食品中产气荚膜梭菌的分离鉴定与基因分型

目的调查广州地区食品中产气荚膜梭菌的污染水平及菌型分布。方法参照国家标准方法进行产气荚膜梭菌的分离鉴定,采用针对产气荚梭菌α、β、ε、ι、CPE和β2六种毒素的基因cpa、cpb、etx、iA、cpe和cpb2序列的6对特异性引物,用多重PCR方法对分离菌株进行基因分型鉴定。同时用产气荚膜梭菌A型参照株NCTC64609作为阳性对照。结果从142份食品中分离到21株产气荚膜梭菌,以冷冻肉的带菌率最高,为19.6%;鲜肉和速冻肉饺分别为12.2%和11.9%。经多重PCR方法鉴定,均扩增出预期大小为324bp的cpa基因片段的特异性条带,未扩增出针对cpb、etx和iA基因的特异性条带,证实均为A型产气荚膜梭菌。携带β2毒素基因的产气荚膜梭菌共19株(占总分离株的90.4%),其中1株为肠毒素基因阳性的A型菌株。结论初步调查表明广州地区食品中存在可致人食物中毒的肠毒素阳性A型产气荚膜梭菌污染,为进一步建立广州地区食品中及与食物中毒有关的厌氧菌分子分型数据库奠定了基础。

女性非淋菌性泌尿生殖道炎症支原体的检测及药敏试验

女性非淋菌性泌尿生殖道炎症支原体的检测及药敏试验邓志爱周玉珍张翠廖筑华引起人类泌尿生殖道感染的支原体主要是解脲支原体和人型支原体。支原体不仅可引起非特异性生殖道感染（ＮＳＧＩ）、流产、早产，甚至可引起不孕症［１］。迄今，支原体的研究仅见有关检测的报道...

霍乱弧菌耐药性连续六年监测研究

目的探讨广州地区霍乱弧菌的耐药变迁,以指导临床合理使用抗生素。方法1998～2004年从广州地区病人、外环境水和水产品中分离到的267株霍乱弧菌,采用WHO推荐的琼脂扩散法(改良K-B法)测定氧氟沙星等22种抗生素对这些菌株的敏感性。结果6年中,对霍乱弧菌活性最高,且历年其活性不减的是氧氟沙星、阿米卡星、头孢呋辛和头孢曲松(敏感率均为100%),其次是环丙沙星、诺氟沙星、庆大霉素、妥布霉素、新霉素、卡那霉素、优立新(氨苄西林/舒巴坦)、头孢他定、头孢哌酮、头孢拉定和强力霉素,它们的敏感率在90.6%～99.6%之间。氨苄西林、头孢氨苄、复方新诺明的敏感率分别为89.5%、86.1%、85.0%;氯霉素的敏感率为79.0%;其它抗生素的敏感率不足52.0%。埃尔托型霍乱弧菌对氨苄西林、复方新诺明的敏感率高达95.6%、89.4%,而O139群霍乱弧菌敏感率仅为56.1%、61.0%(经χ2检验,P<0.005),对痢特灵的敏感性埃尔托型霍乱弧菌(38.3%)明显低于O139群霍乱弧菌(83.3%),两者有显著性差异(χ2=27.97,P<0.005)。结论氧氟沙星、阿米卡星、头孢呋辛、头孢曲松对霍乱弧菌保持非常高的敏感性,这些药物是霍乱防治的首选药物。

金黄色葡萄球菌所致食源性疾病分离株的多态性分析

目的对一起食源性疾病的病原学进行检测和分析。方法按照相关卫生检验标准对食源性疾病患者肛拭、呕吐物、剩余食品等26份检材进行致病菌检测,并对所分离的菌株进行随机扩增DNA多态性分析。结果从2名患者肛拭子、吃剩的相关食品中分离到8株产A型肠毒素的金黄色葡萄球菌,其中两份食品直接检出A型肠毒素,RAPD图谱显示8株金黄色葡萄球菌可分成2个基因型。结论结合流行病学调查资料、临床资料、病原学鉴定及随机扩增DNA多态性分析结果,证实该起食源性疾病是由于进食金黄色葡萄球菌污染的食品所致。

