虾酱源枯草芽胞杆菌JZXJ-7对组胺中毒小鼠的保护作用

为探明虾酱源枯草芽胞杆菌JZXJ-7(Bacillus subtilis JZXJ-7,Bs-JZXJ-7)对组胺中毒小鼠的保护作用,采用模拟胃肠环境,研究Bs-JZXJ-7抗胃肠液消化特性;构建组胺中毒动物模型,检测C57BL/6J小鼠经Bs-JZXJ-7干预前后的疾病活动指数(disease activity index,DAI)、脏器系数、病理改变、肠黏膜紧密连接蛋白(胞质紧密连接蛋白-1和闭合蛋白)表达、肠组织细胞因子[白介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、IL-10和肿瘤坏死因子-α]和抗氧化功能(超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、总抗氧化和丙二醛)。体外研究结果显示,Bs-JZXJ-7经胃肠液孵育,存活率仍有91.53%,具有良好的抗蛋白酶酶解和耐酸碱腐蚀能力。体内研究表明,Bs-JZXJ-7能够显著(P<0.05)降低小鼠DAI值、缓解脾脏和肠组织肿大,减轻病理损伤。Bs-JZXJ-7还显著(P<0.05)上调肠黏膜紧密连接蛋白表达量,修复肠屏障功能,抑制细胞因子介导的结肠炎症和抗氧化系统调控的氧化应激。Bs-JZXJ-7改善了组胺中毒造成的机体损伤,有望成为开发“绿色”抗胺功能食品的原料。

鱼油对副溶血弧菌感染小鼠肠炎损伤和肠组织基因表达谱的影响

鱼油可以调节肠道生态系统,促进肠道健康,但是其在抵御食源性致病菌感染中的作用及机制尚不明确。本研究旨在探究鱼油对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,Vp)感染小鼠肠炎损伤和肠组织基因表达谱的影响。通过构建Vp感染小鼠模型,测定小鼠经鱼油干预前后的疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分、结肠病理评分(histopathological score,HIS)、肠纤维化标记物(Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白)表达量、细胞因子(白细胞介素-1β、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α)含量、抗氧化酶(过氧化氢酶、超氧化物歧化酶和总抗氧化酶)活力和结肠基因转录水平。结果显示,灌胃4.0 mg/d鱼油可明显降低小鼠DAI评分和HIS,减轻结肠病理损伤;鱼油还能显著下调肠纤维化蛋白表达(P<0.05),维系肠屏障功能,抑制细胞因子介导的过度炎症和氧化应激。本质上,鱼油通过改变结肠基因表达模式,上调过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferators-activated receptor,PPAR)基因表达,富集PPAR信号转导通路,抑制核因子-κB信号,减轻Vp感染诱导的机体损伤。因此,膳食补充鱼油可以使机体在遭受食源性致病菌侵袭时得到一定的保护。

鱼干中真菌毒素的污染及其防控措施研究进展

鱼干在制作和贮藏过程中易受到环境中真菌的污染,并产生真菌毒素。真菌毒素性质稳定,可通过食物链和生物富集作用直接或间接的危害人体健康。该研究对鱼干制品中真菌毒素的污染危害、产生原因及物理、化学、生物等防控方法进行系统综述,以期为水产干制品中真菌毒素的防控、保障其质量安全并提高市场竞争力提供理论基础。

T-2毒素对凡纳滨对虾肌肉品质特性和自溶作用强度的影响

通过以0.0、0.5、1.2、2.4、4.8、12.2 mg/kg T-2毒素微胶囊毒饵料20 d染毒凡纳滨对虾,采用感官评价、理化分析及显微观察法测定T-2毒素对凡纳滨对虾肌肉品质特性和自溶作用强度的影响。结果表明,T-2毒素暴露对生鲜对虾色泽具有显著性影响(P<0.05),通过理化分析得出低剂量作用时对虾肌肉硬度和咀嚼性明显升高(P<0.05),随后肌肉组织硬度、弹性、内聚性、胶黏性和咀嚼性显著降低(P<0.05);肌肉蒸煮损失率呈现先下降后上升趋势,显微结构观察肌纤维间隙不断变大,肌纤维密度下降,肌纤维碎片不断增加,肌肉品质劣化。随T-2毒素暴露剂量升高,氨基态氮溶出量逐渐降低、可溶性蛋白溶出量先升高后降低,可溶性固形物的溶出量显著增加(P<0.05),肌原纤维长度呈现显著性下降(P<0.05),扫描电子显微镜下观察肌原纤维断裂严重,自溶强度增加。

