骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血区血管新生及神经前体细胞增殖的影响

目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSC)移植促进大鼠脑缺血后神经功能恢复的可能机制。方法:用线栓法复制大鼠脑缺血再灌注动物模型,分缺血对照组和移植治疗组(经颈动脉移植体外培养异体MSC)。采用免疫组织化学染色及原位杂交技术观察缺血区脑组织的新生血管、细胞增殖及巢蛋白表达的变化。结果:(1)移植组比对照组缺血区皮层微血管密度(MVD)明显增高,血管内皮生长因子(VEGF)mRNA阳性信号明显增强。(2)缺血区顶叶皮层、尾壳核、室管膜、室管膜下区均可见大量Nestin阳性细胞及BrdU阳性细胞,各时间段移植组两种阳性细胞数均比对照组显著增多。结论:MSC可能通过改善缺血区血运及促进缺血区神经前体细胞再生达到修复缺血区损伤组织,从而改善脑缺血大鼠神经功能。

自体骨髓间充质干细胞移植治疗中枢神经系统损伤性疾病(附五例报告)

目的：探讨自体骨髓间充质干细胞移植治疗中枢神经系统损伤后神经功能障碍的有效性和安全性。方法：2004年10月-2005年5月,应用自体骨髓间充质干细胞移植治疗5例中枢神经系统损伤后神经功能障碍患者（脑卒中患者3例,脑外伤术后患者2例）。手术首先抽取自体骨髓细胞悬液,在体外经过分离培养后,制成骨髓间充质干细胞悬液,通过静脉输注方式移植脑内。结果：移植治疗后所有患者均未见不良反应。出院半年后随访,最长随访时间达2年。5例患者神经功能缺损症状较移植前均有很大程度的改善,其中2例神志不清患者神志恢复,可按吩咐动作;4例患者肌力提高1-3个级别;失语症状均得到一定改善。结论：自体骨髓间充质干细胞移植治疗中枢神经系统损伤后神经功能缺损疾病是一种简单、安全、有效的方法,值得进一步开展临床观察和验证。

大鼠骨髓源性血管内皮祖细胞的体外培养与鉴定

目的：目前内皮祖细胞主要从骨髓、脐带血和外周血获取,但其分离培养方法尚不成熟,外周血来源因损伤小、易获取而被普遍使用,但得到的内皮祖细胞纯度较低。实验拟探讨大鼠骨髓来源内皮祖细胞体外培养、诱导扩增和生物学特性鉴定方法。方法：实验于2006-08/2007-08在南昌大学第一附属医院泌外研究所完成。①实验材料：2周龄SD大鼠由南昌大学医学院动科部提供,雌雄不拘,清洁级,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：应用梯度离心法采集大鼠骨髓单个核细胞,贴壁筛选法分离内皮祖细胞,置于添加了血管内皮细胞生长因子、人碱性成纤维细胞生长因子、白血病抑制因子、表皮生长因子的M199培养液中扩增培养,对培养2周的细胞采用免疫荧光染色鉴定细胞标志物血管性血友病因子、血管内皮生长因子受体-2、CD34、CD133,采用RT-PCR法检测内皮细胞特异性分子标志血管性血友病因子、FLK-1、Tie-2、CD34、CD133、eNOS基因表达。结果：①培养4d,光电显微镜下可见细胞集落形成,梭形贴壁细胞从集落中央以放射状向外周生长。培养7-10d,细胞集落相互连接,呈典型的＂鹅卵石＂样外观。2周左右可见细胞排列成条索状结构并可呈“微血管样”排列生长。②贴壁细胞免疫荧光染色鉴定细胞标志物血管性血友病因子、FLK-1、CD34、CD133阳性,RT-PCR法检测内皮细胞特异性分子标志血管性血友病因子、FLK-1、Tie-2、CD34、CD133、eNOS基因阳性表达。结论：采用梯度离心法从骨髓中分离单个核细胞,经诱导培养可实现内皮祖细胞的分离培养和体外扩增。

