茶叶有效成分抗肿瘤侵袭转移作用与相关机制探讨

目的观察茶叶的有效成分表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate(EGCG)]对人乳腺癌高转移细胞侵袭转移的影响作用及探讨其相关机制。方法用免疫细胞化学法检测MUC1的表达,以人工重组基底膜侵袭小室(Transwell)及明胶酶谱法(PAGE)观察其对人乳腺癌高转移细胞株MDA-MB-231细胞侵袭转移能力的影响。结果茶叶有效成分EGCG能降低MDA-MB-231细胞MUC1表达,明显抑制MDA-MB-231细胞侵袭基底膜的能力和Ⅳ型胶原酶的产生。结论茶叶有效成分EGCG具有明显的抗癌侵袭转移作用,此与降低MUC1的表达相关。

HSP90表达对乳腺癌细胞侵袭转移能力的影响

目的研究HSP90的表达与乳腺癌细胞侵袭转移能力的相关性。方法采用RTPCR和Westernblot检测HSP90在MDAMB435s和MDAMB231细胞中mRNA水平和蛋白质水平的表达差异。Transwell小室人工重组基底膜侵袭迁移实验检测经HSP90抑制剂Geldanamycin(GA)处理前后两株细胞侵袭迁移能力的改变。结果MDAMB435s细胞中HSP90α的mRNA表达水平明显高于MDAMB231细胞(P<0.01),MDAMB435s和MDAMB231细胞中HSP90β的mRNA表达水平没有明显差异(P>0.05),MDAMB435s细胞中HSP90的蛋白质表达水平明显高于MDAMB231细胞(P<0.01)。两株细胞用药前侵袭迁移能力无明显差异(P>0.05),HSP90的抑制剂GA对MDAMB435s和MDAMB231细胞的侵袭迁移能力均呈现明显抑制作用(P<0.01,P<0.05),对MDAMB435s细胞的抑制作用更明显(P<0.01)。结论HSP90的表达影响乳腺癌细胞侵袭转移能力。

肌肉标志结蛋白单抗的研制与初步应用

以鸡胗为材料提纯结蛋白,经鉴定后免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术建立了能稳定分泌抗结蛋白单抗的杂交瘤细胞株AD1,其染色体中位数为77。AD1单抗属小鼠Igg1亚类;ELISA间接法测定AD1细胞培养上清抗体效价为10^(-4);酶联免疫印迹试验显示能特异地与结蛋白起反应;经ABC-AEC免疫酶组化法鉴定组织特异性,AD1单抗具有特异地识别肌肉组织和肌源性肿瘤的能力,能用于常规病理标本的石蜡切片。AD1单抗对肌源性肿瘤和非肌源性肿瘤的病理诊断与鉴别诊断具有重要应用价值。

热激蛋白在乳腺癌细胞中的表达及其意义

目的:探讨热激蛋白(heat shock protein,HSP)90、70、27在高转移性乳腺癌细胞株MDA-MB-435s和MDA-MB-231中的表达情况及其意义。方法:MTT法检测HSP 90抑制剂geldanamycin(GA)对2株乳腺癌细胞株粘附基质胶能力的影响;侵袭小室重组人工基底膜侵袭实验检测HSP 90抑制剂GA对2株细胞的侵袭能力的影响;RT-PCR和Western blot实验检测2株细胞中HSP 90、HSP 70和HSP 27 mRNA及其蛋白质水平的表达差异。结果:GA能够明显抑制MDA-MB-435s和MDA-MB-231细胞粘附基质胶的能力(P<0.01);2株高转移性乳腺癌细胞株的侵袭能力比较无显著性差异(P>0.05),GA能够明显抑制2株乳腺癌细胞的侵袭能力,与对照组相比,MDA-MB-231细胞侵袭能力下降(P<0.05),MDA-MB-435s细胞的侵袭能力下降更为明显(P<0.01)。MDA-MB-435s细胞中HSP 90蛋白质和HSP 90αmRNA表达水平都明显高于MDA-MB-231细胞(P<0.01),MDA-MB-435s和MDA-MB-231细胞中HSP 90βmRNA表达水平没有显著差异(P>0.05);MDA-MB-231细胞中HSP 27的mRNA和蛋白质的表达水平均明显高于MDA-MB-435s细胞(P<0.01);MDA-MB-435s细胞中HSP 70蛋白质的表达水平与MDA-MB-231细胞没有显著性差异(P>0.05),HSP 70 mRNA表达水平低于MDA-MB-231细胞(P<0.05)。结论:HSP表达特性与乳腺癌细胞的粘附、侵袭能力相关;MDA-MB-435s细胞中HSP 90较高水平表达,MDA-MB-231细胞中HSP 27表达水平较高。

