鸡形觉剥夺性近视眼后极部巩膜IGF-1R/IGF-2RmRNA的表达

目的:观察鸡形觉剥夺性近视眼后极部巩膜IGF-1R/IGF-2RmRNA表达水平的变化,探讨IGF-1R/IGF-2R在实验性近视眼发生机制中的信号转导作用。方法:孵化1d的白色来亨鸡36只,右眼为遮盖眼,左眼为自身对照眼;测量实验前、单眼遮盖1,2,3wk时遮盖眼和对照眼的屈光度和眼轴长度,并检测不同遮盖时间鸡眼后极部巩膜IGF-1R/IGF-2RmRNA的表达水平。结果:鸡眼后极部巩膜可检测到IGF-1R/IGF-2Rm-RNA的表达,随着眼球的生长发育其表达水平明显升高;随着遮盖时间的延长,IGF-1R/IGF-2RmR-NA在遮盖眼后极部巩膜的表达水平显著升高;遮盖眼后极部巩膜IGF-1RmRNA的表达水平自遮盖1wk起明显高于对照眼;IGF-2RmRNA表达水平则在对照眼与遮盖眼无显著差异。结论:形觉剥夺可能通过上调鸡眼后极部巩膜IGF-1RmRNA表达水平,IGF-1R通过结合IGF并启动下游信息转导途径,从而调控巩膜细胞的增殖和分化,导致近视的发生。

基于PKI的网络信息安全模型的研究与设计

Internet/Intranet的引入为企业实现信息化,提供了一个快捷、高效、方便的网络环境,但网络信息安全问题越来越突出。PKI为基于网络的安全应用提供了一个真正可靠、稳定、安全的平台。通过对当前网络存在的安全性问题分析,首先探讨PKI/CA的体系结构并对其进行了改进,提出了一种基于PKI的可靠的网络信息安全模型,并按照此模型架构企业的PKI应用体系,并结合企业网上电子商务实例进行分析和讨论。

基于数字化校园门户的分布式身份认证系统研究

身份认证是网络安全技术的一个重要组成部分,针对网络中如何利用多台分布式服务器上的用户认证信息的进行认证的难题,提出了一种基于数字化校园门户的分布式身份认证方案来解决这一问题,并分析了其安全性。基于数字化校园门户的分布式身份认证系统在目前具有广泛的应用前景。

近视眼后极部视网膜厚度与眼轴长度的相关性研究

目的:探讨近视眼后极部不同区域的视网膜厚度与眼轴长度的关系。方法:采用视网膜厚度分析仪(retinalthicknessan-alyzer,RTA)测定45例(85眼)近视患者后极部视网膜厚度,并分析视网膜厚度与眼轴长度的相关性。结果:近视眼后极部视网膜平均厚度与性别、年龄无关,与眼轴长度明显相关,随着近视眼眼轴延长,近视屈光度明显增加,后极部视网膜厚度明显变薄,其中以黄斑周围区比黄斑区视网膜变薄更明显。结论:近视眼眼轴延长不仅会引起屈光度的近视化,还导致后极部视网膜厚度明显变薄。

喉粘膜癌前病变和癌变中VEGF、bFGF和KGF的表达分析

目的 探讨血管生成因子在喉癌发生发展中的作用。方法 本文用免疫组织化学和原位杂交方法，观察ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ和ＫＧＦ在喉粘膜不典型增生（ＤＹＳ）及鳞癌（ＳＣＣ）中的表达和分布情况。结果 ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦｍ ＲＮＡ、ＫＧＦ ｍ ＲＮＡ 在ＳＣＣ 中的表达较ＤＹＳ有所增强，其中ＶＥＧＦ不仅在上皮细胞中表达，间质中部分血管内皮细胞及炎性细胞亦表达ＶＥＧＦ；而ｂＦＧＦ、ＫＧＦ的转录仅在ＤＹＳ和ＳＣＣ的间质中出现，上皮细胞未见阳性表达，ｂＦＧＦ、ＫＧＦ阳性反应主要位于血管内皮细胞和成纤维细胞。结论 在喉癌中ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ、ＫＧＦ可能分别通过自分泌或旁分泌方式促进间质中新生血管和间质的形成，直接或间接地影响肿瘤细胞的生长。