乌虾酱长期发酵过程中细菌群落演替及对生物胺形成的影响

针对长期发酵(1、2、3 a和8 a)的乌虾酱进行感官评价,用高通量测序技术探究细菌群落演替规律,高效液相色谱技术同步检测6种生物胺含量。结果发现:随发酵时间延长,虾酱逐渐呈深褐色、L^(*)值下降、b^(*)值先上升后下降、颗粒感消失、腥味和氨味下降、鲜味在发酵2 a达到最大值。虾酱中测得的细菌分属42个门,894个属和600个种;厚壁菌门和变形菌门为优势菌门,四联球菌属、嗜冷杆菌属、假单胞菌属、肠球菌属、乳酸菌属和玫瑰变色菌属为优势菌属;细菌群落多样性在发酵2 a达到峰值。虾酱中生物胺种类及含量在发酵2 a后逐渐上升,发酵8 a,样品检出腐胺、尸胺、组胺、酪胺、亚精胺和精胺。Pearson相关性分析显示,与组胺呈显著正相关的为德沃斯菌属(P<0.05),与组胺呈极显著负相关的为芽孢杆菌属、劳尔氏菌属、发光杆菌属和葡萄球菌属(P<0.01);与腐胺呈极显著正相关的为劳尔氏菌属(P<0.01),与腐胺呈显著正相关的为假单胞菌属、亚硫酸杆菌属和慢生盐场菌属(P<0.05);与尸胺呈极显著正相关的有不动杆菌属(P<0.01)。本研究为虾酱中功能菌株筛选和生物胺精准防控提供一定理论依据。

生食三文鱼源活的非可培养状态副溶血弧菌诱导C57BL/6J小鼠肠道炎性损伤

本实验探究生食三文鱼中活的非可培养(viable but non-culturable,VBNC)状态副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,Vp)对小鼠的致病力。采用VBNC-VpRS1分离株和Vp17802毒力株分别灌胃C57BL/6J小鼠,连续观察小鼠感染72 h内行为变化,测定其疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分、Vp定植量、肠道损伤、紧密连接蛋白表达和细胞因子水平。结果显示,VBNC-VpRS1组小鼠出现感染症状较Vp17802组延迟6 h;VBNC-VpRS1组和Vp17802组小鼠DAI评分、Vp结肠定植量和促炎因子水平高度显著或极显著高于对照组(P<0.001、P<0.01),结肠长度、抗炎因子及紧密连接蛋白表达量显著低于对照组(P<0.01、P<0.001、P<0.05),且伴有结肠组织结构缺损、出血积液和中性粒细胞浸润;VBNC-VpRS1结肠定植和病理损伤程度高于Vp17802(P<0.05),而抑制肠屏障功能和促进炎症反应弱于Vp17802(P<0.05)。综上可知,VBNC-VpRS1能够在小鼠体内复苏并具有较强的结肠黏附性和侵袭力,VBNC状态Vp严重威胁机体健康,应纳入生食海产品检测范围。

