乙型肝炎病毒e抗原基因与绿色荧光蛋白基因的融合及其表达

质粒pS65T含有T7启动子驱动的绿色荧光蛋白突变型gfpS65T基因，经修饰后，在其中插入乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）基因，使两基因同框成为融合基因。在大肠杆菌BL21中由于T7启动子的控制，高效表达了具有双功能（抗原性和发光性）的融合蛋白（GFP－HBeAg）。融合蛋白MW为52kDa，N端有6个组氨酸残基，因而用Ni金属螯合层析柱对融合蛋白进行了分离纯化，利用诊断HBV的ELISA试剂盒检测了融合蛋白的抗原性，在荧光显微镜下观察到了融合蛋白的绿色荧光。并探讨了用其组装成新型免疫诊断试剂的可能性。

用杆状病毒载体在家蚕细胞中表达HBeAg基因及其表达产物纯化的研究

以 PCR技术扩增含有 Pre- C信号肽序列及完整的 HBe Ag基因序列 (即 HBc Ag基因5′端 447bp) ,克隆至家蚕核多角体病毒转移载体 p Bm0 30 ,与野生型 Bm NPV DNA共转染家蚕Bm N细胞 ,空斑纯化后得重组病毒。研究结果表明 Bm N细胞能正确识别与切割 HBe Ag信号肽序列 ,所表达的 HBe Ag效价高 ,纯度好 ,ELISA法测得培养上清中 HBe Ag效价达 1∶ 32 0 0 0。上清经过 Sephacry1 S- 2 0 0和 DEAE- Sepharose FF两步纯化 ,得到电泳纯 HBe Ag。