的介绍,并以多糖药物和糖缀合物类药物为例阐述了质谱在糖药物结构表征方面的技术进展,此外还就质谱在糖药物新药及仿制药物研发和注册方面的应用进行了讨论。

海蒿子岩藻聚糖结构特征及其抗流感病毒活性

采用热水提取法从海蒿子中提取粗多糖,再用Q-Sepharose Fast Flow和Sepharose 4B Fast Flow纯化得到一种硫酸化岩藻聚糖,命名为SF0。通过逐步部分酸水解,该岩藻聚糖SF0被进一步分为3种次级多糖SF1、SF2和SF3,硫酸基团的含量和相对分子质量依次降低。通过单糖组成、傅里叶红外光谱(FT-IR)和13 C-NMR谱分析了4种多糖的结构特征,并探究了其抗甲型流感(H1N1)病毒的活性。结果表明,SF0主要由甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖和岩藻糖组成,摩尔比为10.8∶8.3∶3.0∶21.1∶21.2∶35.6,相对分子质量为628.1 ku,由α-D-1,2-Manp和β-D-1,4-GlcAp双糖重复单元构成核心骨架。抗甲型流感(H1N1)病毒检测表明,4种多糖都可以抑制MDCK细胞中的H1N1病毒复制。低分子量组分SF3比未降解岩藻聚糖抗病毒活性更好。初步认为该岩藻聚糖的抗H1N1病毒活性与其精细结构和分子量有关。

金银花提取物对化合物48/80、组胺及P物质诱导小鼠瘙痒模型的作用

目的探讨金银花提取物对化合物48/80、组胺及P物质诱导的小鼠瘙痒模型的作用。方法采用0.3、0.8、2.4 g/kg 3个不同剂量的金银花提取物将小鼠灌胃给药1 h后,分别皮内注射致痒物质化合物48/80、组胺和P物质,随后将小鼠置于观察笼内,用摄像仪记录1 h内小鼠的行为。结果金银花提取物可呈剂量依赖性的抑制P物质诱导的小鼠瘙痒,而对化合物48/80和组胺诱导的小鼠瘙痒没有明显的抑制作用。结论金银花提取物对P物质诱导的小鼠模型有明显的抗瘙痒作用,其抗瘙痒活性主要作用部位为角质形成细胞,而非肥大细胞。

马皮特征肽的发现及其在阿胶中马皮源成分检测中的应用

目的:发现马皮特征肽,建立阿胶中马皮源成分专属性的检测方法。方法:采用序列比对技术发现理论马皮胶原蛋白特征肽,利用胰蛋白酶酶切马皮胶样品,通过纳升液相-高分辨质谱确证了马皮特征肽GASGPAGVR。利用超高效液相色谱-三重四极杆质谱(UPLC-QQQ/MS)对马皮特征肽进行检测。色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C_(18)(2.1 mm×150 mm,1.7μm),流动相为0.1%甲酸溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0~3 min,96%A;3~8 min,96%A→92%A;8~10 min,92%A→50%A;10~12 min,50%A;12~12.1 min,50%A→96%A;12.1~15 min,96%A),流速0.3 mL·min^(-1),柱温40℃,进样量5μL;离子化模式为ESI+,进行多反应监测,选择马皮特征肽特征分子离子峰m/z 386.25→499.25,m/z 386.25→556.51作为检测离子对。结果:在马皮胶样品中检出了马皮特征肽,在阿胶、牛皮胶、猪皮胶、羊皮胶样品中均未检出马皮特征肽。该方法的检出限度为1%马皮胶的阿胶样品。对10批阿胶样品进行检测,在2批样品中检出了马皮特征肽。结论:所建立的方法经验证,专属性强,可用于阿胶中马皮源成分的检测。

驴皮特征肽的发现及其在阿胶鉴别中的应用

目的:建立阿胶中驴皮源成分的鉴别方法。方法:通过序列比对发现理论的驴皮特征肽,并利用纳升液相色谱-高分辨质谱进行确证阿胶特征肽GPTGEPGKPGDK。利用胰蛋白酶对阿胶样品进行酶解,利用超高效液相色谱-三重四极杆质谱(UPLC-QQQ MS)对阿胶的专属性特征肽段进行检测。色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×150 mm,1.7μm),流动相为0.1%甲酸溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0~3 min,96%A;3~8 min,96%A→92%A;8~10 min,92%A→50%A;10~12 min,50%A;12~12.1 min,50%A→96%A;12.1~15 min,96%A),流速0.3 m L·min^(-1),柱温40℃,进样量5μL;离子化模式为ESI+,进行多反应监测,选择阿胶特征分子离子峰m/z 380.71→374.82,m/z 380.71→493.56作为检测离子对。结果:10批阿胶样品均检出驴皮特征肽。结论:所建立的方法专属性强,可用于阿胶中驴皮源成分的鉴别。