脑缺血预处理后Caspase-8蛋白的表达与神经元的保护作用

目的:探讨脑缺血预处理后凋亡相关基因Caspase-8蛋白表达与神经元保护作用的关系。方法:雄性Wistar大鼠70只,随机分为对照组(10只)、预处理组(10只)、缺血预处理组(25只)和缺血组(25只)。四血管阻断法复制全脑缺血模型,尼氏和TUNEL染色法观察脑皮质及海马CA1区神经元数和凋亡细胞数,免疫组化方法检测Caspase-8蛋白在缺血预处理后表达变化情况。结果:①缺血7d时,缺血预处理组皮质及海马CA1区神经元数无显著变化犤(268±8.5)个/视野犦,缺血组神经元数则显著减少犤(135.0±5.6)个/视野犦。②缺血预处理组Caspase-8蛋白缺血12h表达升高犤(125.6±9.0)个/视野犦,24h达高峰犤(167.0±8.1)个/视野犦;缺血组caspase-8蛋白缺血6h表达升高犤(154.2±18.4)个/视野犦,12h达高峰犤(222.8±17.1)个/视野犦;各对应时点缺血组Caspase-8蛋白阳性表达细胞较缺血预处理组明显增多。③缺血预处理组和缺血组均在缺血12h皮质及海马CA1区凋亡细胞数开始增多犤(15.5±2.1),(39.8±3.9)个/视野犦,缺血48h凋亡细胞数达高峰犤(68.3±13.6),(328.4±24.0)个/视野犦,但缺血组凋亡细胞数较缺血预处理组显著增多。结论:全脑缺血可能通过诱导Caspase-8蛋白的表达增多,启动细胞凋亡,导致缺血后神经元凋亡的发生。

人骨髓间充质干细胞的体外培养及向神经细胞的分化研究

目的探讨人骨髓间充质干细胞(hMSC)的体外培养生长特性及向神经细胞分化的诱导条件。方法采用密度梯度离心方法分离hMSC,体外扩增生长传代培养,倒置于显微镜下观察其生长特性。采用阿魏酸钠对传至3～6代的hMSC进行诱导培养,并以β-巯基乙醇作为对照,观察诱导培养不同时间后细胞的形态变化,应用免疫细胞化学方法鉴定诱导培养后细胞表面神经细胞特异性标志物神经丝蛋白(NF)及神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达。结果hMSC在体外培养条件下,能保持旺盛的增殖能力,阿魏酸钠诱导培养后6 h即可见细胞形态发生明显变化,24h后表现为典型的神经细胞样形态,NF和NSE呈阳性表达。结论hMSC在体外具有自我更新能力及多分化潜能;阿魏酸钠具有诱导体外培养的hMSC向神经细胞分化的作用。

长球囊血管扩张成形术治疗糖尿病足的临床比较研究

目的比较长球囊血管扩张成形术(PTA)与内科综合疗法治疗糖尿病足的疗效。方法选择我院糖尿病足住院患者68例,患肢105例,分为55例对照组和50例研究组,对照组患者进行内科常规降血糖、消炎、抗凝、活血化瘀及营养神经药物等综合治疗,研究组在内科综合治疗基础上联合长球囊PTA及支架置入介入治疗,观察介入治疗手术成功率及比较两组患者在治疗前与治疗后的临床症状改善情况。结果研究组50条患肢128条靶血管,靶血管治疗总有效率占85%(109/128),治疗前血管造影靶血管狭窄率为(89±8.2)%,治疗后造影靶血管狭窄率为(25±4.5)%,治疗后靶血管狭窄率明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。PTA术后近期治疗临床疗效总有效率84%(42/50),且以显效为主,占54%(27/50),对照组糖尿病足治疗的总有效率为67%,差异具有统计学意义(P<0.05)。随访12个月,研究组中1例患者足部截肢,对照组中2例小腿截肢,1例足部截肢。结论长球囊PTA联合支架置入术能安全、有效地重建患者下肢血运,改善糖尿病足临床症状,且并发症少,在临床上值得广泛推广应用。