木瓜蛋白酶法制备抗氧化活性壳寡糖的工艺优化

为明确高抗氧化活性壳寡糖制备的木瓜蛋白酶法工艺,以壳聚糖为原料,酶解产物的DPPH自由基清除率和总还原力为检测指标,使用单因素试验探究酶底比、酶解温度、pH值、酶解时间对酶解产物抗氧化活性的影响,确定最佳酶解条件为酶底比20%、酶解温度50.00℃、pH 4.80。在单因素试验的基础上,对酶解温度、酶解时间和pH值进行Box-Behnken响应面设计并优化得到最佳酶解条件为酶解温度47.74℃、酶解pH 4.81、酶解时间1 h,预测壳聚糖酶解物的DPPH自由基清除率为65.10%,总还原力为0.323。在酶解温度48.00℃、酶解pH4.80、酶解时间1 h条件下重复试验得壳聚糖酶解物的DPPH自由基清除率为65.43%±0.71%,IC_(50)为1.86 mg/mL±0.10 mg/mL;总还原力为0.328±0.010,相当于39.44μg/mL±2.94μg/mL抗坏血酸的还原能力,该壳寡糖的平均分子质量为1603 u,产率为45.07%±3.52%,为抗氧化活性壳寡糖的研制提供理论参考。

鱼干中黄曲霉毒素B1的紫外辐照消减技术参数

【目的】确定最佳紫外消减条件,并探究此条件下紫外辐照对鱼干品质的影响。【方法】在单因素试验基础上,将黄曲霉毒素B1质量浓度、辐照时间、辐照距离因素进行组合,应用Design Expert软件与Box-Behnken试验原则对AFB1降解条件进行优化。【结果】最佳的毒素降解条件:紫外辐照条件为波长365 nm、黄曲霉毒素B1质量浓度109 ng/mL、辐照距离2.11 cm、辐照时间41 min、pH 7,对AFB1的标准溶液降解率为88.1%。该条件下金鲳鱼干与红鱼干中黄曲霉毒素B1的降解率为90.16%、85.32%,拟合性较好,且该最佳紫外辐照降解条件对鱼干品质并不存在显著影响(P>0.05)。【结论】该研究证明紫外辐照适用于鱼干中真菌毒素的消减。

四种酵母对红鱼干中镰孢菌和T-2毒素消减效应

【目的】探讨四种酵母对镰孢菌生长和T-2毒素消减的控制效应,为红鱼干防霉脱毒的应用提供理论依据。【方法】将三株鱼干源酵母分离株季也蒙毕赤酵母Ym0104、奥默柯达酵母Yk0104(Yk)和阿氏丝孢酵母Yt0104(Yt)以及一株酿酒酵母BY4741的发酵液,与三株产T-2毒素(T-2)镰孢菌(鱼干源F11、F21菌株,标准菌株DL1445-5)、不同浓度T-2在红鱼干(DRF)培养基上共培养,通过测定镰孢菌生长半径以及T-2残留量来评价四种酵母发酵液对镰孢菌生长抑制作用以及T-2的消减效果。【结果】四种酵母菌对三株镰孢菌的生长均有抑制作用,其中Ykt的抑制作用最强;对T-2均有一定的消减作用,其中Yk的消减效果最好。【结论】Yk对红鱼干中镰孢菌和T-2毒素有良好的消减效应。

1株来自丛生盔形珊瑚的球托霉鉴定及生理学特性研究

在丛生盔形珊瑚中分离得到1株形态特殊的共附生真菌XWC14-13,对其鉴定并进行生理学特性研究,为该类珊瑚共附生真菌的进一步研究提供参考。通过观察菌株XWC14-13在CA和PDA培养基的生长特性及个体特征,结合r DNA ITS1-ITS4基因序列的系统发育分析,将其鉴定为卵形孢球托霉(Gongronella butleri)。该菌株菌丝宽度为3.62~8.09μm,有膈膜,不产厚垣孢子,孢子囊大小为(5.15~7.57)μm×(23.53~25.74)μm,孢囊孢子大小为(2.02~3.03)μm×(1.52~2.01)μm。其生长温度、酸碱度和盐度的适应性研究结果表明,该菌最适生长条件为温度30℃,pH 8~8.5,盐度1%,具有一定的耐盐性及酸碱耐受性,属兼性海洋真菌。

