协和继续医学教育助力国家乡村振兴健康战略

党的十九届五中全会明确“全面推进健康中国建设”的战略部署,要把人民健康放在优先发展的战略地位。乡村振兴战略的实施是推动新时代高质量发展的重大部署,决定着我国全面建成小康社会的成色和社会主义现代化的质量。百年协和发挥行业引领作用,协和继续教育学院的“顶天立地”项目,“顶天”计划包括以北京协和医学院创新领军学者临床新技术新进展培训项目在内的,偏向公益性质的继续医学教育项目;“立地”计划包括在西藏、新疆维吾尔自治区、青海省、贵州省、福建省等“老、少、边”地区开展基层医务工作者的培训项目。要用协和的优质继续教育资源为国家的乡村振兴战略做出贡献。为乡村振兴承担对口帮扶任务,为国家培养高素质的医疗卫生人才,努力把协和创新领军学者办成在全国具有影响力、标志性的公益培训品牌。更好地为我国的乡村振兴战略服务。

蓝氏贾第鞭毛虫检测技术研究进展

蓝氏贾第鞭毛虫是一种分布广、危害严重的水源性人兽共患的寄生虫原虫,可致人和动物严重腹泻。由于其种类繁多,易传染,传播快,对公共卫生安全造成严重威胁。传统的贾第鞭毛虫检测方法主要为粪便样本的显微镜检查。随着免疫学和现代分子生物学的不断发展,很多分子生物学检测技术不断涌现,并成功应用到对贾第鞭毛虫的快速检测。论文就近年来贾第鞭毛虫的检测技术进展情况进行综述。

鸡新城疫病毒F基因高效真核表达质粒的构建

为进一步研究基因疫苗的免疫机制和基因疫苗的免疫效果 ,应用 DNA重组技术 ,根据载体 pc D-NA4 .0 / His Max的多克隆位点设计引物 ,对含有 NDV保护性抗原基因 F的质粒 PCR扩增。将得到的目的片段插入到载体的启动子下游 ,成功得到含有 NDV F基因的真核表达质粒载体 PC4 F的基因疫苗。

隐孢子虫检测技术研究进展

隐孢子虫是一种危害严重的人兽共感染寄生虫原虫,可致人和动物严重腹泻。由于其种类繁多,传播速度快,对公共卫生安全造成严重威胁。传统的隐孢子虫检测方法主要包括粪便样本的显微镜检查、水样的EPA1623检查,随着免疫学和现代分子生物学的不断发展,很多先进的检测技术如酶联免疫检测技术,免疫荧光技术,PCR,反转录PCR,实时荧光定量PCR,环介导等温扩增技术等不断涌现和应用于临床实践。论文就近年来隐孢子虫的危害及其检测技术最新进展情况进行综述。

以金磁微球为载体的H5N1 AIV免疫PCR检测方法的建立

【目的】将高特异性的抗原-抗体反应与高灵敏性的PCR扩增技术相结合,建立快速检测低浓度H5N1禽流感病毒(Avianinfluenzavirus,AIV)的免疫PCR方法。【方法】以pUC19为模板,采用5′端标记有生物素的引物进行PCR扩增,制备含有生物素的报告DNA分子。以金磁微球为固相吸附载体,通过亲和素-生物素的桥联作用,将含有生物素的报告DNA分子与生物素标记的抗AIVH5N1血凝素蛋白的检测抗体分子连接,H5N1AIV与检测抗体结合后,体外扩增报告DNA,间接放大低含量病毒信号,建立可有效检测微量H5N1AIV的免疫PCR方法。对建立的免疫PCR方法的最适报告DNA浓度、最适链亲和素工作浓度、灵敏度和特异性进行确定和评价。【结果】建立的免疫PCR方法最适报告DNA质量浓度为1ng/mL,最适链亲和素工作质量浓度为20ng/mL,该方法可成功检测到10-4EID50/mL的H5N1AIV,而且特异性良好。【结论】建立的以金磁微球为吸附载体的免疫PCR是一种灵敏度高、特异性好的检测微量H5N1AIV的方法。