阿魏酸钠对缺血预处理后大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用(英文)

背景:缺血性脑损伤后,如何减少神经细胞的死亡促进神经功能的恢复?脑缺血预处理在一定程度上可减轻再次缺血导致的缺血性脑损伤。阿魏酸钠亦被证实能减少脑缺血后的神经元凋亡的发生。而阿魏酸钠是否能增强脑缺血预处理的神经保护作用?目的:探讨阿魏酸钠联合缺血预处理对脑缺血再灌注损伤的保护作用。设计:随机对照动物实验。单位:江西医学院第二附属医院神经外科,江西医学院生理教研室,江西医学院泌尿外科研究所。材料:实验于2001-05/2002-04在江西医学院第二附属医院神经外科实验室完成。雄性Wistar大鼠85只,体质量250～300g。方法:大鼠随机分为四组:①非缺血对照组(10只):仅结扎双侧椎动脉而不夹闭双侧颈总动脉。②缺血对照组(25只):结扎双侧椎动脉48h,夹闭颈总动脉10min。③缺血预处理组(25只):结扎双侧椎动脉48h,夹闭颈总动脉2min后24h再次夹闭颈总动脉10min。④阿魏酸钠联合缺血预处理组(25只):缺血预处理后,再次夹闭颈总动脉前30min,尾静脉注射阿魏酸钠(200mg/kg)。非缺血对照组分为再灌注后2,7d二个亚组(各5只);缺血对照组、缺血预处理组及阿魏酸钠联合缺血预处理组又分为再灌注后6,12,24h,2,7d五个亚组(各5只)。各组在相应时点将大鼠断头取脑,于视交叉后2.2mm切取冠状脑片,观察阿魏酸钠联合缺血预处理在脑缺血再灌注时对皮层和海马CA1区神经元数及凋亡细胞数的影响。主要观察指标:皮层和海马CA1区神经元数及凋亡细胞数。结果:实验大鼠85只均进入结果分析。①大脑皮层及海马CA1神经元计数:缺血7d时,缺血预处理组和阿魏酸钠+缺血预处理组高于缺血对照组(268±8.5,244±12.5,135±5.6,P<0.01)。②大脑皮层及海马CA1区TUNEL阳性细胞计数:阿魏酸钠+缺血预处理组低于缺血预处理组和缺血对照组(12h:1.2±0.8,15.5±2.1,39.8±3.9;24h:1.8±1.6,39.3±11.8,191.3±19.1;2d:2.8±1.2,68.3±13.6,328.4±24.0,P<0.01);缺血预处理组低于缺血对照组(P<0.01)。结论:缺血预处理可减少缺血区神经元凋亡细胞数,阿魏酸钠联合缺血预处理可以进一步加强此效应,对脑缺血再灌注损伤起保护作用。

自体骨髓细胞移植对大鼠局灶性脑缺血区新生血管形成的作用(英文)

背景:骨髓细胞移植是一种简单而有效的促进新生血管生长的治疗手段。同样新生血管的形成和血液循环的再建立,对于脑缺血区域受损而未死亡神经元的修复以及为植入的组织与细胞的成活和分化提供必要的环境条件均具有重要意义。而自体骨髓细胞移植是否会促进脑缺血区新生血管的形成进行血运重建目前尚不清楚。目的:探讨经颈动脉移植自体骨髓细胞对脑缺血区新生血管形成的影响。设计:以实验动物为研究对象,随机对照的验证性研究。单位:一所大学医院的神经外科和泌尿外科研究所。材料:实验于2002-09/2003-04在江西医学院第二附属医院神经外科实验室,江西医学院泌尿外科研究所完成。选择雄性SD大鼠10只,体质量250～300g,清洁级。干预:复制局灶性脑缺血大鼠模型,经颈动脉注入自体骨髓细胞。动物随机分为实验组5只,经颈动脉注入自体骨髓细胞,对照组5只注入生理盐水。通过免疫组织化学染色方法进行微血管计数,观察脑缺血区血管增生状况。主要观察指标:微血管密度。F8因子免疫组化染色。结果:自体骨髓细胞移植后大鼠在皮质缺血区的微血管密度为(159.15±40.4)血管数/mm2,明显较对照组大鼠(81.70±32.18)血管数/mm2多,差异有显著性意义(P<0.05)。骨髓细胞移植组皮质缺血区可见很多散在的单个内皮细胞。