机能实验中心建设初探

积极推行医学教育改革,组建独立建制、独立开课的机能实验中心.着力摆脱传统教学观念束缚,坚持以创新开放为方向,综合能力训练为基础;优化设置教学内容,系统落实实施方式;加强师资的引进、培养、扶持和调整,形成实验学术队伍,建全规范实验室设备和管理水平;建立标准化、科学化、系统化实验学科,努力实现培养高素质、复合型现代医学人才的目标.

家兔胸段硬膜外阻滞麻醉的改良方法

家兔胸段硬膜外阻滞麻醉方法报道甚少，且文献报告多采用切开置管法［1,2］。我们采用自制穿刺针，不切开黄韧带和椎板间孔，直入行硬膜外阻滞麻醉，效果满意，兹介绍如下。

乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭转移中JAK抑制对ERK的作用及意义

目的:研究JAK激酶抑制剂AG490对乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)磷酸化的影响,探讨JAK激酶对ERK信号转导通路的作用以及在乳腺癌细胞侵袭转移中的调控意义。方法:以JAK激酶抑制剂AG490处理乳腺癌细胞MDA-MB-231,MTT法检测AG490对细胞的生长抑制作用;MTT法检测AG490处理后细胞对人工基底膜Matrigel的黏附能力变化;Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭和迁移实验,检测AG490处理后细胞侵袭、迁移能力变化;Western印迹法检测AG490处理后细胞中磷酸化ERK(P-ERK)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白水平变化。结果:应用JAK酶抑制剂AG490后MDA-MB-231细胞生长受到抑制,作用呈时效-量效依赖关系;MDA-MB-231细胞黏附、侵袭、迁移能力降低,同时细胞中P-ERK、MMP-9蛋白减少。结论:JAK激酶可以通过改变ERK的磷酸化水平影响ERK信号转导通路的活化。JAK激酶抑制对ERK信号转导通路的激活有阻断作用,可以抑制MMP-9的表达及乳腺癌细胞的侵袭转移。

5-氟脲嘧啶及丝裂霉素对人胃癌细胞株BGc-823的相互作用

目的 体外观察 5 氟脲嘧啶及丝裂霉素合用对人胃癌细胞株 (BGc 82 3)的相互作用。方法 采用MTT法利用中效原理判定两药合用的效果。结果 两种药单独应用时随着药物剂量增加 ,其效应也增加 ;两药大剂量 (大于中效剂量 )合用时协同作用 (CI<1) ,小剂量 (小于中效剂量 )合用时为拮抗作用 (CI>1) ;两药给药时间次序不同不会影响效应大小。结论 上述两种药合用大剂量是协同小剂量拮抗 ,且效应大小与给药时间次序无关。

JAK抑制剂AG490诱导乳腺癌细胞凋亡及对Survivin表达的影响

背景与目的:已有研究证实Survivin在多种乳腺癌中可呈高表达且与肿瘤的恶性程度和患者预后密切相关,但是Survivin在乳腺癌细胞中高表达的相关机制尚有待深入了解。本实验拟研究JAK-STAT信号通路抑制剂AG490在人乳腺癌细胞MDA-MB-231中对Survivin表达以及对肿瘤细胞增殖、凋亡的影响。方法:以MDA-MB-231细胞为研究对象,应用AG490后,用Westernblot检测细胞中P-STAT3、Survivin的蛋白表达变化、RT-PCR检测SurvivinmRNA的变化;用MTT法检测细胞增殖活性的改变;用流式细胞术检测细胞凋亡的情况。结果:AG490使MDA-MB-231细胞中P-STAT3和Survivin的蛋白表达减少,同时细胞的增殖活性降低,凋亡增多。P-STAT3/β-actin用药前为0.74,AG49040μmol/L作用24h后为0.21;Survivin/β-actin用药前为1.09,40μmol/LAG490作用24h后为0.28。40μmol/LAG490作用24h后细胞出现“亚G1”峰,凋亡率为5.62%;AG49040μmol/L,作用48h后细胞凋亡率为28.81%。结论:AG490可诱导MDA-MB-231细胞凋亡、减少Survivin的表达。

