氮网球花定碱盐酸盐对活化T细胞增殖的抑制作用

目的探究氮网球花定碱盐酸盐(NMHC)抑制活化T细胞增殖的作用机制。方法Ficoll法提取分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),免疫磁珠法纯化出PBMC中的T细胞,抗人CD3/CD28抗体活化纯化后的静息T细胞。NMHC 0.125,0.5,2和8μmol·L^(-1)与静息T细胞作用,用流式细胞术检测细胞毒性(96 h)、活化T细胞增殖(96 h)、T细胞表面活化标志CD25表达(24 h)和活化T细胞细胞周期(72 h)。NMHC 0.125,0.5,2和8 pmol·L^(-1)与活化T细胞作用24或48 h,用ELISA测定培养上清中白细胞介素2(IL-2)、IL-6、IL-17A和干扰素γ(IFN-γ)水平。结果NMHC 0.125,0.5,2和8μmol·L^(-1)抑制抗CD3/CD28抗体活化的T细胞增殖,IC_(50)为(0.28±0.04)μmol·L^(-1),且与静息T细胞作用96 h无显著细胞毒性。NMHC显著抑制CD25表达,具有浓度效应关系(r=-0.980,P<0.05)。NMHC 2和8μmol·L^(-1)作用72 h可调节细胞周期,G_(0)/G_(1)期细胞增加(P<0.05),S期细胞减少(P<0.05),具有浓度-效应关系(r=0.920,P<0.05);细胞上清液中IL-2,IL-6,IL-17A和IFN-γ水平显著降低(P<0.05)。结论NMHC可抑制T细胞活化标志分子CD25的表达和IL-2的分泌,阻滞细胞周期于G_(0)/G_(1)期,同时抑制炎性细胞因子IL-6,IL-17A和IFN-γ的分泌,这可能是其抑制T细胞增殖的作用机制之一。

水仙环素抑制T细胞增殖的作用机制

目的探究水仙环素抑制T细胞增殖与功能的作用机制。方法密度梯度离心法及免疫磁珠法纯化人外周血T细胞,anti-CD3/anti-CD28抗体活化T细胞。使用流式细胞仪检测细胞增殖、CD25的表达、细胞毒性及细胞周期;酶联免疫吸附试验检测细胞因子IL-2、IL-6、IL^(-1)7及IFN-γ的分泌水平。结果水仙环素抑制anti-CD3/anti-CD28抗体活化的T细胞增殖,IC_(50)为(0.011±0.001)μmol·L^(-1),且浓度达0.24μmol·L^(-1)也不影响静息T细胞的存活。水仙环素抑制活化T细胞表达CD25和分泌IL-2,阻滞T细胞周期于G_0/G_1期。水仙环素对细胞因子IL-6、IL^(-1)7及IFN-γ的抑制作用呈剂量依赖效应。结论水仙环素抑制T细胞增殖活化并显著抑制促炎细胞因子分泌,提示水仙环素有望成为先导化合物开发新型免疫抑制剂。

愈疡胶囊对铜绿假单胞菌烫伤感染的促修复研究

目的:探讨愈疡胶囊对铜绿假单胞菌(P. aeruginosa)的抑菌作用及对大鼠烫伤感染的治疗。方法:采用杯碟法研究愈疡胶囊对P. aeruginosa的体外抑菌效果,扫描电镜观察细菌膜的受损情况。将50只SD大鼠随机划分为5组:模型对照组,愈疡胶囊高、中、低剂量组(157.5, 315, 630 mg/kg)和阿莫西林(125 mg/kg)阳性对照组,每组各10只。将大鼠背部烫伤并涂抹菌液建立大鼠烫伤感染模型,采用灌胃方式每天给药一次,持续8天。记录大鼠一般体征如积脓、红肿、溃疡等并分级评分。取感染部位皮肤组织,匀浆铺板统计菌落数、测量炎症因子含量,并进行H&E染色观察组织恢复的病理学过程。结果:杯碟法实验表明高剂量组抑菌圈直径(1.3992 &#177;0.0080 cm)明显大于对照组(0.6 &#177;0.0086 cm),差异有显著性(P 【0.01)。扫描电镜结果显示愈疡胶囊治疗后可导致P. aeruginosa细菌膜出现皱褶、凹陷和变形,进而杀灭细菌。体内动物实验结果表明愈疡胶囊能够明显减少感染区域的细菌定植数量,高剂量组菌落数(117 CFU)明显低于模型对照组(694 CFU) (P 【0.01);通过调节炎症因子水平促进伤口愈合;H&E染色结果和伤口愈合速率证明愈疡胶囊能够促进大鼠伤口愈合,减缓组织炎症,促进粒状组织形成,有利于表皮新生。结论:愈疡胶囊对P. aeruginosa具有较好的抑菌作用,可用于临床治疗P. aeruginosa引起的烫伤感染。