骨髓基质细胞促进人胚神经干细胞向神经元的分化

目的:探讨骨髓基质细胞(BMSCs)对人胚神经干细胞(NSCs)分化的影响。方法:采用机械法分离人胚NSCs,成球法进行传代培养,采用免疫荧光染色检测神经上皮干细胞蛋白(Nestin)的表达鉴定NSCs。按培养方式不同,分为NSCs自然分化组、BMSCs和NSCs直接接触共培养组及Transwell共培养组,采用免疫细胞荧光法及免疫印迹法检测各组神经元和星形胶质细胞标志物的表达。结果:在直接接触共培养组和transwell共培养组中,免疫荧光染色显示神经元标志物NSE阳性细胞率明显高于自然分化组,而星形胶质细胞标志物GFAP阳性细胞率低于自然分化组。免疫印迹检测显示Transwell共培养组中NSE表达量显著高于自然分化组,而GFAP表达量低于自然分化组。结论:BMSCs具有促进NSCs向神经元分化的作用。

关于我国助老服务“时间银行”建设的思考

在综合国内外助老服务"时间银行"发展和现状的基础上,指出建设助老服务"时间银行"有助于建立社会化的养老体系,进一步推动我国的养老服务社会化进程。"时间银行"模式,适应我国低成本战略应对人口老龄化的要求,也是探索多层次养老服务体系、强化社区养老服务的要求,同时有利于推动我国精神文明建设的要。为此,助老服务"时间银行"的建设和发展需要依靠国家主导制定相关政策,自上而下全面开展,最终实现全国的系统构建和信息互通互联。

大胚龄人神经干细胞长期冻存后的复苏培养

目的探讨长期冻存后的大胚龄人胚神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的生长及其生物学特性。方法分别于冻存后6、12及24个月,快速解冻复苏胚龄为16～20周的胎脑细胞,采用无血清培养液悬浮培养,观察培养细胞的活性及成球时间,采用免疫细胞化学方法鉴定这些细胞球及其分化成熟后的细胞表面标志。结果培养传代的细胞透亮﹑成球时间短,与取自新鲜胎脑的神经干细胞无明显区别。细胞球Nestin染色阳性,成熟分化后神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及2',3'-环腺苷酸-3'-磷酸二酯酶(CNPase)抗原呈阳性。结论长期冻存后的人大胚龄神经干细胞仍具有较强增殖能力及多分化潜能。

脑内窥镜辅助下单鼻孔入路经蝶窦切除垂体腺瘤手术体会

目的探讨内窥镜辅助下经蝶窦单鼻孔入路垂体腺瘤切除手术的可行性、优缺点、手术适应证和临床应用价值。方法采用MRI明确诊断,运用直径4mm的0°、30°内窥镜监视下经单鼻孔蝶窦入路对38例垂体腺瘤进行手术切除。结果29例垂体腺瘤得到完全切除,6例近全切除,3例部分切除。26例术前视力损害的患者中,25例术后均有不同程度的恢复,1例无改变。术后1例出现永久性尿崩伴垂体功能低下者需药物治疗。术后未见脑脊液鼻漏、颅内感染等并发症发生。结论内窥镜辅助下经蝶窦单鼻孔入路垂体腺瘤切除手术是一个简便、安全、微创的新技术,只要正确掌握手术适应证,就可以获得满意的治疗效果。

