氨磷汀对急性放射病小鼠早期骨髓造血功能的防护作用

本研究旨在探究氨磷汀(WR2721,Amifostine)对60Coγ射线6.5 Gy单次全身照射(TBI)所致急性放射病小鼠早期骨髓造血的防护作用。60只C57/BL6J小鼠随机分成正常对照(normal)、照射对照(IR)和WR2721预防给药(WR2721)3组。观察WR-2721照射前30 min给药对6.5 Gy60Coγ射线照射小鼠照射后60 d内小鼠外周血白细胞(WBC)、中性粒细胞(Neut)、血小板(Plt)和红细胞(RBC)数的影响;照射后2 h和24 h计数骨髓有核细胞数(BMNC)、流式细胞术分析造血干/祖细胞(LSK/LK)数量和观察多系骨髓细胞集落形成能力。结果显示,WR2721组的WBC和Neut在照射后4-18 d、Plt数7-18 d、RBC数10-30 d均明显高于IR组(P<0.05);照射后24 h BMNC、LSK和LK数均明显增加(P<0.05);2 h和24 h髓系祖细胞集落形成单位(CFU-GEMM)、粒系-巨噬系集落形成单位(CFU-GM)、巨核系集落形成单位(CFU-MK)、红系暴式集落形成单位(BFU-E)和红系集落形成单位(CFU-E)集落数均明显增加(P<0.01)。结论:WR2721能有效减轻急性放射病小鼠造血系统早期损伤,促进外周血细胞更早更快恢复。

基于内质网应激探讨番茄红素对帕金森病细胞模型的预防效果

目的:研究番茄红素对帕金森病细胞模型的作用效果,探究其可能作用机制。方法:采用0.5μmol/L的鱼藤酮作用SH‐SY5Y细胞24 h建立帕金森病细胞模型。将实验随机分组为对照组、番茄红素组、鱼藤酮组、不同浓度(低、中、高)番茄红素预处理组。采用CCK‐8法检测细胞活力,显微观察法观察细胞形态,Hoechst染色观察细胞凋亡情况,Western blot法、细胞免疫荧光法检测内质网应激标志物GRP78、CHOP的表达分布。结果:与对照组比较,鱼藤酮组细胞活力明显下降,细胞凋亡信号明显;与鱼藤酮组比较,番茄红素预处理组的细胞活力均有提高,差异均具有统计学意义(P<0.05);细胞凋亡信号减弱。鱼藤酮组GRP78和CHOP的表达较对照组明显增多(P<0.01),而高浓度番茄红素预处理组两者的表达量均低于鱼藤酮组(P<0.05)。结论:番茄红素预处理对鱼藤酮诱导的SH‐SY5Y细胞有明显保护作用,此作用可能与番茄红素预处理可有效缓解鱼藤酮损伤的细胞发生内质网应激有关。

DiI标记微血管可视化方法的建立及其在小鼠肠型急性放射病研究中的应用

目的建立荧光染料DiI心脏灌注标记血管的方法，用于观察小鼠小肠绒毛微血管结构在肠型急性放射病（IF—ARS）发生、发展中的变化，以期为IF．ARS的发病机制研究提供一种可行方法。方法 50Coγ线腹部局部照射C57BL／6小鼠建立肠型急性放射病动物模型；H_E染色观察照射小鼠小肠黏膜损伤；应用荧光染料DiI小鼠心脏灌注法标记血管．荧光显微镜和激光共聚焦显微镜下观察小鼠小肠绒毛微血管结构及其在照射后的变化。结果17．5Gv腹部局部照射的C57BL／6小鼠在照后第5天很少发现再生绒毛和隐窝，已达到肠型急性放射病的损伤程度。成功建立了DiI心脏灌注标记血管方法，在对照组可观察到完整且清晰的小鼠小肠绒毛微血管三维结构．而在照射组发现照后24h和48h内小肠绒毛微血管相继出现舒张、渗出的损伤改变．照后3～5d以微血管网充盈不良甚至脱落为主要表现。结论成功建立了DiI标记的小鼠小肠绒毛微血管可视化的方法，且将其初步应用于观察小鼠小肠绒毛结构及其在肠型急性放射病发生、发展中的变化是可行的。