不同离心力分离外周血单个核细胞的条件优化

目的观察不同离心力对人外周血单个核细胞(PBMC)分离的影响。方法采用聚蔗糖密度梯度离心法分离人外周血中PBMC,不同分离离心力及洗涤离心力获取细胞,利用流式细胞仪检测细胞得率和存活状况,并进行统计学分析。结果分离离心力结果:离心力600g时获取的细胞数最多;24h检测的凋亡细胞数在离心力300～900g分离时差异无统计学意义(P>0.05)且相对较少,增加离心力,凋亡细胞数增加;72h检测离心力大于1 200g或低至300g时,存活细胞数显著减少。洗涤离心力结果:离心力150g时细胞得率显著低于300～2 400g时;24h检测细胞凋亡显示离心力大于600g时,凋亡细胞数增加;72h检测显示洗涤离心力大于1 200g时,存活细胞数显著减少。结论分离离心力在600～900g及洗涤离心力在300～600g均可用于PBMC的分离。

圆叶节节菜提取物的抗菌活性及机理研究

目的 研究圆叶节节菜提取物的抑菌活性及作用机理。方法 采用纸片扩散法和二倍稀释2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色法测定金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的抑菌圈直径、最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC);并通过测定电导率、核酸、碱性磷酸酶活性和蛋白质的含量,初步阐明其抑菌机理。结果 圆叶节节菜提取物对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的抑菌圈直径为9.02~11.46 mm,其MIC和MBC分别为0.625、1.25 g·mL-1;用提取物处理后,菌胞外电导率、核酸、碱性磷酸酶和蛋白质的浓度明显增加,表明提取物增加了菌细胞的通透性,导致菌胞内物质泄露,最终导致菌生长受到抑制。结论 圆叶节节菜提取物具有抗菌活性,其抗菌作用可能与膜壁屏障受损有关。

伪石蒜碱抑制活化T细胞增殖与功能的机制研究

目的探究伪石蒜碱抑制活化T细胞增殖与功能的机制。方法密度梯度离心法和免疫磁珠法分离纯化T细胞,抗CD3/CD28或植物凝集素(phytohemagglutinin,PHA)活化T细胞。流式细胞术检测细胞增殖、细胞凋亡、CD25表达及细胞周期;ELISA检测细胞因子IL-2、IL-6、IL-17A、IFN-γ的分泌水平。结果伪石蒜碱抑制抗CD3/CD28或PHA活化T细胞增殖,IC50分别为(0.97±0.22)μmol·L-1和(0.82±0.07)μmol·L-1。在完全抑制活化T细胞增殖的浓度下,伪石蒜碱不诱导活化T细胞凋亡,且不对静息T细胞的细胞活力产生显著影响。伪石蒜碱不影响活化T细胞表达CD25和分泌IL-2,但阻滞细胞周期于G0/G1期。伪石蒜碱显著抑制IL-6、IL-17A、IFN-γ的分泌。结论伪石蒜碱不影响T细胞的活化,但通过阻滞细胞周期于G0/G1期抑制活化T细胞的增殖,提示伪石蒜碱有望成为先导化合物用于开发新型免疫抑制剂。