脂氧素受体激动剂BML-111减轻佐剂诱导的关节炎

目的观察脂氧素受体激动剂BML-111对大鼠佐剂诱导的关节炎(adjuvant arthritis,AA)病理改变及炎症因子表达的影响。方法♂SD大鼠足跖部注射弗氏完全佐剂诱导建立AA动物模型,脂氧素受体激动剂BML-111于造模后每日腹腔注入。观察AA大鼠足爪肿胀情况并给予定量临床评分;取病变关节切片HE染色后,光学显微镜下观察关节组织病理改变;EILSA法检测血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)浓度。结果BML-111处理降低AA大鼠关节临床病变评分并减轻关节组织病理损伤,这一效应伴有血清中TNF-α和IL-6浓度明显降低。结论脂氧素受体激动剂BML-111可减轻佐剂诱导的大鼠关节病变,提示脂氧素可调节免疫介导的慢性炎症过程,在关节炎等慢性炎症性疾病中有潜在应用价值。

JAK/STAT3和MAPK/ERK在乳腺癌细胞侵袭转移中的交互作用及意义

目的研究应用JAK酶抑制剂AG490对乳腺癌细胞MDA-MB-231STAT3和ERK磷酸化的影响,初步探讨JAK/STAT3和MAPK/ERK两条信号转导通路的交互作用以及在乳腺癌细胞侵袭转移中的调控意义。方法以JAK酶抑制剂AG490处理乳腺癌细胞MDA-MB-231,Westernblot检测细胞中P-STAT3、P-ERK蛋白水平变化;RT-PCR检测细胞中STAT3、ERK1、ERK2mRNA的变化;明胶酶谱法检测细胞分泌MMP-2、MMP-9的变化,Tran-swell小室进行人工重组基底膜侵袭和运动实验。结果应用JAK酶抑制剂AG490后人乳腺癌细胞MDA-MB-231中P-STAT3、P-ERK蛋白均减少,STAT3、ERK1、ERK2mRNA表达下降,同时可使细胞分泌MMP-2、MMP-9减少,使细胞侵袭、迁移能力降低。结论JAK/STAT3和MAPK/ERK两条信号转导通路之间存在交互作用,通过JAK酶抑制可改变转录因子STAT3和激酶ERK磷酸化水平,进而可以交互影响其基因转录的表达。JAK酶抑制对两条信号转导通路的激活有阻断作用而可以抑制乳腺癌细胞的侵袭转移。

JAK激酶抑制剂AG490对乳腺癌细胞侵袭转移的影响

目的研究JAK激酶抑制剂AG490对乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭转移的影响,探讨JAK-STAT3信号转导通路在乳腺癌侵袭转移调控中的作用。方法以乳腺癌细胞MDA-MB-231为研究对象,应用JAK激酶抑制剂AG490处理细胞,用MTT法检测细胞对人工基底膜的粘附能力变化;Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭和运动实验;Western blot检测细胞中P-STAT3水平。结果JAK激酶抑制剂AG490可使人乳腺癌细胞MDA-MB-231中P-STAT3表达减弱,同时可使细胞粘附、侵袭、迁移能力下降。结论JAK-STAT3信号转导通路参与乳腺癌细胞侵袭转移调控,阻断通路活化可以抑制乳腺癌细胞的侵袭转移。

TCS对Eca-109的增殖抑制作用及其机制初探

目的:探讨天花粉蛋白(TCS)对食管癌Eca-109细胞增殖的影响及其作用机制。方法:采用MTT法检测TCS对Eca-109细胞增殖的抑制率;电子显微镜和AnnexinV-FITC/PI双染检测细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞周期;RT-PCR法检测Eca-109细胞Survivin mRNA表达变化;Western blot检测Survivin、Caspase-3与C-myc蛋白表达变化;TRAP-PCR银染法定性测定细胞的端粒酶活性。结果:TCS对Eca-109细胞增殖有抑制作用且具有剂量-时间效应;TCS明显诱导细胞凋亡,药物组凋亡率高于对照组(P<0.05),并且药物组的S期细胞明显高于对照组(P<0.05);TCS可降低Survivin mRNA和蛋白表达,增加Caspase-3蛋白表达,下调C-myc蛋白表达、使端粒酶活性降低。结论:TCS能够抑制Eca-109细胞增殖。其机制可能为TCS影响了细胞周期和抑制了Survivin表达。