三种组织工程鼓膜支架材料的生物相容性

背景:自体组织修复鼓膜穿孔存在增加手术创伤、取材有限等缺点,构建组织工程鼓膜是鼓膜穿孔治疗的发展方向。目的:构建3种不同材料的组织工程鼓膜支架材料,并评价其生物相容性。设计、时间及地点:随机对照动物实验,细胞学体内观察,于2004-08/2005-02在解放军第四军医大学组织工程中心完成。材料:将健康小猪的硬脑膜、真皮及人羊膜进行脱细胞处理。方法:将预先培养的豚鼠鼓膜成纤维细胞种植于3种材料表面,观察成纤维细胞的生长状态;18只豚鼠随机分为3组,于右侧背皮下分别埋植制备的脱细胞硬脑膜、真皮及人羊膜。主要观察指标:3种脱细胞生物支架材料的显微结构及组织相容性。结果:3种脱细胞材料均为网状结构,无任何细胞及细胞残核存在;豚鼠鼓膜成纤维细胞能够很好地贴附于3种脱细胞材料生长,无细胞毒性;将3种组织材料分别埋植于豚鼠皮下后,无埋植材料排出现象,1周时植入材料周围有较明显炎症反应,其中以脱细胞真皮周围组织反应较轻,4周时炎症反应消失。结论:通过脱细胞方法可以成功建立具有良好生物相容性的组织工程鼓膜支架材料;3种材料中以脱细胞猪真皮的生物相容性最佳。

基于预测误差修正的时序链路预测方法

论文主要针对时序链路预测方法进行研究。分析了静态链路预测方法的弊端,认为忽视网络演化趋势信息会对链路预测产生负面影响;还提出了链路预测误差的概念用于描述网络趋势信息,并以此为基础提出一种基于预测误差修正的时序链路预测方法。该方法首先对待预测时刻之前一个时间窗口内的多幅网络图分别采用静态链路预测方法进行预测,记录每次的预测误差并计算其修正值,最后对待测时刻静态预测结果进行修正得到最终预测结果。通过在两个真实网络数据集上进行系列实验表明,该方法较大提升了静态链路预测方法的预测精确度,与另一种典型的时序链路预测方法相比其精度也有所提升,且算法时间复杂度较低。另外,实验中还发现链路预测误差序列与网络链路总数序列存在"镜面对称"关系,分析其内在原因证明了所提方法的普适性。

反义血管内皮生长因子基因转染治疗喉癌的实验研究

目的 观察反义血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)基因转染对喉癌生长的影响。方法 克隆人VEGF基因 ,将VEGF 互补DNA(complementaryDNA ,cDNA)反向克隆到真核表达载体pcDNA3,构建反义 (以负号表示 )VEGF表达载体pcDNA3 VEGF(- ) ;利用阳离子脂质体作为载体 ,转染人喉癌Hep 2细胞 ;将转染细胞注入裸鼠皮下 ,观察肿瘤生长情况 ;将质粒pcDNA3 VEGF(- )和脂质体混合物直接注入荷瘤 (Hep 2 )裸鼠体内 ,观察肿瘤生长情况 ,通过逆转录聚合酶链反应 (reversetranscriptasepolymerasechainreaction ,RT PCR) ,观察肿瘤组织中VEGFmRNA的表达情况 ,并在透射电镜下观察荷瘤肿瘤超微结构的改变。结果 成功克隆了人VEGF基因 ,并构建了携带反义VEGF基因的真核表达载体pcDNA3 VEGF(- ) ;将其稳定转染人Hep 2细胞 ,获得了稳定表达反义VEGF的细胞系 ;将转染细胞注入裸鼠皮下 ,与对照组相比 ,肿瘤的生长速度明显减缓 ;将pcDNA3 VEGF(- )与脂质体混合物分次注入荷瘤裸鼠体内 ,肿瘤的生长较对照组明显减缓 ;在透射电镜下 ,见荷瘤肿瘤内出现大量凋亡细胞 ,肿瘤组织内毛细血管管壁变薄、不规则 ;反义VEGF质粒治疗组肿瘤组织中VEGFmRNA表达显著低于对照组。