鱼干曲霉菌分离株鉴定及产毒特性

【目的】探明湛江市售鱼干中曲霉菌(Aspergillus spp.)分离株产AFB_(1)的特性。【方法】采用马铃薯-葡萄糖琼脂(PDA)对鱼干中的曲霉菌进行分离纯化,根据菌落形态、显微形态观察和ITS序列分析对分离株进行鉴定,采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法分析菌株的AFB_(1)合成量。【结果】鱼干中曲霉菌的分离率高达47.66%,经形态学鉴定发现以黄曲霉(Aspergillus flavus)A03、烟曲霉(Aspergillus fumigatus)H32、杂色曲霉(Aspergillus versicolor)M23、欧式曲霉(Aspergillus europaeus)M11、棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)B21等为主,其中红笛鲷干(Lutjanus sanguinaus)中黄曲霉菌的含量高达1200 CFU/g。黄曲霉A03在红笛鲷干培养基中常温(27~30℃)培养21 d,产AFB_(1)能力达到3.8 ng/mL。【结论】鱼干中存在产AFB_(1)的黄曲霉菌,警示鱼干中存在AFB_(1)污染的风险。

对虾体内4种真菌毒素超声萃取LC-MS/MS检测及其蓄积分布特征

【目的】建立超声辅助萃取高效液相色谱-串联质谱法(Liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)同步检测对虾各组织及血液中黄曲霉毒素(AflatoxinB1,AFB1)、T-2毒素(T-2)、赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)与脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)。【方法】取对虾肌肉、头胸部、虾壳、肝胰腺、肠道和血液样品,采用乙腈/水(体积比85∶15)为提取溶剂,20℃超声辅助萃取60 min,正己烷脱脂,以MycoSpinTM 400柱净化,采用液相色谱-串联质谱法进行检测,用Hypersil Gold-C18色谱柱分离;以流动相甲醇和5 mmol/L的乙酸铵(含0.1%甲酸)进行梯度洗脱,流速为0.25 mL/min;采用正负离子扫描模式,外标法定量。【结果】4种真菌毒素在各自线性范围内线性良好,相关系数(r^2)均大于0.99,定量限为0.3~3.0μg/kg,回收率为75.0%~105.4%,相对标准偏差(Relative standard deviation,RSD)为2.1%~14.5%,通过超声辅助萃取条件优化,显著提高了对虾组织中真菌毒素的提取率。【结论】LC-MS/MS方法前处理简单、检测速度快、净化效果好、结果准确、可靠,适合对虾各组织中多种真菌毒素的快速检测。真菌毒素在对虾不同组织中的蓄积特征,AFB1、T-2、OTA和DON均主要蓄积于对虾肠道与血液中,蓄积率分别达到43%~52%和31%~45%,头部、肌肉、肝胰腺和外壳蓄积率均低于10%,并非真菌毒素残留的靶向组织。

金枪鱼肽可通过调节肠道菌群和系统炎症及肠道5-HT水平改善小鼠抑郁样行为

目的 考察金枪鱼肽对小鼠抑郁样行为的干预作用,并基于肠―脑轴初步解析金枪鱼肽的干预途径,为新一代抗抑郁食品或治疗剂的开发提供理论基础。方法 通过44 d慢性不可预知性温和应激造模建立抑郁小鼠模型,于造模第15天起,每日灌胃一定剂量金枪鱼肽,以蒸馏水为空白对照,鱼油为阳性对照。采用行为学指标评价小鼠抑郁样行为;分别采用酶联免疫法、鲎试剂法测定小鼠血清中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-6及LPS水平;采用高效液相色谱―质谱法测定海马区、小肠组织和小鼠粪便中5-HT的水平;采用16SrRNA基因高通量测序和生物信息学方法考察小鼠粪便中肠道菌群组成变化。结果 与模型组相比,金枪鱼肽组小鼠抑郁样行为得到显著改善且优于鱼油组。经过金枪鱼肽干预后,模型小鼠血清中显著升高的炎症因子和LPS水平得以恢复,海马区和小肠组织中显著降低以及粪便中显著升高的5-HT水平也恢复到空白组的水平;显著下降的肠道菌群丰富度得以提高;肠道菌群B/F比值由模型组的1.58升高到6.61,基本恢复至空白组水平;模型组显著降低的Muribaculaceae丰度及显著升高的Bacteroides、Alistipes丰度均恢复至空白组水平。结论 金枪鱼肽可能通过调节肠道菌群和机体炎症及肠道5-HT水平改善慢性应激诱导的小鼠抑郁样行为,研究结果为金枪鱼肽开发成为新一代的绿色安全的抗抑郁食品提供了理论依据。

