缺氧在大鼠肝纤维化形成中的作用机制

目的探讨缺氧在大鼠肝纤维化形成中的作用机制。方法建立胆管结扎(bile duct ligation,BDL)大鼠肝纤维化模型,术后1、3、7、14、21、28 d取材,观察肝脏组织学及超微结构的改变;逆转录PCR检测转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Ⅰ型胶原(collagenⅠ,Coll-Ⅰ)mRNA的表达;蛋白免疫印迹检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1 alpha,HIF-1α)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达;缺氧培养原代肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC),逆转录PCR检测HIF-1α、TGF-β1、Coll-I mRNA的表达,蛋白免疫印迹检测α-SMA的表达。缺氧/常氧下,加TGF-β1中和抗体、HIF-1α诱导剂氯化钴(cobalt chloride,CoCl2)或抑制剂2-甲氧雌二醇(2-methoxyestradiol,2 ME2),逆转录PCR检测Coll-I mRNA表达的变化。结果①电镜下显示大鼠肝脏术后出现缺氧的表现;②术后3 d时,HIF-1α的蛋白表达升高,7 d时,TGF-β1、Coll-I mRNA及α-SMA蛋白的表达升高;③缺氧诱导HSC表达HIF-1α、TGF-β1、Coll-I mRNA及α-SMA蛋白表达的升高;④常氧下CoCl2诱导Coll-I mRNA的表达,中和抗体及2 ME2抑制缺氧诱导Coll-I mRNA的表达。结论缺氧激活HSC,增加细胞外基质的沉积,促进大鼠肝纤维化的形成,其机制与TGF-β1和HIF-α的介导信号通路密切相关。

缺氧在肝星状细胞激活中的作用机制

目的:探讨缺氧在肝星状细胞(HSC)激活中的作用机制。方法:缺氧培养大鼠HSC株HSC-T6,逆转录PCR检测HIF-1α、TGF-β1、I型胶原mRNA的表达,Westren blot检测α-SMA表达。缺氧/常氧下,加TGF-β1中和抗体、HIF-1α诱导剂氯化钴(CoCl2)或抑制剂2-甲氧雌二醇(2ME2),逆转录PCR检测HSC-T6表达I型胶原mRNA的变化。结果:缺氧能诱导HSC-T6表达HIF-1α、TGF-β1、I型胶原mRNA及α-SMA蛋白;常氧下CoCl2能诱导HSC-T6表达I型胶原mR-NA,TGF-β1中和抗体及2ME2能减弱缺氧诱导HSC-T6表达I型胶原mRNA,但表达量仍高于常氧培养。结论:缺氧能激活HSC,分泌I型胶原,增加细胞外基质沉积,其作用机制既依赖于TGF-β的胞内信号传导机制,也与HIF-α介导的信号传导有关,在肝纤维化形成中起着举足轻重的作用。

经阴道超声诊断前置胎盘

目的 :体会应用阴道超声诊断前置胎盘及类型判断。方法 :本文应用经阴道超声对 5 0例经腹部超声诊断前置胎盘的患者进一步检查。结果 :经阴道超声检查可清晰显示子宫颈官 ,确定宫内口、外口的位置 ,较易作出前置胎盘的诊断与类型判断 ,提高了前置胎盘诊断的正确率。结论 :经阴道超声诊断前置胎盘方法简便 ,图像清晰、准确 。

热射病大鼠脑组织水通道蛋白4(AQP4)表达下调与大鼠脑组织水肿增加有关

目的探讨热射病模型大鼠脑组织及星形胶质细胞水通道蛋白4(AQP4)的表达特征。方法雄性健康Sprague-Dawley大鼠60只,体质量(250±30)g,按随机数字表法分为对照组与模型组。采用高温高湿安静暴露法(温度设定为40℃,湿度设定为70%)建立经典的热射病大鼠模型,每隔10 min监测大鼠直肠的温度并记录发病时间,以高温应激动物核心温度(直肠)达到42.5℃时的时间作为发病时间。两组大鼠均在出室后置于室温(温度26℃,湿度60%)条件下,观察5 h后进行行为学评分。评分后处死大鼠,取材脑组织,测量脑组织含水量变化。分别在37℃和41℃培养大鼠的星形胶质细胞,用逆转录PCR检测星形胶质细胞AQP4 mRNA水平,Western blot法检测其蛋白水平。结果与对照组相比,模型组大鼠脑组织中AQP4 mRNA和蛋白的表达量显著低于对照组。结论高温可导致实验大鼠血脑屏障破坏、AQP4 mRNA和蛋白表达下调,诱发实验大鼠脑水肿的发生、发展。

