重组腺病毒Ad-mALR和Ad-hALR的构建及其对棕榈酸(PA)诱导的L02细胞凋亡的影响

目的构建含肝再生增强因子(ALR)基因的重组腺病毒并探讨其抗凋亡功能。方法采用基因重组法构建重组穿梭载体p Ad Track-TO4-m ALR和p Ad Track-TO4-h ALR,同源重组法构建重组腺病毒Ad-GFP-m ALR和Ad-GFP-h ALR,4轮扩增后获得高滴度Ad-GFP-m ALR和Ad-GFP-h ALR。将上述腺病毒感染L02细胞,通过绿色荧光蛋白(GFP)的表达了解其感染率;Western blotting法检测ALR及Bcl-2/Bax蛋白表达;CCK-8法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测ALR对棕榈酸(PA)诱导的L02细胞凋亡的影响。结果重组腺病毒Ad-GFP-m ALR和Ad-GFP-h ALR构建成功,且均能高效感染并稳定表达于L02细胞。与非感染组和感染空载病毒组相比,过表达ALR能促进L02细胞的增殖,并抵抗PA诱导的L02细胞凋亡作用,明显降低Bax,增加Bcl-2蛋白的表达。结论 ALR对L02细胞具有促增殖及抗PA诱导的细胞凋亡的作用。