视黄醇对仔猪睾丸支持细胞体外生物学特性的影响

支持细胞是构成曲细精管上皮的重要组成细胞,视黄醇及其衍生物是雄性动物睾丸发育和精子发生中所必须的物质,支持细胞是睾丸内视黄醇及其衍生物作用的靶细胞。本研究以3~5周龄仔猪睾丸支持细胞为材料,通过分析视黄醇对体外支持细胞活力、增殖和凋亡相关基因表达、相关细胞因子转录及合成的影响,评价视黄醇对支持细胞体外生物学特性的影响。结果显示,与对照组相比,视黄醇添加浓度达到5.000、0.125μmol·L-1时,显著抑制培养24h和72h的细胞活性(P<0.05);添加1.250μmol·L-1视黄醇组和对照组相比,增殖相关基因PCNA、BCL-2和C-MYC显著下调(P<0.05),凋亡相关基因BAX显著上调(P<0.05),且支持细胞内GDNF、CSF-1和EGF在基因表达和蛋白质水平上均显著降低(P<0.05)。体外培养条件下,添加视黄醇抑制支持细胞活性,促进细胞凋亡。

利福平通过抑制蛋白激酶R活化调节鱼藤酮诱导的小胶质细胞炎症而发挥神经保护作用

目的:探讨利福平通过抑制蛋白激酶R(protein kinase R,PKR)活化对小胶质细胞炎症及其介导神经元凋亡的影响。方法:用鱼藤酮诱导BV2小胶质细胞构建PD炎症细胞模型,经利福平或者PKR抑制剂(C16)预先孵育2小时,Western blot检测p-PKR、PKR、NLRP3、Caspase-1、IL-1β等蛋白的表达量,流式细胞术(Flow cytometry)检测细胞凋亡率。结果:与鱼藤酮组相比,利福平预处理组和PKR抑制剂(C16)预处理组:p-PKR、NLRP3、IL-1β、Caspase-1蛋白表达水平出现下降(均P<0.05);共培养体系中SH-SY5Y细胞凋亡水平下降(均P<0.05)。结论:利福平可以抑制PD炎症细胞模型中PKR活化,减轻细胞炎症及介导神经元细胞凋亡。

姜黄素对犬骨髓间充质干细胞迁移能力的影响

【目的】探讨姜黄活性成分姜黄素(curcumin,Cur)对犬骨髓间充质干细胞(canine bone marrow mesenchymal stem cells,cBMSCs)迁移功能的影响。【方法】取体外传代培养条件下cBMSC作为试验材料,分别设置P3-cBMSCs为P3组,P6-cBMSCs+Cur(0、0.1、1和10μmol/L)为姜黄素处理组。采用细胞划痕实验、Transwell细胞迁移实验、微丝绿色荧光探针(Actin-Tracker Green-488)染色、RT-qPCR、细胞坏死与凋亡检测和细胞相对端粒长度检测来评估姜黄素对cBMSCs迁移能力的影响。【结果】与P3组相比,P6-cBMSCs划痕愈合率和Transwell小室外表面细胞迁移数量随着传代次数增加而降低(P<0.01);且细胞圆合度较高,应力纤维弯曲且稀少;迁移相关因子MMP-2和MMP-9的基因表达水平显著下调(P<0.01)。经姜黄素处理后,P6-cBMSCs迁移能力提高,细胞应力纤维数量和排列均得到改善;迁移相关因子(MMP-2和CXCL8)的基因表达水平均显著上调(P<0.01);细胞凋亡和坏死延缓,细胞活力得到维持;细胞相对端粒长度缩短迟滞。【结论】Cur可以改善cBMSCs因体外扩增培养而受损的迁移能力,且以1μmol/L的浓度作用最佳。

亚抑菌质量浓度的百里香酚对金黄色葡萄球菌α-溶血素表达的影响

【目的】α-溶血素在金黄色葡萄球菌(金葡菌)肺炎的感染过程中起着非常重要的作用,可作为治疗金葡菌肺炎的新靶标。因此,研究百里香酚对金葡菌α-溶血素表达的影响具有重要意义。【方法】测定最小抑菌质量浓度(MIC)和生长曲线并进行了溶血试验、蛋白免疫印迹分析、荧光定量PCR以及细胞毒性试验。【结果】百里香酚对金葡菌USA300的MIC为256μg/mL,亚抑菌质量浓度的百里香酚(32μg/mL)可下调金葡菌hla和RNAIII的转录水平,降低α-溶血素的表达,对溶血素介导的肺癌上皮细胞A549损伤具有保护作用。【结论】百里香酚具有成为新型抗金葡菌感染药物的潜力。