VEGF及其受体flt对荷瘤鼠喉癌细胞增殖的影响

目的：观察血管内皮生长因子（ Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ） 对喉癌细胞增殖动力学的影响。方法：首先建立荷瘤（ Ｈ Ｅ Ｐ２ 喉癌细胞） 裸鼠动物模型，将抗 Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ 抗体及抗 Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ 受体ｆｌｔ 抗体分别注射荷瘤鼠体内，通过活体标记 Ｂｒｄ Ｕ 的方法，观察抗 Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ 抗体及抗ｆｌｔ 抗体对喉癌 Ｈ Ｅ Ｐ２ 细胞增殖的影响。结果：与对照组相比较，抗 Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ 抗体治疗组 Ｈ Ｅ Ｐ２细胞 Ｂｒｄ Ｕ 标记阳性率显著降低（ Ｐ＜ ０ ．０５） ；抗ｆｌｔ 抗体治疗组 Ｂｒｄ Ｕ 标记阳性率亦显著小于对照组（ Ｐ＜ ０．０５） ；而抗 Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ 抗体治疗组与抗ｆｌｔ 抗体治疗组 Ｂｒｄ Ｕ 标记率无显著性差异（ Ｐ ＞ ０．０５） 。结论：中和 Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ 抗体的作用及封闭 Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ 结合位点均可抑制喉癌细胞的增殖，提示 Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ 与喉癌细胞生长有着密切的关系。

一种可扩展的Cyber空间作战体系描述模型

研究了Cyber空间作战体系模型构建技术,提出一种面向Cyber空间作战模拟的战争系统建模新思路,并以此为基础提出了Cyber空间作战体系一体化逻辑网络模型。将Cyber空间作战涉及到的敌我双方作战实体视为一个整体系统的组分,抽象为网络模型的实体节点,实体间的各种合作、协同、对抗等不同类型交互行为统一抽象为网络模型的逻辑边。针对网络模型的节点和边分别建立了基于本体的实体描述模型和基于OO-LAMBDA语言的行为描述模型。通过一个真实战例的仿真实验验证了本文提出的方法的有效性和正确性。

阳离子脂质体介导NT-3基因转染豚鼠耳蜗的实验研究

目的 探讨阳离子脂质体介导的NT - 3基因转染对豚鼠耳蜗形态及功能的影响。方法 克隆人NT- 3cDNA基因 ,构建携带绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因的重组质粒pIRES2 -EGFP -NT3。采用脂质体介导的方法 ,将重组质粒转染豚鼠耳蜗 ,分别于术后 1天、2周、4周观察转染基因在耳蜗及脑干等部位的表达和分布情况。同时进行耳声发射及ABR测试 ,了解基因转染对豚鼠耳蜗听功能的影响。结果 成功克隆人NT - 3cDNA基因并构建重组质粒pIRES2 -EGFP -NT3。重组质粒转染豚鼠耳蜗后 ,荧光显微镜下观察发现耳蜗螺旋神经节、神经纤维、Corti器、血管纹等均可见绿色荧光 ,但 4周时荧光蛋白的表达强度较 1天时明显减弱。而CY3标记的NT - 3免疫荧光染色结果基本与EGFP的表达情况一致。此外 ,对侧耳蜗及第四脑室脉络膜处亦可见较强的绿色荧光。耳蜗基底膜铺片见内外毛细胞结构完整。转染前后豚鼠耳声发射及ABR阈值均无明显改变。结论 阳离子脂质体介导的NT - 3基因转染对豚鼠耳蜗形态及功能无明显影响 ;外源性NT -

