NF-κB p65、IκBα、IL-1β mRNA在大鼠放射性肺损伤过程中的变化及意义

目的:探讨NF-κB p65、IκBα、白介素(IL)-1βmRNA在大鼠放射性肺损伤过程中的变化及意义。方法:将64只SpragueDawley雄性大鼠随机分成空白组和实验组。空白组不做任何处理,实验组予单次18Gy照射,并于照射后2周、6周、12周、24周末取肺组织,苏木精—伊红(HE)染色、Masson染色观察右肺组织病理形态变化,采用样本碱水解法测定肺组织匀浆羟脯氨酸含量,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清炎症因子IL-1β水平,荧光定量PCR(qPCR)法检测NF-κB p65、IκBα、IL-1βmRNA相对表达量。结果:HE及Masson染色显示:空白组大鼠肺组织肺泡结构完好,无充血、渗出、水肿等,实验组大鼠照射后早期出现充血、水肿、胶原蛋白渗出、炎症细胞浸润、肺泡壁及肺泡间隔逐渐增厚,之后肺组织纤维化加重、肺泡腔变小、消失。实验组照射后6周、12周、24周的羟脯氨酸含量均明显高于空白组(均P<0.05)。实验组大鼠照射后各时间点血清IL-1β水平、NF-κB p65、IL-1βmRNA相对表达量均高于空白组,而IκBαmRNA相对表达量低于空白组(P<0.05)。实验组血清IL-1β水平、NF-κB p65、IL-1βmRNA相对表达量在照射后6周升到最高,之后逐渐回落,而IκBαmRNA相对表达量变化趋势相反。结论:早期放射性肺损伤NF-κB p65、IL-1β的mRNA表达明显上调,IκBα表达下调,抑制NF-κB p65、减轻炎症反应可能减缓放射性肺损伤。

热疗对巨噬细胞M2极化作用及其对肺癌细胞侵袭、迁移影响的体外实验研究

背景热疗是一种安全的辅助治疗方法,通过抑制肿瘤细胞DNA修复、促进其凋亡、提高机体免疫等作用阻碍其发生、发展。但是,对于热疗是否可以通过干预巨噬细胞间接影响肿瘤细胞的研究并不多。目的通过体外模拟热疗产生的温热作用,探讨在热疗条件下M2型肿瘤相关巨噬细胞对肺癌细胞(LLC)的调控作用。方法本研究于2019年6—12月实施。10 000 ng/L的干扰素γ(INF-γ)和100 000 ng/L的脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞48 h成为M1型巨噬细胞,20 000 ng/L白介素(IL)-4诱导RAW264.7细胞48 h成为M2型巨噬细胞;通过流式细胞术和ELISA法分别检测M1、M2巨噬细胞表面标志抗原CD_(86)、CD_(206)的表达率和细胞因子IL-10、IL-12的分泌水平;采用CCK-8法检测不同热疗温度(41℃、42℃、43℃)干预对M2型巨噬细胞在24 h、48 h和72 h的增殖活性作用;采用实时荧光定量聚合酶链反应法(RT-PCR)检测M0、M2型巨噬细胞及热疗(42℃)后M2型巨噬细胞Arg-1、Fizz-1、Ym-1 mRNA相对表达水平;Western blotting法检测M2型巨噬细胞及热疗(42℃)后M2型巨噬细胞Arg-1、Fizz-1、Ym-1蛋白相对表达水平;Transwell法检测LLC+M2、LLC+M2+热疗(42℃)中LLC的侵袭、迁移能力。结果 IFN-γ和LPS可诱导RAW264.7细胞向M1型极化,IL-4可诱导RAW264.7细胞向M2型转化。流式细胞术检测结果显示,M2型巨噬细胞CD_(86)、CD_(206)的表达率高于M0型巨噬细胞和M1型巨噬细胞(P<0.001)。ELISA法检测结果显示,M2型巨噬细胞IL-10的分泌水平较M0、M1型巨噬细胞高(P<0.001);M1型巨噬细胞IL-12分泌水平较M0、M2型巨噬细胞高(P<0.001)。CCK-8法检测结果显示,42℃时热疗抑制巨噬细胞的能力高于41℃及43℃时(P<0.001)。RT-PCR检测结果显示,与M0型巨噬细胞相比,M2型巨噬细胞的Ym-1、Arg-1、Fizz-1 mRNA相对表达水平升高(P<0.001)。热疗(42℃)后M2型巨噬细胞的Ym-1、Arg-1 mRNA和蛋白相对表达水平降低(P<0.001)。Transwell法检测结果显示,M2型巨噬细胞与LLC共培养后LLC侵袭、迁移数量增加(P<0.001);热疗(42℃)后LLC侵袭、迁移数量减少(P<0.001)。结论热疗可能通过下调M2型巨噬细胞的Arg-1、Ym-1 mRNA的表达水平从而抑制LLC的侵袭与迁移能力。