免疫PCR检测微量H5亚型禽流感病毒

为了有效检测低浓度禽流感病毒,笔者通过将高特异性的抗原-抗体反应与高灵敏性的PCR扩增技术相结合,建立了一种快速检测痕量H5亚型禽流感病毒的间接免疫PCR方法和间接"三明治"抗体夹心免疫PCR方法。以TopYield 96孔板为固相免疫吸附载体,以禽流感病毒H5蛋白为检测对象,通过一系列免疫反应及亲和素-生物素桥联作用,将生物素标记的报告DNA分子和生物素标记的禽流感病毒H5亚型抗体分子连接。充分洗涤后,在TopYield板孔中添加PCR反应液,对板壁偶联的报告DNA进行PCR扩增,间接达到检测微量禽流感病毒H5蛋白的目标。通过优化报告DNA分子和链亲和素的浓度,2种免疫PCR技术都可检测到约1fg的禽流感病毒H5蛋白,与常规ELISA方法相比,灵敏性提高了近1 000倍。

食源性寄生虫的风险评估

风险(risk)是由一种或多种危害因子而引发危害事件的一种可能性或概率。危害因子可能属于物理的、化学的、微生物的范畴,病原微生物中的细菌、病毒、寄生虫等都可成为引发危害事件的风险因子。评估某一因子是否对人或其他生物构成威胁以及所危害的程度显得至关重要。事实上,存在于环境中的危险因子及其多种可能的传播途径都会引发多种危害性事件。因此,要想充分了解并揭示由危害因子引发危害的概率,以及其随后对人类健康造成的危害并非易事。风险评估则是对不良结果或不期望事件发生几率进行描述及定量的系统过程,现已被视为一种用于揭示存在于环境中的各种危害及其对人类健康造成的影响的方法。论文主要对食源性寄生虫风险评估的方法进行全面阐述。

DNA疫苗的黏膜免疫

DNA做为一种新型的疫苗在免疫人和动物后可以引起强烈的体液免疫和细胞免疫.目前大多数DNA疫苗都是通过肌肉注射和基因枪肠道外途径免疫.然而通过黏膜途径免疫机体也可以得到有效的保护.现主要就DNA疫苗的黏膜免疫进展作一综述.

禽流感病毒HA基因真核表达质粒的构建与表达

血凝素蛋白 (HA)基因是禽流感病毒 (AIV)重要的保护性抗原基因 .为了研究HA基因疫苗 ,用PCR扩增H5亚型AIVHA基因 ,将其克隆到质粒 pcDNA4/HisMax和pRc/CMV上得到真核表达质粒 pC4H5和pCMVH5 .采用TfxTM 2 0、Superfect转染试剂和电转染法转染HeLa细胞 ,转染后的HeLa细胞经蛋白质印迹和血凝试验检测HA蛋白及其活性 .结果表明 ,Superfect转染和电转染均能正确表达HA蛋白并具有生物学活性 ,蛋白质印迹检测到HA和HA裂解的HA1和HA2 ,与AIV的HA、HA1、HA2蛋白的分子质量一致 .从血凝试验结果看 ,Superfect和电转染表达的HA均具有血凝活性 ,而经Superfect转染的 pC4H5的表达量是pCMVH5的8倍 ,表明

新城疫病毒分离株的蚀斑纯化及影响蚀斑形成的主要因素

从西北地区 1979～ 1999年发生新城疫的鸡群中分离和收集的 15株新城疫病毒 ( NDV) ,经蚀斑纯化 ,共得到 11个克隆毒株 ;对其进行了蚀斑形成能力的测定 ,证明蚀斑形成能力与毒力成正比 ;探讨了温度对蚀斑形成能力的影响 ,证明 NDV蚀斑形成能力在 4 1℃比 37℃强 ,表现为蚀斑出现早、蚀斑大、蚀斑形成单位 ( PFU)高 ,同时在 4 1℃时细胞生长状况良好 ,不易污染 ,故认为在 4 1℃进行 NDV的蚀斑纯化值得推荐。

马媾疫锥虫SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立

为建立一种特异、快速的媾疫锥虫检测方法,本研究通过PCR方法从马媾疫锥虫动基体基因组中扩增得到395 bp的特异的保守序列,将其克隆到pMD-18T载体中构建重组质粒标准品,以10倍倍比稀释的质粒标准品为模板,进行SYBR GreenⅠ荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立马媾疫锥虫荧光定量PCR的检测方法。结果表明:该方法的检测灵敏度可达到1拷贝/μL,并且与马属动物其他传染病无交叉反应。其组间及组内变异系数分别小于3.183%和3.842%。该方法的建立为快速及特异性检测马媾疫锥虫提供了有效的方法。