浅谈烧结环冷机的跑偏与调整

烧结环冷机采用的是摩擦传动和正多边形的回转框架牵引台车运行,出现跑偏是一种普遍现象,尤其随着环冷机大型化后跑偏现象更为显著。本文通过对各种可能导致环冷机跑偏的原因进行逐一分析,指出回转框架无规则变形是环冷机跑偏最根本的原因,并通过包钢580 m^2液密封环冷机的应用实例提出了行之有效的调偏方法。

脱细胞真皮组织工程鼓膜在豚鼠鼓膜修补术中的应用

目的观察脱细胞真皮组织工程鼓膜在鼓膜修补术动物实验中的效果。方法建立豚鼠慢性鼓膜穿孔模型30只,同时构建复合成纤维细胞的脱细胞真皮组织工程鼓膜。将每只豚鼠左耳作为手术耳,施行内植法植入组织工程鼓膜,右耳作为空白对照。每周观察鼓膜愈合情况、听阈变化,同时观察组织学结构改变。结果鼓膜修补手术30耳中,2耳因感染而未愈合,愈合率为93.3%;对照耳仅4耳愈合,愈合率为(13.3%);愈合鼓膜外观与正常鼓膜相似,听性脑干反应测试示术耳听力恢复正常。苏木精-伊红染色结果表明采用组织工程鼓膜修复的的鼓膜有着正常鼓膜的三层结构,即鳞状上皮层、中间纤维层及粘膜层,而空白对照耳自行修复的鼓膜中缺少纤维层结构。结论组织工程鼓膜可以作为良好的鼓膜移植材料。

NT3基因转染对小鼠耳蜗螺旋神经节细胞生长的影响

目的 通过神经营养素 3(NT3)基因转染的方法 ,了解NT3对耳蜗螺旋神经节细胞(SGC)生长的影响。方法 建立体外培养小鼠耳蜗螺旋神经节细胞的方法 ,并进行神经丝蛋白 (NF)免疫组化染色鉴定及受体酪氨酸激酶C(TrKC)免疫组化染色。利用阳离子脂质体作为载体 ,将重组质粒 pIRES2 EGFP(增强型绿色荧光蛋白 ) NT 3瞬时转染耳蜗螺旋神经节细胞 ,观察转染后耳蜗螺旋神经节细胞的形态、数量等改变。结果 成功培养了小鼠耳蜗螺旋神经节细胞。NT3基因转染 4 8h后 ,荧光显微镜下见聚合分布的、胞体及轴突发出绿色荧光的螺旋神经节细胞 ,与未转染细胞相比 ,螺旋神经节细胞形态未见明显变化。继续培养 2周后 ,各实验组细胞的数量均减少 ,但NT3转染组细胞减少的数量低于空载体组及空白对照组。

真核表达载体pIRES2-EGFP-NT3的构建及在豚鼠耳蜗成纤维细胞中的表达

目的 构建真核表达载体pIRES2 EGFP NT3,并观察其在豚鼠耳蜗成纤维细胞中的表达及分布。方法 用RT PCR法 ,从人肝脏组织中克隆NT3 cDNA基因 ,构建真核表达载体 pIRES2 EGFP NT3,并经PCR及EcoRI/BamHI双酶切鉴定。用脂质体介导的方法 ,将用真核表达载体 pIRES2 EGFP NT3瞬时转染豚鼠原代耳蜗成纤维细胞。转染 4 8h后 ,分别在荧光显微镜下及用免疫组化法观察转染细胞中NT 3的表达。结果 人NT 3cDNA的PCR产物约为 74 4bp。序列测定结果用BLAST软件进行同源性比较 ,同源性为 10 0 %。经EcoRI/BamHI双酶切证实 ,NT 3cDNA已成功地克隆到真核表达载体pIRES2 EGFP中。用脂质体介导法 ,将 pIRES2 EGFP NT3瞬时转染豚鼠原代耳蜗成纤维细胞 ,在荧光显微镜下观察到呈绿色荧光的成纤维细胞。NT 3免疫组化染色结果显示 ,转染NT 3基因的成纤维细胞胞浆呈棕黄色着色 ;而转染空载体的成纤维细胞免疫组化染色呈阴性。结论 成功地构建真核表达载体pIRES2 EGFP NT3,并在豚鼠耳蜗原代成纤维细胞中表达 ,为NT