RAPD技术在肠炎沙门氏菌同源性分析中的应用

目的研究2004年广州市3起肠炎沙门氏菌食源性疾病分离的20株菌株和来源于从业人员健康体检的18株肠炎沙门氏菌的分子特征,为肠炎沙门氏菌食源性疾病的流行病学溯源和疫情控制提供有效手段。方法采用随机引物扩增多态性DNA分析(random ly am plified polym orphic DNA analysis,RAPD)对38株肠炎沙门氏菌进行分子分型,结合SPSS软件构建以上菌株的带型关系系统树状图,对菌株进行基因多态性分析。结果38株肠炎沙门氏菌的RAPD结果经聚类分析可分为3个聚类群,分属3个不同的克隆。结论RAPD技术可用于肠炎沙门氏菌食源性疾病的流行病学调查和溯源。

肠炎沙门菌食源性疾病的调查研究

目的:探究一起群体食源性疾病的病因.方法:采用食品卫生微生物检验国家标准(GB/T4789),霍乱诊断标准及处理原则(GB15984-1995),感染性腹泻的诊断标准及处理原则(GB17012-1997),细菌性痢疾、阿米巴痢疾诊断及处理原则(GB16002-1995),病原性大肠艾希菌、变形杆菌、沙门菌、葡萄球菌、副溶血弧菌、蜡样芽胞杆菌食源性疾病标准及处理原则(WS/T8.9.13.80.81.82-1996);对病人肛拭子和血清、可疑食品、公共用具等检材进行检测,结合流行病学调查、临床资料,分析中毒的原因.结果:患者有共同进食某超市面包房生产销售的食品,发病潜伏期为10～37 h,平均16 h,均以发热、呕吐、腹痛、腹泻等胃肠道症状为主,实验室从大肉松包、咸方包中检出肠炎沙门菌(Salmonella enteritidis).10份患者恢复期O抗体、H抗体凝集效价均呈4倍以上增长.结论:综合流行病学调查、临床资料和实验室检测结果,确认此次食源性疾病由肠炎沙门菌污染面包所致.

5种抗菌药物对无芽胞厌氧菌体外抗菌作用的研究

５种抗菌药物对无芽胞厌氧菌体外抗菌作用的研究邓志爱廖筑华梁娇玲陈艳玲＊（广东药学院微生物学教研室，广州５１０２２４）关键词无芽胞厌氧菌；药敏试验；最低抑菌浓度中图号Ｒ９７８近几年来，临床上无芽胞厌氧菌的感染日益增多。而无芽胞厌氧菌作为人体的正常菌群...

儿童牙齿表面的菌群分布与龋齿的关系

本实验从幼儿园和小学一年级的学生中选择５－８岁的无龋齿和有龋齿的儿童各４５例，进行牙齿表面的菌群分布与龋齿关系的研究，结果在有龋组中分离到变形链球菌８株，放线菌６株及拟杆菌２６株，而在无龋组中未分离到变形链球菌，分离到放线菌１株，拟杆菌１４株，两组比较，以上三种菌有显著差异（Ｘ２检验Ｐ＜０．０５）。说明除变形链球菌是主要的致龋菌外〔１，２〕，还应考虑放线菌和拟杆菌在龋齿发生上的作用。此外，我们还发现两组的兼性厌氧菌的分布也有所不同，无龋组中分离到棒状杆菌２９株，而有龋组中分离到棒状杆菌１１株，小肠结肠炎耶尔森氏菌７株，两组也有明显差异，故我们认为龋齿发生的原因可能是多方面的，就病原菌来说，也可能是多种细菌的混合作用，从两组兼性厌氧菌与无芽胞厌氧菌的分布不同来看。

广州市外来建筑工人流脑病原菌带菌状况调查

目的了解广州市建筑工地外来民工流脑病原菌带菌状况,为该市流脑的防治工作提供科学依据。方法采集相关人群咽拭子,用双抗巧克力平板分离培养,挑取疑似菌落作纯培养,再进一步作涂片、染色、镜检、生化反应及血清学鉴定。结果调查的545名外来建筑工人脑膜炎奈瑟菌带菌率为10.83%。其中疫点带菌率高达13.54%,血清学鉴定以A群为主(59.57%),B群、C群、1916型、待定型分别占3.17%、0.86%、0.29%、1.15%。非疫点带菌率为6.06%;以B群为主(占91.67%)。调查的216名当地居民带菌率为2.78%,也是以B群为主(占66.67%)。结论广州市外来建筑工人脑膜炎奈瑟菌带菌率较高,今后应将外来流动人口纳入监测的范围。