醒脑静对大鼠脑出血病灶周围星形胶质细胞表达水通道蛋白-4的影响研究

目的:探讨醒脑静对大鼠脑出血病灶周围星形胶质细胞表达水通道蛋白-4(AQP-4)的影响。方法:建立胶原酶VII定位注射诱发大鼠尾壳核脑出血模型,随机分成醒脑静治疗组和对照组。建模后给予一次药物治疗。醒脑静治疗组大鼠给予腹腔注射醒脑静注射液2ml/kg,对照组大鼠给予腹腔注射等容量生理盐水。治疗72h后对比两组大鼠生存率、行为学改变,处死取材测定脑组织含水量变化,观察脑实质组织学及星形胶质细胞超微结构的改变;逆转录PCR检测AQP-4mRNA的表达;蛋白免疫印迹检测AQP-4蛋白的表达。含血清培养大鼠星形胶质细胞,随机分成5ml/L、10ml/L、20ml/L醒脑静组和对照组,培养基中分别加入5ml/L、10ml/L、20ml/L的醒脑静和等容量的生理盐水,逆转录PCR检测AQP-4mRNA的表达;蛋白免疫印迹检测AQP-4蛋白的表达。结果:醒脑静治疗组大鼠生存率、行为学评分均较对照组明显改善;电镜下显示醒脑静治疗可减轻模型大鼠病灶周围星形胶质细胞水肿,上调脑组织表达AQP-4蛋白与mRNA的表达,细胞实验显示,随着培养基中加入醒脑静浓度增加,星形胶质细胞的AQP-4蛋白与mRNA的表达增加。结论:经醒脑静治疗后的脑出血大鼠无论在生存率还是在肢体对称平衡方面均得到改善,其机制可能是醒脑静可直接刺激星形细胞上调AQP-4蛋白及mRNA的表达,从而缓解脑出血后血管源性脑水肿的进展,这为未来醒脑静用于治疗脑出血后脑水肿治疗提供新的理论支持。

高渗盐水保护血脑屏障减轻脑出血大鼠脑水肿的相关机制研究

目的探讨高渗盐水治疗减轻脑出血模型大鼠脑水肿的相关机制。方法60只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组。在大鼠脑实质注射胎牛血清制作脑出血大鼠模型后,治疗组大鼠经尾静脉泵入10%高渗盐水,0.3 mL/h,共48 h。对比各组大鼠死亡率,取脑组织,肉眼观察其外观与病理学变化;同时,测定各组大鼠的脑含水量、脑组织中基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)与基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(metallopeptidase inhibitor-1,TIMP-1)比例,以及相关紧密连接蛋白claudins、occludin和zonula occludens-1(ZO-1)表达的差异。结果模型组大鼠死亡率和脑组织含水量均明显高于治疗组(均P<0.05)。肉眼观察显示,模型组大鼠脑中线明显从病灶侧移向对侧,治疗组大鼠脑中线未见偏移。显微镜下,治疗组大鼠脑组织水肿明显减轻,炎性细胞渗出明显减少。另外,治疗组大鼠脑组织中MMP-9/TIMP-1比例明显低于模型组,而紧密连接蛋白claudin-5、occludin以及ZO-1均高于模型组(均P<0.05)。结论高渗盐水可通过降低MMP-9/TIMP-1比例,稳定紧密连接蛋白claudin-5、occludin以及ZO-1的表达,维持血脑屏障结构完整性,改善脑出血后脑水肿的严重程度,从而降低实验模型大鼠的死亡率。

大鼠脑实质注射血清所致病理改变及其相关机制的研究

目的探讨大鼠脑实质注射血清所致病理改变及其相关机制。方法在大鼠脑实质注射胎牛血(FBS)建立大鼠脑实质血清注射模型,对照组注射等体积生理盐水。术后48 h对比两组大鼠生存率、行为学改变。取材测量脑组织含水量变化,观察脑实质组织学及超微结构的改变,逆转录PCR检测脑组织水通道蛋白-4(AQP-4) mRNA的表达,蛋白免疫印迹检测AQP-4蛋白的表达。含血清/无血清培养大鼠星形胶质细胞,逆转录PCR检测细胞AQP-4 mRNA的表达,蛋白免疫印迹检测AQP-4蛋白的表达。结果电子显微镜下显示实验组注射部位周围脑组织水肿;实验组注射侧脑组织表达AQP-4蛋白与mRNA均较对照组明显减少(P<0.01),实验组注射部位对侧脑组织表达AQP-4蛋白与mRNA与对照组未见明显差异(P>0.05);相对于无血清培养组,含血清培养组大鼠星形胶质细胞表达AQP-4蛋白及mRNA均明显下降(P<0.05)。结论体外与体内实验共同表明,血清导致脑组织、尤其是星形胶质细胞AQP-4表达下降可能是脑出血(ICH)后继发性脑水肿的重要分子机制,为未来治疗脑出血后脑水肿治疗提供新的治疗靶点。