金钗石斛转基因体系的建立

以金钗石斛种子为外植体建立组织培养体系,在含1.5mg/L6-BAMS培养基中添加0.5mg/LNAA和2%蔗糖能有效地诱导原球茎,诱导率达91.67%;添加0.25mg/LNAA和3%蔗糖则更适于原球茎分化形成不定芽;添加0.10mg/LNAA和2%蔗糖适宜于不定根的诱导.同时建立了根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)转化金钗石斛的方法和体系:使用根癌农杆菌EHA105侵染30min,共培养3d时,金钗石斛的根段、根尖和组培幼苗的转化率最高,而含腋芽的茎节则需要共培养5d.文章所建立的组培体系与转基因体系将为探讨金钗石斛的基因功能和调控机制等生物学问题及建立稳定转化的再生植株提供技术手段.

金钗石斛AP1/FUL亚家族基因DnAPL1的克隆和功能分析

金钗石斛(Dendrobium nobile)是药用和观赏两用植物,其花型独特,色彩艳丽,是花卉市场上广受欢迎的春石斛兰品种之一。ABC模型中的A类基因参与花序分化和第一、二轮花器官的决定和发育,然而目前对春石斛兰中该类基因及其调控花发育的功能研究甚少。本研究从金钗石斛中克隆获得了1个与拟南芥A类基因AP1(APETALA1)同源的基因DnAPL1(APETALA1 LIKE 1),并推测其编码1个含247个氨基酸的蛋白。RT-qPCR检测显示该基因在金钗石斛中广泛表达,其中叶片的积累量最高;随着花芽的分化和发育,其表达水平逐渐升高。在野生型拟南芥中过表达DnAPL1可以增强FT表达,促使其提前开花;同时,过表达植株的萼片、花瓣等花器官的数量、形态或着生方式发生变化,幼嫩茎生叶呈现勺状。以拟南芥ap1-1突变体为背景的互补实验表明DnAPL1可以部分补偿该突变体的花型突变表型。本研究结果证实DnAPL1既参与开花时间的调控,也参与叶片、萼片和花瓣的发育。