农村土地流转中政府制度供给探讨

土地流转问题,不仅是土地问题,也是"三农"问题,是落实科学发展观的重要课题之一。尽快依法规范土地流转己经是来自现实的一项紧迫要求,但政府作为制度创新主体负有不可推卸的责任,必须对农村土地流转加以引导和管理。

推进政府知识管理 建设服务型政府

政府知识管理在政府单位中的实践是构建服务型政府的重要途径。它带来的创新包括:新的价值取向、新的合作分享机制、新的领导方式以及新的精神激励。通过政府知识管理的创新,再造新型政府,实现服务型政府的构造。在当前推进政府知识管理的操作实践中,仍存在根本目的不明、缺乏发展规划和灵活机制、官僚主义文化惯性运作等问题。推进政府知识管理,需要科学合理的措施和方法,主要包括进行系统构建、组织再造和环境培育。

官员问责制度化的路径选择

中共中央《关于实行党政领导干部问责的暂行规定》,走出了构建官员问责制重要的第一步,符合塑造现代政治文明的要求,也是构建和谐社会的应有之举。但官员问责制度化的实施还面临许多问题和难点,需要认真研究,包括问责常态化、异体多元问责机制的构建、问责官员复出、政治责任与法律责任、道德责任的区分等问题。

《行政管理学》课程教学持续改进设想

《行政管理学》课程教学改革,必须迎接网络社会、知识经济的时代挑战,必须利用和渗透网络技术,深化网络行政管理内容。为此,需要系统优化《行政管理学》课程教学改革的指导思想,多元整合《行政管理学》课程教学方法,才能顺应培养目标的转变、教学改革的全面深化要求。

日本“行政相谈”和“苦情”制度及其启示

日本"行政相谈"和"苦情"制度是综合性很强的行政监督救济制度,在日本很有影响,本文仔细分析了这一制度,他山之石,可以攻玉,从中得出一些启发,完善我国的行政监督和救济机制。

自体骨髓细胞移植对大鼠局灶性脑缺血区新生血管形成的作用初探

目的 探讨经颈动脉移植自体骨髓细胞对脑缺血区新生血管形成的影响。方法 复制局灶性脑缺血大鼠模型 ,实验组 (5只 )经颈动脉注入自体骨髓细胞 ,对照组 (5只 )注入生理盐水。通过免疫组织化学染色方法进行微血管计数 ,观察脑缺血区血管增生状况。结果 自体骨髓细胞移植后大鼠在皮层缺血区的微血管密度为 15 9.15±4 0 .4血管数 /mm2 ,较对照组大鼠 (81.70± 32 .18血管数 /mm2 )明显增多 ,P <0 .0 5。结论 经颈动脉注入的自体骨髓细胞能够促进脑缺血区新生血管的形成。

互依结构中的枢纽型社会组织——以浙江省“Y中心”为例

枢纽型社会组织作为在政府与社会组织间起桥梁纽带作用的特殊主体,在实践中逐步发展出适合自身的功能定位和行动方式。在此过程中,体现了国家与社会关系变化的新情况。本文以浙江省H市枢纽型社会组织"Y中心"为个案,分析其创建和发展历程,以及如何获取治理结构中的"枢纽"性位置,并与政府、社会组织等其他主体共同构建"互依"式治理结构。Y中心建设"枢纽"位置的方式是围绕社会组织培育、第三方评估、标准化服务、社区社会工作服务等核心业务的运作,建构起以自身为纽带的基层社会治理共同体。伴随着政府、Y中心、社会组织以及其他主体共同参与治理过程,"结构互依"式的新型政府与社会互动治理关系逐步形成。在此结构中,枢纽型社会组织在产生组织增能、治理提升与平台建设效果的同时,也面临着行政化、功能受限与创新难的现实困境。

制度重构:改变地方政府在房地产市场中的行为模式

房价持续快速上涨的原因是多方面的,但是地方政府的行为值得认真分析,地方政府表现出的行为和制度欠缺关系很大。解决这一问题,改革很重要。包括正确处理政府与市场的关系、改革现有地方政府收益体制、改进和完善政绩考核体系等等。