NT-3基因转染对耳蜗传入神经损伤保护作用电镜观察

目的探讨阳离子脂质体介导的神经营养素-3(NT-3)基因转染对庆大霉素性耳蜗传入神经损伤超微结构的影响。方法采用阳离子脂质体介导法,将携带外源性NT-3基因的重组真核表达载体增强型绿色荧光蛋白(pIRES2-EGFP)-NT-3注入豚鼠左侧耳蜗,术后3 d开始给予庆大霉素肌注(120 mg/kg),连续注射14 d,分别于停药后1 d、2周进行听性脑干诱发反应(ABR)测听,随即处死动物,并进行耳蜗取材,在透射电镜下观察耳蜗传入神经超微结构改变。结果庆大霉素停药1 d时,与正常对照组相比,空载体及磷酸盐缓冲液(PBS)组ABR阈值显著提高(P<0.01),NT-3治疗组ABR阈值增高虽不如前二者显著,但仍有差异(P<0.05),但以上3组间无显著性差异;当庆大霉素停药2周时,NT3治疗组ABR阈值虽仍有提高,但与停药1 d时相比,无显著性差异(P>0.05),而空载体及PBS组ABR阈值升高显著(P<0.05)。透射电镜下见庆大霉素停药1d时,空载体及PBS组传入性神经末稍已出现肿胀,突触间隙明显增大,I型及II型神经纤维轴索内微管排列出现紊乱,少量崩解,髓鞘板层结构尚可,I、II型神经元胞体内偶可见少量髓鞘样结构;在停药2周时,传入神经退行性改变明显加重,出现突触结构消失、空泡化,神经纤维崩解,神经元出现大量空泡化。而NT3基因转染组在损伤的早期,传入性神经从末梢到神经元仅出现轻微的改变,在庆大霉素停药2周时,神经退行性改变略加重,但仍显著轻于空载体及PBS组对照组。结论阳离子脂质体介导的NT-3基因转染对豚鼠庆大霉素性耳蜗传入神经性损伤具有一定程度的保护作用。

抗VEGF抗体及抗flt抗体对人喉癌HEP-2细胞系的生长抑制作用

目的：观察抗VEGF抗体及抗flt抗体对HEP－2人喉癌细胞生长的影响，探讨VEGF对HEP－2细胞的作用及作用方式。方法：将不同浓度的抗VEGF及抗flt抗体分别加入HEP－2细胞的培养液中，培养5天后测HEP－2细胞的活性（MTT法）。结果：不同浓度的VEGF抗体作用于HEP－2细胞时，浓度从10μg／ml至1μg／ml时，对HEP－2细胞的生长具有显著的抑制作用（P＜0．01），当VEGF浓度低于1μg／ml时，无明显抑制作用；抗flt抗体浓度从10μg／ml减至0．1μg／ml时，对HEP－2细胞的生长均有显著抑制作用（P＜0．01），当浓度低于0．1μg／ml时，抗flt抗体对HEP－2细胞的生长无显著抑制作用（P＜0．05）。结论：在体外培养条件下，中和VEGF抗体及封闭VEGF的受体flt对人喉癌HEP－2细胞的生长均有显著抑制作用，显示VEGF作为一种自分泌和旁分泌生长因子在喉癌的发生发展中发挥重要作用。