副溶血性弧菌ATCC33847在五种食品中代谢产物的溶血活性及对小鼠脏器的毒性差异

研究副溶血性弧菌在食品中代谢产物的溶血活性及对小鼠脏器的损伤。将ATCC33847菌株接种于虾肉、牡蛎、淡水鱼肉、牛肉和蛋炒饭中培养,除菌过滤,以平板溶血法测定溶血活性,以不同剂量的上述滤液灌胃小鼠,测定脏器系数和生化指标。结果显示,染菌蛋炒饭滤液具有最高的溶血活性,但对小鼠脏器的损伤并不强于其它滤液;染菌虾肉和牡蛎肉滤液引起小鼠胃肠系数升高的能力显著高于(p<0.05)其他滤液。染菌的五种食品滤液引起ALB、ALP、AST、ALT和BUN指标不同程度的改变(p<0.05),其中,虾肉滤液对小鼠肝功能指标的影响强于其他滤液,具有更强的肝脏毒性,而牡蛎和鱼肉滤液表现出更强的肾脏毒性。揭示副溶血性弧菌可能在不同食品基质中会产生不同的毒力因子,对小鼠脏器造成不同的毒效应损伤。

鱼干制品中真菌及次生代谢产物污染现状

介绍在不同地区晾晒和烟熏鱼干制品中常见污染真菌种类(曲霉属、镰刀菌属、青霉属)以及产生的真菌毒素种类(黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、玉米赤霉烯酮)的来源及其危害,并简要阐述了鱼干中霉菌污染的原因和防止污染的措施。

T-2毒素肌肉注射凡纳滨对虾的毒代动力学及对P450酶活性影响

以3 mg/kg bw T-2毒素(T-2)对凡纳滨对虾肌肉注射染毒,于5,10,15,30,45,60,120,240,480,960min和1 440 min时间点采集血淋巴及肝胰腺,采用LC/MS-MS法测定对虾血淋巴中T-2浓度,并测定肝微粒体APND及ERND酶活性。使用代谢动力学3P97软件分析及使用Origin 8.5软件对肝微粒体代谢酶活性曲线拟合,探究T-2对凡纳滨对虾毒代动力学及对代谢酶的影响。结果表明,血淋巴中T-2浓度随时间的延长逐渐降低,其曲线拟合方程式为y=8.8+1587.8×0.96x,R^2=0.721;主要代谢动力学参数为k_(12):0.00 min^(-1);k_(21):9.66×10^(-2)min^(-1);k_(13):5.14×10^(-2)min^(-1);k_(31):1.41×10^(-3)min^(-1);k_(10):4.54×10^(-2)min^(-1);t_(1/2)π:7.10 min;t_(1/2)α:7.17 min;t_(1/2)β:1.06×10~3min;AUC:6.01×10~4ng·min/g;CL(s):5.00×10^(-5)g/min;VC:1.10×10^(-3)(mg/kg)/(ng/g)。对虾肝微粒体中ERND与APND代谢酶活性变化趋势符合毒物刺激效应模型,即在暴露T-2后迅速出现激活效应。经拟合曲线分析,与APND酶活相拟合的函数为Gauss,时间-反应拟合方程式为y=66.8(1-e^(-0.03x))_2^(-0).^(27),R^2=0.752;与ERND酶活相对反应度相拟合的函数为Chapman,时间-反应拟合方程式为:y=89.9+48e-2^((x-9.4)/32.5),R^2=0.995。