医院感染凝固酶阴性葡萄球菌分布及耐药性分析

目的分析医院感染凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)的分布及耐药性。方法对临床分离的CNS进行鉴定,以K-B法检测药敏,Nitrocefin色原法测定β-内酰胺酶,刚果红平板法检测黏质。结果在162株CNS中,检出表皮葡萄球菌83株,占51.2%;耐苯唑西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)102株,100.0%产β-内酰胺酶,黏质阳性率17.6%;苯唑西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌(MSCNS)60株,5.0%产β-内酰胺酶,黏质阳性率1.7%;MRCNS对12种抗菌药物耐药性明显高于MSCNS(P<0.01);所有CNS对万古霉素敏感。结论CNS已为重要医院感染菌;CNS耐药性增高与产β-内酰胺酶和黏质有关;临床应积极进行病原学和耐药性监测,合理用药。

重症监护病房中呼吸机相关肺炎的病原学和耐药性特征

目的探讨重症监护病房(ICU)中呼吸机相关肺炎(VAP)的流行病学、病原菌分布、耐药性特征。方法对广州市3所三级甲等医院ICU发生VAP的53例患者进行前瞻性研究,对病原菌进行细菌鉴定和耐药性分析。结果VAP平均发病时间为机械通气后7.8 d。97株病原菌中革兰阴性细菌58株(59.8%),革兰阳性细菌23株(23.7%),真菌16株(16.5%)。最常见病原菌分别为铜绿假单胞菌16株(16.5%),金黄色葡萄球菌13株(13.4%),嗜麦芽窄食单胞菌8株(8.2%),肺炎克雷伯菌8株(8.2%),白色念珠菌8株(8.2%)。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检出率为100.0%;未发现耐万古霉素金黄色葡萄球菌;VAP病原菌存在严重的多重耐药性。结论ICU中VAP的病原菌构成以革兰氏阴性杆菌为主且呈现多重耐药现象,适当的经验性抗菌治疗应以病原学和耐药性的监测结果为依据。

副溶血性弧菌食源性疾病分离株的RAPD分子分型研究

目的:探讨副溶血性弧菌食源性疾病分离株的基因多态性。方法:采用随机扩增多态性分析(RAPD)对副溶血性弧菌食源性疾病分离株进行分子分型,结合SPSS软件构建以上菌株的带型关系系统树状图,对菌株进行基因多态性分析。结果:所采用引物能从副溶血性弧菌扩增出特异性的DNA条带,分型效果较好,所有46株副溶血性弧菌中大部分的RAPD结果经聚类分析可分为3个主要聚类群,较好地反应了不同血清型和不同来源菌株的亲缘关系。结论:可应用RAPD方法进行食源性疾病的流行病学调查和溯源。

广州市市售食品食源性致病菌污染状况调查

目的了解广州市市售食品中食源性致病菌的污染状况。方法采用随机抽样方法分别对我市10个区以及两个地级市的集贸市场、超市、宾馆饭店及个体熟食销售点的7类食品共363份样品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、单增李斯特菌、肠出血性大肠杆菌O157∶H7、空肠弯曲菌等6种致病菌依据国标的方法进行了监测。结果363件样品中检出致病菌72株。其中副溶血性弧菌检出率为33.93%,主要污染水产品;金黄色葡萄球菌为3.00%,主要污染熟食品;沙门氏菌和单增李斯特菌检出率分别为1.93%和0.66%;未检出大肠杆菌O157:H7和空肠弯曲菌。在各类食品中,致病菌带菌数有显著性差异(以!2检验,P<0.005)。水产品致病菌带菌率最高,以副溶血性弧菌为主;其次为生肉类,以检出沙门氏菌为多。结论我市市售食品存在食源性致病菌污染,水产品和生肉类是主要污染食品。应加强市售食品监督管理,以减少可能引起食源性疾病的因素。

重症监护病房医院感染铜绿假单胞菌耐药性及脉冲场凝胶电泳分型

目的了解ICU铜绿假单胞菌(Pa)感染的分子流行病学特征。方法对ICU临床分离的14株Pa菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型及耐药性检测。结果14株Pa分6个PFGE型别,分别命名为A、B、C、D、E和F型,其中A型为优势流行菌株共8株(57.1%),B型2株(14.3%),其余型别各有1株(分别占7.1%)。Pa对头孢他啶等15种抗菌药物产生不同程度的耐药性,其中8株A型Pa为泛耐药菌株。结论PFGE分型A型Pa菌株具有同源性,是本次ICU发生Pa医院感染的流行株,PFGE分型技术可以准确和快速地用于Pa引起医院感染溯源分型。