血管内皮生长因子在喉粘膜上皮良性及恶性病变中的表达及定量

观察血管内皮生长因子（VEGF）在正常喉粘膜上皮、慢性非特异性炎症组织、不典型增生及鳞癌中的表达，用图像分析系统定量的方法观察VEGF与肿瘤的生长、浸润及转移的关系，观察VEGF是否可以作为一个判断预后的指标．方法：用抗VEGF抗体通过微波处理，暴露抗原，进行标准化的EliteABC染色，并通过图像分析系统确定VEGF在以上各组织中的表达．结果：VEGF在正常组织、炎症及不典型增生、鳞癌中均有表达，但在鳞癌组中的表达明显高于其它各组（P＜0．05）；在鳞癌组中发生转移的病变VEGF的表达明显高于未转移的鳞癌组（P＜0．05）；VEGF与病理分级无关，与临床分期密切相关（γ＝0．5088，P＜0．01）．结论：VEGF不仅直接影响新生血管的形成，而且其表达与喉癌细胞的生长、浸润及转移密切相关，此外，肿瘤细胞也可表达VEGF进一步影响肿瘤细胞的生长和血管生成，VEGF可能作为一个判断预后的指标之一．

VEGF受体flk-1的表达与喉粘膜上皮癌变发生和转移的关系

目的：观察血管内皮生长因子（VEGF）受体flk－1在不典型增生及鳞癌中的表达，用图象分析系统定量的方法观察flk-1与喉癌的生长、浸润及转移的关系。方法：用抗flk－1抗体，在经过微波处理组织暴露抗原后，进行标准化的EliteABC染色，并通过图象分析系统确定flk-1在不典型增生、鳞癌中的表达。结果：在不典型增生及鳞癌中flk－1均有表达。在组织中，flk－1不仅在血管内皮细胞中、在部分浆细胞和巨噬细胞中也呈阳性反应。鳞癌组中的flk－1的表达明显高于不典型增生组（P<0．05）。在鳞癌中，随着分化程度的下降，flk-1表达有逐渐递增的趋势。在鳞癌组中发生转移的病变flk-1的表达明显高于未转移组（P<0．05）。相关分析显示flk－1的表达与肿瘤的临床分期密切相关。结论：VEGF通过自分泌和旁分泌的途径影响肿瘤细胞生长及间质中新生血管的形成，肿瘤细胞的生长与血管的发生相互依赖。flk-1与喉癌的生长、浸润及转移密切相关，flk-1可能作为一个判断预后的重要指标。

人神经营养因子NT3-cDNA基因的克隆及其真核表达载体的构建

目的 克隆人 NT- 3c DNA基因 ,构建 p IRES2 -EGFP- NT3.方法 用异硫氰酸胍 -酚 -氯仿一步法从人新鲜的肝脏手术标本提取总 RNA,并经反转录 PCR获得 NT3-c DNA.将质粒 p U C19双酶切并纯化回收大片段 ,与纯化后的 NT3- c DNA连接构成 p UC- NT3- c DNA,转化大肠杆菌XL 10 ,挑选白色克隆作酶切鉴定、测序 .将测序正确 p UC-NT3- c DNA及 p IRES2 - EGFP分别双酶切 ,前者回收 774 bp的片段并纯化 ,后者纯化回收大片段 ,将回收的 774 bp片段与纯化的大片段连接成 p IRES2 - EGFP- NT3,转化大肠杆菌XL10 ,挑选白色克隆作 PCR及双酶切鉴定 .结果 成功地从人的肝脏组织中克隆了 NT3- c DNA,并构建了真核表达载体p IRES2 - EGFP- NT3.结论 重组质粒 p IRES2 - EGFP- NT3的构建为进一步 NT3基因转染致聋豚鼠耳蜗试验奠定了基础 .