白细胞介素37对宫颈癌HeLa细胞顺铂化疗敏感性的增强作用

目的:通过将白细胞介素37(IL-37)基因转染到宫颈癌HeLa细胞中,探讨IL-37对宫颈癌细胞的杀伤作用及其对宫颈癌细胞化疗敏感性的增强作用。方法:将重组pIRES2-EGFP/IL-37质粒(IL-37组)和pIRES2-EGFP质粒(NC组)分别转染到HeLa细胞。Q-PCR和Western blotting法检测IL-37基因和蛋白表达水平;CCK8法检测NC组、IL-37组、顺铂(DDP)组及IL-37+DDP组细胞活性,计算细胞抑制率;RT-PCR法检测信号转导和转录激活因子3(STAT3)及细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)mRNA表达水平。结果:与NC组比较,IL-37组IL-37mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。给药后24~72h,5~15mg·L-1 DDP组HeLa细胞活性受到明显抑制(P<0.01);与DDP组比较,IL-37+DDP组HeLa细胞抑制率在处理后48h内明显升高(P<0.05);与IL-37组比较,IL-37+DDP组HeLa细胞抑制率在处理后96h内均有升高(P<0.05)。与NC组比较,IL-37组STAT3和Cyclin D1mRNA表达水平明显下降(P<0.01)。结论:IL-37高表达可抑制宫颈癌细胞的增殖,并能增强DDP对宫颈癌细胞的放疗效果,这种效应的发挥可能与IL-37使STAT3和Cyclin D1表达下调有关。

脑心通对小鼠巨噬细胞Raw264.7的活力及凋亡的影响

目的研究脑心通(Naoxintong,NXT)对Raw264.7小鼠单核巨噬细胞系细胞活力和凋亡的影响及NXT的作用特点。方法实验设置空白组(培养基100μL)、对照组[细胞悬液100μL+1/10二甲基亚砜(DMSO)原液1μL]和三种浓度的NXT组。用CCK-8法检测空白组、对照组、1∶1 000 NXT组、1∶10 000 NXT组和1∶100 000NXT组经NXT作用12 h后Raw264.7细胞的活力。选取1∶1 000 NXT组,CCK-8法检测作用1 h、3 h和6 h后Raw264.7细胞的活力。用Hoechst 33258细胞凋亡试剂盒检测对照组和1:1 000的NXT组的细胞凋亡程度。结果与对照组比较,1∶1 000 NXT组和1∶10 000 NXT组分别提高Raw264.7细胞活力至(108.2±5.35)%和(105.69±3.02)%,差异均有统计学意义(P<0.05);作用6 h内,NXT对Raw264.7细胞活力的提高效果均非常显著,差异有统计学意义(P<0.05);1∶1 000的NXT DMSO浸取原液组细胞凋亡数量显著减少。结论 NXT可提高Raw264.7细胞活力,降低细胞凋亡,其最佳作用浓度1/1 000,最佳作用时间1～6 h。

胃癌患者三级淋巴组织的分布及其与患者预后的关系和意义

目的:探讨三级淋巴组织的分布及其与胃癌患者预后的关系及意义。方法:选取进行胃癌手术的患者作为研究对象,收集手术后的病理标本及相关资料。采用回顾性观察病理切片标本的方法,将患者的肿瘤组织内三级淋巴组织(TLT),即局部出现的淋巴小结或片状的淋巴细胞聚集灶的分布频率进行计数分组,分为分布缺失、低频率和中高频率3组。并对相应各组的胃癌患者临床资料、病理资料及预后进行统计学分析。结果:胃癌患者中三级淋巴组织分布缺失组11.6%、低频率组36.0%和中高频率组52.4%。胃癌患者肿瘤组织TLT分组与病理学分期(pTNM)、Lauren分型、肿瘤细胞分化程度有关。单因素分析结果显示,胃癌组织TLT分布程度、年龄、肿瘤浸润程度、肿瘤远处转移和TNM分期对患者的生存率有影响;胃癌患者中,TLT低频率组和中高频率组的患者预后较好,TLT缺失组患者的预后较差。Cox比例风险回归模型分析结果所示,胃癌组织TLT分布程度、肿瘤浸润程度和肿瘤远处转移是影响胃癌患者远期生存率的独立因素。结论:胃癌三级淋巴组织分布对患者生存率有影响,且是患者远期生存率的独立因素,可作为临床预后参考指标。

siRNA干扰白介素6抑制宫颈癌C33a细胞侵袭能力的研究

目的:探讨白细胞介素6(IL-6)对宫颈癌C33a细胞侵袭能力的影响。方法:宫颈癌C33a细胞分为对照组和siIL-6组(RNA干扰处理组),利用新型阳离子脂质体转染试剂Hilymax导入IL-6 RNA干扰序列,并检测IL-6基因的表达,而后应用Transwell实验检测C33a细胞侵袭能力的改变。结果:与对照组比较,qPCR实验结果显示,RNA干扰组IL-6 mRNA下降了41%(P<0.01),显示成功干扰了IL-6的基因表达;Transwell实验结果显示,较之于对照组,干扰组IL-6 C33a细胞侵袭细胞数减少(P<0.01)。结论:本研究成功干扰了IL-6基因表达,并且IL-6表达抑制导致C33a细胞侵袭能力下降。