新型A型H1N1猪流感疫情动态及防控措施

2009年3月18日由墨西哥发端的人类大流行性甲型(A型)H1N1流感疫情迅速在全球蔓延,并已扩散到中国。新型A型H1N1流感突破种间屏障由人传染给猪、禽,并相继在北美、南美、大洋洲出现疫情。2009年4月21日,新型A型H1N1猪流感疫情首次在北美的加拿大发生;2009年6月24日,在南美的阿根廷发生猪流感疫情;2009年7月24日,远在大洋洲的澳大利亚也出现猪流感疫情;更糟糕的是在2009年7月23日,在南美紧邻阿根廷的智利的禽类(火鸡)首次发生A型流感疫情。此次新型A型H1N1流感疫情呈现大流行病学显著变化:①突破种间屏障由人传染给猪、禽;②突破地理屏障,在三大洲先后暴发规模不等、强度不一的多起疫情。因此,我国卫生主管部门、兽医主管部门和出入境检验检疫部门应高度戒备,密切关注,采取严格的生物安全措施,严防疫情疫病跨越国境,特别是防止新型A型H1N1流感疫情在人群、猪群、禽群之间相互传播,避免疫情在人类和动物进一步扩散。

西尼罗病毒病诊断技术研究进展

西尼罗病毒病(WND)是由西尼罗病毒(WNV)感染引起的一种人兽共患的急性传染病,应用各种诊断技术对该病进行准确、及时的诊断是预防和控制该病的前提。论文就近年来WND诊断技术研究进展情况进行综述,包括病原学诊断、血清学诊断和分子生物学诊断。在病原学诊断方面,主要包括病毒分离鉴定、抗原捕获ELISA及基于膜的电化学生物传感器技术等。在血清学诊断方面,主要包括ELISA方法、补体依赖性细胞毒性反应、基于微球的免疫测定方法及表面增强拉曼散射等。在分子生物学诊断方面,主要包括RT-PCR和RT-nPCR、real-time RT-PCR、实时快速反转录环介导恒温扩增及依赖核酸序列的扩增技术等,并对各种方法的前景和优缺点进行了阐述,为实际应用及新方法的建立提供参考。

番茄溃疡病菌实时荧光PCR快速检测方法研究

根据番茄溃疡病菌ITS(16S^23SrDNA间隔区)基因序列,设计并合成了荧光PCR检测引物(Fan1和Fan2)及特异性检测探针(Fanprobe),对番茄溃疡病菌和非番茄溃疡病菌的标准菌株实时荧光PCR反应。结果表明,番茄溃疡病菌PCR产物出现强烈的特异杂交信号,而非番茄溃疡病菌均未出现特异荧光信号,证明这对引物及探针具有番茄溃疡病菌鉴定特异性。将番茄溃疡病菌DNA做梯度稀释,测定该检测体系的敏感度,结果表明,此体系可检出52.3 fg/μL的模板。

牛新孢子虫病和弓形虫病双重PCR检测方法的建立与应用

为了建立区分检测牛新孢子虫病和弓形虫病的双重PCR方法,本研究以已发表的牛新孢子虫Nc-5基因和弓形虫GRA6基因分别作为目的基因,各设计一对引物,可分别扩增出222bp和124bp的目的条带。经优化反应条件,建立了可同时检测牛新孢子虫病和弓形虫病的双重PCR方法。该方法对上述两种基因的检测灵敏度均为103copies/反应,只比单PCR的灵敏度低10倍,且具有较好的特异性和重复性。经临床应用验证,该方法可用来对新孢子虫病和弓形虫病进行同步快速检测。

实时定量PCR快速检测对虾白斑综合症病毒

根据对虾白斑综合症病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)的保守序列,利用Primer Express2.0软件设计引物和Taqman探针,建立了WSSV的实时定量PCR检测体系。构建含有WSSV目的扩增片段的质粒为标准品,进行定量PCR扩增,结果表明标准品浓度在1.5×10~7～1.5×10~1个拷贝之间有"S"型扩增曲线,检测限为15个拷贝。标准曲线中模板浓度(X)与Ct值的关系为:Ct=-3.77 lgX+43.73,相关系数R^2=0.9967。该检测方法特异性强,对传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)、斑节对虾杆状病毒(MBV)、肝胰腺细小病毒(HPV)以及对虾基因组DNA没有扩增反应。运用该方法对100尾对虾样品进行检测,14个对虾样品为阳性,而运用巢式PCR检测只有4个对虾样品为阳性。实时定量PCR方法检测WSSV,快速、特异、灵敏,在虾病的临床检测上具有重要意义。