HSP 90与survivin在人乳腺癌细胞中的作用及机制探讨

目的:研究热激蛋白90(heat shock protein 90,HSP 90)和survivin在人乳腺癌细胞中的相互作用以及对肿瘤细胞增殖、凋亡的影响。方法:以人乳腺癌细胞MDA-MB-231为研究对象,用HSP 90抑制剂格尔德霉素(geldanamycin,GA)处理后,Western印迹法检测细胞中P-STAT3、survivin蛋白表达的变化;RT-PCR检测survivin mRNA的变化;MTT法检测其对细胞的增殖活性影响;流式细胞术检测凋亡的变化。结果:HSP90抑制剂GA可使人乳腺癌细胞MDA-MB-231中P-STAT3减少、survivin的蛋白表达减少,细胞的增殖活性降低,凋亡增多。结论:在MDA-MB-231细胞中,HSP 90可能通过激活JAK-STAT3信号通路,影响survivin转录表达,共同促进该肿瘤细胞的高增殖、低凋亡的恶性行为。

1,25-二羟基维生素D_3对乳腺癌MCF-7细胞CYP1B1表达的作用和COX-2/PGE2通路机制

目的分析COX-2、p-ERα、CYP1B1在人乳腺癌组织和ERα阳性表达人乳腺癌细胞系MCF-7中的表达规律,探讨1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]在人乳腺癌细胞MCF-7中通过COX-2/PGE2通路对CYP1B1表达和细胞增殖、细胞周期转化的影响及作用机制。方法用免疫组织化学法检测42例人乳腺癌组织中COX-2、p-ERα、CYP1B1的表达,并分析其相关性;MTT法检测1,25(OH)2D3对MCF-7细胞增殖的影响,并确定后续实验药物浓度;流式细胞术检测细胞周期;RT-PCR检测MCF-7细胞COX-2 mRNA水平;ELISA法检测细胞培养上清液中PGE2水平;蛋白质印迹法检测MCF-7细胞COX-2、p-ERK、p-ERα、CYP1B1蛋白水平;免疫细胞荧光检测COX-2、p-ERα、CYP1B1蛋白在MCF-7中的原位表达。结果在人乳腺癌组织中COX-2、p-ERα、CYP1B1蛋白呈阳性表达,两两之间均呈正相关性(P<0.05)。1,25(OH)2D3对MCF-7细胞增殖具有抑制作用,且呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。应用100 nmol/L 1,25(OH)2D372 h后,MCF-7细胞周期阻滞在G0/G1期(P<0.05);细胞COX-2 mRNA表达减少(P<0.05);细胞培养上清中PGE2水平降低(P<0.01);COX-2、p-ERK、p-ERα及CYP1B1蛋白表达均减少(P<0.05)。结论在乳腺癌中,COX-2/PGE2通路对CYP1B1的表达具有正向调控作用。1,25(OH)2D3可通过抑制COX-2/PGE2通路减少CYP1B1的表达,对乳腺癌细胞MCF-7的增殖产生抑制作用。

HSP90在乳腺癌细胞增殖中的作用与机制研究

目的:应用热休克蛋白90(HSP90)功能特异性抑制剂格尔德霉素(GA)研究HSP90在乳腺癌细胞增殖中的作用,进而探讨相关机制。方法:培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-435 s,采用MTT法检测GA对MDA-MB-435 s细胞的生长抑制作用,流式细胞术分析细胞周期,应用W estern免疫印迹法检测细胞内Stat3磷酸化状态和突变型p53表达变化。结果:不同浓度GA对乳腺癌MDA-MB-435 s细胞有生长抑制作用,呈时效量效依赖关系,GA作用后细胞呈现G2/M期阻滞。400 nmol/L GA作用48h后,细胞内Stat3磷酸化水平明显低于对照组,同时突变型p53表达明显低于对照组。结论:抑制HSP90功能可明显抑制乳腺癌MDA-MB-435 s细胞的增殖,此与下调细胞内Stat3磷酸化水平和突变型p53表达有关。

茶多酚与EGCG对人乳癌细胞株侵袭影响的研究

目的 :观察茶多酚和EGCG[(- ) -epigallocatechin - 3- gallate表没食子儿茶素没食子酸酯 ]对人乳腺癌细胞株MDA -MB - 2 31粘附和侵袭运动能力的影响。方法 :用 12 5 μg/ml茶多酚、EGCG处理后人乳腺癌MDA -MB - 2 31高转移细胞株 ,分别用MTT法、Transwell侵袭运动实验来研究茶多酚、EGCG对细胞的粘附和侵袭运动能力的影响。结果 :经茶多酚、EGCG处理后 ,MDA -MB - 2 31对细胞外基质成分的粘附能力降低 ,同时侵袭能力降低。结论 :茶多酚和EGCG可能通过抑制肿瘤细胞的粘附和侵袭运动能力来发押预防肿瘤侵袭的作用 。