毛兰素缓解金黄色葡萄球菌腹膜炎的作用机制

采用微量肉汤稀释法、荧光共振能量转移试验和分子对接技术,分别探究毛兰素对金黄色葡萄球菌的体外抑制作用、对分选酶A(Srt A)的抑制作用及其作用的分子机制;通过构建小鼠腹膜炎模型,评价毛兰素对金葡菌腹膜炎的缓解作用。结果表明:毛兰素对金葡菌的体外最小抑菌质量浓度为512μg/m L,最小杀菌质量浓度大于1024μg/m L;毛兰素对SrtA活性有明显抑制作用,IC50为(20.91±2.31)μg/m L;毛兰素以紧凑的构象结合至SrtA的活性中心,与SrtA形成稳定的复合物来影响SrtA的生物活性;毛兰素对金葡菌引起的腹膜炎有良好的缓解作用,可减轻金葡菌所导致的小鼠脓肿症状。

MitoQ对犬骨髓间充质干细胞线粒体功能及抗氧化能力的影响

研究线粒体靶向抗氧化剂Mitoquinone(MitoQ)对犬骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的线粒体功能与抗氧化基因表达的作用,为进一步提高犬BMSCs的临床应用效率提供理论依据。以犬BMSCs为材料,添加MitoQ预处理48 h,采用荧光定量PCR、荧光探针等方法评估BMSCs线粒体功能以及抗氧化基因的表达水平。结果显示,随着传代次数的增加,BMSCs线粒体融合明显增强,线粒体分裂明显减弱;线粒体膜电位与ATP含量均显著下降;抗氧化基因的表达显著下调。添加MitoQ预处理后,BMSCs线粒体融合基因Mfn2的表达略有上调,且线粒体分裂基因Drp1和线粒体生物合成相关基因PGC-1α的表达显著上调;线粒体膜电位与ATP生成显著增加;抗氧化基因SOD1、SOD2、CAT和GSH-Px的表达显著上调。结果表明,MitoQ可改善犬BMSCs线粒体功能,增强BMSCs抗氧化能力。

靶向调控lncRNA-T199678基因对SHSY5Y细胞周期的影响

目的:研究lncRNA?T199678基因对细胞生长周期的影响。方法:用lncRNA?T199678 smart silence转染SH?SY5Y细胞构建lncRNA?T199678沉默细胞株,用过表达lncRNA?T199678的质粒转染细胞构建lncRNA?T199678过表达细胞株,通过qPCR实验验证细胞内lncRNA?T199678的表达变化,利用流式细胞仪检测细胞生长周期变化。结果:qPCR验证发现lncRNA?T199678沉默组中细胞内lncRNA?T199678的表达明显低于NC对照组,lncRNA?T199678过表达组中细胞内lncRNA?T199678的表达明显高于NC对照组(P<0.05)。与对照组相比,lncRNA?T199678沉默组细胞处于G0/G1期的比例减少,S期的比例增加。与对照组相比,lncRNA?T199678过表达组细胞处于G0/G1期的比例增加,S期的比例减少。结论:靶向调控lncRNA?T199678基因可调控SHSY5Y细胞周期的进程。

自噬与间充质干细胞衰老的关系研究进展

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)具备多向分化、免疫调控和靶向迁移的能力,在再生医学领域一直备受关注。但是,随着供体年龄的增长和体外培养时间的延长,MSCs通常表现出衰老特征。MSCs衰老以及功能衰退被认为是机体衰老和相关退行性疾病发展的重要诱发因素,同时也制约着MSCs在再生医学领域中的应用。自噬是溶酶体依赖途径介导细胞内物质的降解和再循环过程,是真核细胞的非核(细胞质)部分得以更新的有效途径,对维持细胞稳态至关重要,是调节MSCs衰老的潜在调控靶标。对MSCs衰老的表型特征、功能变化和分子机制,以及自噬与衰老之间的关系进行综述,为促进MSCs临床应用提供理论基础。