利用PCR技术快速检测玉米细菌性枯萎病菌(Pantoea stewartii subsp.stewartii)

根据玉米细菌性枯萎病菌(Pantoea stewartiisubsp.stewartii)ITS基因序列,设计并合成了特异性PCR检测引物,对玉米细菌性枯萎病菌和非玉米细菌性枯萎病菌的标准菌株进行了PCR扩增反应.结果显示,玉米细菌性枯萎病菌的PCR产物出现301 bp的特异性扩增条带,而非玉米细菌性枯萎病菌均未出现扩增条带;其PCR检测的灵敏度为612 pg/μL.因此PCR技术是一种特异、灵敏、快速检测玉米细菌性枯萎病菌的方法.

2010年国际马病疫情动态

2010年在世界各国发生了数十起马病疫情,其规模不等、强度不一。如西尼罗热(马达加斯加、希腊、意大利、西班牙、保加利亚、葡萄牙、摩洛哥、伯利兹、罗马尼亚)、马鼻疽(巴林、巴西)、马接触传染性子宫炎(葡萄牙、美国、英国)、流行性出血热(法国瓜德罗普岛)、马病毒性动脉炎(乌拉圭、阿根廷、英国)、非洲马瘟(加纳)、马鼻肺炎(阿联酋)、马传染性贫血(比利时、法国、德国、英国、希腊)、水泡性口炎(美国)、马梨形虫病(美国)、委内瑞拉马脑脊髓炎(巴拿马、伯利兹)、东部马脑脊髓炎(巴拿马)、炭疽(哈萨克、乌干达)。西尼罗病毒病多次在欧洲国家出现,马脑脊髓炎多次出现在拉丁美洲国家,马接触传染性子宫炎在赛马业高度发达的美国、英国似乎变成了地方性流行病,这些动物疫病在流行病学上出现了新变化,应引起我国兽医部门和出入境检验检疫部门的高度重视,严防疫情疫病传入传出,特别是防止新发疫病(马脑病、西尼罗病毒病)传入国境,保障我国畜牧业的健康发展。

2008年北京奥运会马术比赛(香港)及其检验检疫措施

2008年北京夏季奥运会马术比赛将于2008年8月9日-20日在香港举行。金牌本届的马术赛事共设三项颁发六枚金牌:障碍赛(个人、团体)、盛装舞步赛(个人、团体)、三日赛(个人、团体),届时将有200对骑手和马匹组合参赛。奥运会马术比赛原定在北京乡村赛马场举行,但北京现有条件很难符合奥运会马术比赛的要求,国际奥委会、北京奥组委和国际马联协商后决定将马术比赛改在香港举行。中国运动员首次在盛装舞步、三项赛和场地障碍赛全部三个小项上都获得了参赛席位。参赛马匹隔离时间将由上届的"14+14天"缩减至"7+10天",即在马匹原居地隔离7天,到港后再隔离10天后才允许参赛。

O型口蹄疫病毒核酸检测标准样品的制备

利用基因克隆和体外转录技术制备O型口蹄疫病毒（FMDV）核酸检测标准样品.设计O型FMDV 3D基因的全长开放阅读框的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至PGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品,初步定量稀释后,混合分装作为核酸标准样品候选物.采用实时荧光定量RT-PCR方法进行均匀性和稳定性检验,并委托外部实验室采用外标实时定量RT-PCR方法对转录的RNA片段进行定值.通过绘制荧光定量标准扩增曲线计算标准物质含量（拷贝数）,并根据委托单位的定值结果进行不确定度的估算.均一性结果显示瓶间差异小于5％,稳定试验表明室温20℃～25℃（相对湿度20％～50％）14 d,2℃～8℃3个月及-20℃保存1年的含量均无明显变化.核酸标准物质定值为（1.260士0.485）×108 copies,可用作O型FMDV通用核酸检测的标准质控品.