格尔德霉素对乳腺癌细胞HSP、突变型p53和CDK4表达的影响

目的探讨格尔德霉素(geldanamycin,GA)对乳腺癌MDA-MB-435s细胞中HSP(HSP90、HSP70、HSP27)和癌蛋白(突变型p53、CDK4)表达的影响。方法采用MTT法检测GA对乳腺癌MDA-MB-435s细胞的生长抑制作用,RT-PCR检测GA作用后细胞内HSP90、HSP70、HSP27mRNA表达变化,用Western blot检测GA作用后细胞内HSP90、HSP70、HSP27、突变型p53和CDK4蛋白质表达变化。结果不同浓度GA对MDA-MB-435s细胞有生长抑制作用,呈时效量效依赖关系。400nmol/LGA处理细胞48h后,细胞内HSP90、HSP70、HSP27mRNA表达和蛋白表达均增高,以HSP70增高最明显,而突变型p53和CDK4蛋白表达明显减少。结论GA通过下调突变型p53和CDK4表达抑制乳腺癌MDA-MB-435s细胞的增殖,同时GA可诱导细胞内HSP90、HSP70和HSP27表达参与细胞应激保护。

神经调节因子对MDA-MB-231细胞mtp53和HIF-1α的影响及意义

目的:探讨在ErbB2非过表达乳腺癌细胞MDA-MB-231中,神经调节因子(NRGs)/ErbB2信号通路对突变型p53(mtp53)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的影响及意义。方法:免疫细胞化学法和Western blotting检测MDA-MB-231细胞中神经调节因子(NRG)的表达。应用ErbB2受体功能抑制剂AG825处理MDA-MB-231细胞,MTT法检测细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;Western blotting检测mtp53、HIF-1α蛋白表达;RT-PCR检测HIF-1α mRNA的表达。结果:神经调节因子在乳腺癌细胞MDA-MB-231呈显著表达,Western blotting实验可见分子量44kD的NRG抗体阳性反应条带。应用ErbB2受体功能抑制剂AG825后,MDA-MB-231细胞生长受到抑制,作用呈时效、量效依赖关系(P<0.01);细胞周期阻滞在G0/G1期;细胞凋亡增加(P<0.05);mtp53、HIF-1α蛋白表达减少(P<0.05);HIF-1α mRNA表达减少(P<0.05)。结论:ErbB2非过表达乳腺癌细胞MDA-MB-231存在神经调节因子分泌,可能通过神经调节因子自分泌或旁分泌配体作用方式使ErbB2受体信号转导处于激活状态,上调mtp53和HIF-1α的表达,促进肿瘤细胞的增殖、存活能力和抑制凋亡。

鱼藤素对乳腺癌细胞MDA-MB-231线粒体通透性转换孔的作用

目的研究鱼藤素对乳腺癌细胞MDA-MB-231线粒体通透性转换孔的作用。方法MTT法检测鱼藤素对MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用;AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;罗丹明123单染法观察线粒体膜电位变化;蛋白免疫印迹法检测细胞质中Cytc的表达;分光光度法检测caspase-3蛋白活性;Fluo-3/AM荧光指示剂检测细胞内钙离子浓度变化;RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测Bcl-2和Bax mRNA及其蛋白表达。结果鱼藤素对MDA-MB-231细胞增殖具有明显的抑制作用,呈时效和量效依赖关系(P<0.05);鱼藤素处理细胞后,细胞线粒体膜电位降低,细胞质内Cytc蛋白表达水平升高,caspase-3活性明显提高,与未处理组相比差异具有统计学意义(P<0.01)。流式细胞术检测显示细胞凋亡率和细胞内钙离子浓度随鱼藤素浓度的增加而增多;RT-PCR和蛋白印迹检测结果发现鱼藤素能使Bcl-2 mRNA和蛋白表达减少,而Bax表达增加。结论鱼藤素对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制、诱导凋亡作用可能与细胞内钙超载,Bcl-2和Bax表达改变影响线粒体通透性转换孔开放,诱导线粒体膜电位降低及Cytc释放有关。