脉冲场凝胶电泳在肠炎沙门菌食源性疾病溯源中的应用

目的对2006年广州地区食源性疾病中分离的肠炎沙门菌进行分子分型,探讨广州地区肠炎沙门菌的分子型别和多态性,为食源性疾病溯源及致病菌数据库的建立提供依据。方法采用限制性内切酶XbaI,对2006年分离到的菌株进行PFGE分子分型,使用BioNumericsVersion4.0软件(使用Dice系数和UPGMA法)对菌株进行聚类分析,并与深圳市的肠炎沙门菌PFGE型别进行比较。结果所有74株肠炎沙门菌均得到一致的PFGE克隆型,表明两次不同的食源性疾病均由同一PFGE型引起。广州与深圳的肠炎沙门菌PFGE图谱的比较表明,两地食源性疾病分离株具有很近的亲缘关系。结论PFGE分子分型与流行病学资料紧密结合可增强对肠炎沙门菌食源性疾病的溯源和预警。

非可培养状态霍乱弧菌的间接免疫荧光检测

目的建立检测水中活的非可培养状态霍乱弧菌(O1群、O139群)的间接免疫荧光法。方法用本实验室人工转化的非可培养状态霍乱弧菌的菌液制成抗原片,用混合诊断血清(抗O1群、O139群)作为一抗,异硫氰酸荧光素(FITC)标记猪抗兔IgG作为二抗,进行间接免疫荧光检测。结果该方法可以成功检测出水中非可培养状态霍乱弧菌,其检测下限约为104cells/400 ml。结论该方法具有较好的特异性和灵敏度,可作为自然水体中非可培养状态霍乱弧菌的检测方法,用于霍乱弧菌的生态研究。

O139群霍乱弧菌分子流行病学研究

目的分析2001-2006年广州地区霍乱暴发、散发事件及外环境监测中分离的O139群霍乱弧菌的致病相关基因型和PFGE型,追踪菌株的来源和变迁,探讨本地区O139群霍乱流行特点。方法采用多重PCR方法检测O139群菌株的4种致病相关基因,应用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)对菌株进行分子分型,采用软件Bio Numerics Version4.0对分型数据进行处理和分析。结果广州地区O139群菌株中存在2种致病相关基因型,即A型和C型,18株感染者相关菌株中,除1株外,均为致病相关基因A型;10株珠江水分离株均为致病相关基因C型。28株O139群霍乱弧菌分为20个不同的PFGE型,归为4个聚类群(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ群)。珠江水中O139群菌株存在PFGE克隆型的多样性。O139群暴发中分离的菌株PFGE型相同或相近,O139群散发疫情中的病例分离株与部分暴发株也具有相同或相近的PFGE型。结论分子分型方法结合流行病学资料,可分析O139群霍乱菌株的流行特点,致病相关基因分型可代替噬菌体-生物分型来判断和区分O139群霍乱弧菌的流行株与非流行株,从而为霍乱的预防、控制和预警提供科学依据。

副溶血性弧菌流行群特异多重PCR鉴定

目的建立适于基层单位应用的针对副溶血性弧菌流行群的特异多重PCR方法。方法查找副溶血性弧菌的基因序列,将当前流行群的序列和以往副溶血性弧菌的序列进行比较,设计针对流行群的PCR引物,并进行多重PCR扩增。结果运用群特异多重PCR法可特异性的扩增出当前流行群副溶血性弧菌的目的基因片段,可大大缩短鉴定时间。结论群特异多重PCR法能快速鉴定当前副溶血性弧菌流行群,有利于流行病学溯源等。

2005年广州市市区食品污染状况调查分析

目的了解广州市市区食品污染现状[1]。方法选择市内有代表性的5个区,共监测25个单位。随机采集了16类180种食品进行了有机磷农药、重金属、食品添加剂、食源性致病菌等30个项目的检测[2]。结果合格食品159个,合格率88.3%,其中1个饮料、3个凉果甜蜜素超标1.2~2.4倍,1个碳酸饮料安赛蜜超标1.5倍,1个面粉铅超标3.4倍,1个水产品镉超标1.4倍,1个肉制品检出人工合成色素,生肉检出7株沙门氏菌检出,1株单增李斯特氏菌,水产品检出5株副溶血性弧菌,均未检出致病性大肠杆菌,食源性致病菌阳性率为17.1%。结论生肉、水产品食源性致病菌污染较普遍;粮食、水产品重金属污染;添加剂超量和超范围使用,色素和甜味剂尤为突出,今后应重点加强监督管理。