副粘病毒HN蛋白颈部与F相互作用区功能的研究

副粘病毒（Paramyxovirus）包膜上镶嵌着两种糖蛋白血凝素-神经氨酸酶（Hemagglutinin-neuraminidase,HN）和融合蛋白（Fusion protein,F）,两者的相互作用是决定病毒宿主范围、毒力和传播的关键。为探讨HN颈部与F相互作用区（Fusion interaction region,FIR）在膜融合机制中的作用,选取新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）与人副流感病毒3型（human parainfluenza virus type 3,hPIV3）为研究对象,通过片段置换及同源重组技术构建嵌合体C1、C2,进一步将NDV及hPIV3HN的FIR内第51位丝氨酸（Serine,S）、第55位天冬氨酸（Aspartic acid,D）定点突变为丙氨酸（Alanine,A）,获得突变体NDV S51A、NDV D55A、hPIV3S51A、hPIV3D55A,对嵌合体及突变体蛋白的细胞表面表达效率、受体识别活性、神经氨酸酶活性、促细胞融合活性及半融合活性进行检测。结果：各嵌合体C1、C2及突变体NDV S51A、NDV D55A、hPIV3S51A、hPIV3D55A的细胞表达效率、神经氨酸酶活性（Neuraminidase,NA）与野生型相比差异不显著（P〉0.05）,但促细胞融合活性均有不同程度的降低（P〈0.05）,C1、C2、NDV S51A、NDV D55A、hPIV3S51A、hPIV3D55A分别为野生型的7%、9%、27%、19%、17%和21%;C1、C2、NDV S51A、NDV D55A、hPIV3S51A、hPIV3D55A的受体识别活性分别为14.7%、22.3%、35.5%、28.8%、33.9%和40.2%,与野生型相比差异显著（P〈0.05）。结果表明：副粘病毒HN蛋白颈部与F相互作用区的突变及置换使HN蛋白的促细胞融合活性、受体识别活性降低,其中第51位丝氨酸（S51）及第55位天冬氨酸（D55）发挥重要作用。

海洋动物来源糖胺聚糖生物活性研究进展

糖胺聚糖具有抗凝、抗血栓、抗肿瘤、抗炎、神经保护、调节肠道菌群及预防和治疗代谢性疾病等多种生物活性,在生物医药、功能食品及日化用品等领域具有广阔应用前景。我国海洋动物资源丰富,所含糖胺聚糖含量高且结构独特,是糖胺聚糖类新药开发的重要资源。对海洋动物中糖胺聚糖的来源、结构特征、生物活性及潜在应用价值进行综述,以期为海洋动物来源糖氨聚糖的高值化利用提供科学依据。

人副流感病毒3型HN蛋白十一肽重复序列保守氨基酸突变分析

为确定人副流感病毒3型(Human parainfluenza virus type 3,hPIV3)病毒包膜表面血凝素神经氨酸酶(Hemagglutinin-neuraminidase,HN)糖蛋白茎部区十一肽重复序列中保守氨基酸中具有关键性作用的位点,进一步探讨HN蛋白茎部区在融合机制中的重要作用。结合定点突变和同源重组技术将HN蛋白茎部区十一肽重复序列中5个保守氨基酸位点(I102、P111、L114、S119、I125)突变为丙氨酸(Alanine,A),通过痘苗病毒-T7聚合酶系统在BHK-21细胞中表达突变蛋白,定性定量检测各突变体蛋白的促细胞融合活性、受体结合活性、神经氨酸酶活性和半融合活性。突变体蛋白I102A、P111A、L114A、S119A、I125A的促细胞融合活性均有不同程度下降,依次为野生型的6%、16%、14%、87%和4%,除S119A外其余4个突变型与野生型相比差别均具有统计学意义(P<0.01);突变体蛋白I102A、P111A、L114A、S119A、I125A的受体结合活性也出现不同程度下降,依次分别为野生型的32.2%、77.4%、74.2%、83.9%和38.7%,其中I102A和I125A的受体结合活性与野生型相比差别具有统计学意义(P<0.01);突变体蛋白I102A、P111A、L114A、S119A、I125A的神经氨酸酶活性分别为野生型的66.5%、73.1%、69.1%、76.1%和72.8%,与野生型相比差别无统计学意义(P>0.05)。结果表明:茎部区十一肽重复序列对hPIV3HN蛋白的促细胞融合活性和受体结合活性具有重要意义。该区域氨基酸I102、P111、L114、I125具有关键作用,推测其能通过影响头部区受体结合活性或是与融合蛋白的相互作用等不同方式导致HN蛋白结构功能发生改变。

新城疫病毒HN糖蛋白头颈部相互作用区基因突变分析

目的明确新城疫病毒（Newcastle diseasevirus，NDV）包膜糖蛋白血凝素-神经氨酸酶（hemagglutinin．neuraminidase。HN）头颈部相互作用区91—112氨基酸（aa）片段的功能，阐明该区域促进细胞特异性膜融合的作用。方法比对NDVHN91～112aa与MeVH、RSVG、hPIV3HN，确定吸附蛋白相应的基因序列，采用片段缺失、置换和同源重组技术，构建NDVHN缺失突变体De（HN）和嵌合体Ch（MeV）、Ch（RSV）、Ch（hPIV3）；痘苗病毒-T7瞬时表达系统在真核细胞BHK-21内表达各突变体；间接免疫荧光法和流式细胞术分析各突变体蛋白在细胞表面的表达情况；蛋白功能试验分别测定各突变体蛋白的促细胞融合活性、受体识别活性和神经氨酸酶活性。结果De（HN）和Ch（MeV）、Ch（RSV）、Ch（hPIV3）的细胞表面表达效率分别为野生型的9．04％、82．20％、70．16％和75．65％；促细胞融合活性分别为野生型的3．83％、24．76％、29．42％和57．84％（P均〈0．05），其中De（HN）的促细胞融合活性基本消失，镜下未观察到合胞体形成；受体识别活性分别为野生型的13．48％、36．25％、34．93％和65．22％（P均〈0．05），与促细胞融合活性具有一致性；神经氨酸酶活性分别为野生型的10．81％、54．42％、50．13％和60．35％（P均〈0．05）。结论NDVHN蛋白91-112aa对膜融合功能有重要影响，缺失突变体膜融合功能的消失与其未能在细胞表面有效表达有关。