体外循环再灌注血培养诱导肾小管细胞凋亡及乌司他丁的保护作用研究

目的探索乌司他丁对体外循环血清致人肾小管上皮细胞损伤的保护作用。方法以人近曲肾小管上皮细胞HK-2为研究对象,根据是否应用体外循环血清将细胞分为空白组:不含人血清的培养基;对照组:含正常人血清的培养基;试验组:含体外循环血清的培养基,进行缺氧复氧培养,通过流式细胞仪检测肾小管细胞凋亡情况,免疫组化检测caspase-3蛋白表达;乌司他丁组:以改良的缺血再灌注方式处理肾小管上皮细胞的过程中,施加乌司他丁干预。结果流式细胞仪检测结果显示,体外循环血清处理后,4组肾小管上皮细胞HK-2凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中试验组较空白组、对照组、乌司他丁组均明显升高,差异有统计学意义(P=0.00)。4组caspase-3蛋白积分分光光度值(IOD)值比较差异有统计学意义(P<0.05);其中试验组较空白组、对照组、乌司他丁组均明显升高,差异有统计学意义(P=0.00)。结论乌司他丁可通过抑制caspase-3激活,减轻体外循环缺血再灌注血清对HK-2损伤作用。

炎症、他汀类药物与慢性肾脏病

慢性肾脏病(CKD)是影响人类健康的重大疾病,心血管疾病是CKD晚期的重要并发症及主要死亡原因。CKD患者普遍存在微炎症状态及脂代谢紊乱,它们与CKD心血管疾病的发病率与死亡率密切相关。他汀类药物可通过降脂、抗炎减少心血管事件的发生。然而,最近有大的临床实验显示,在存在慢性炎症的疾病中,他汀类药物并不能改善预后,提示炎症可能影响其疗效。

体外循环再灌注血清对人肾小管上皮细胞的损伤作用

目的通过改良缺血再灌注模型,观察体外循环血清对人肾小管上皮细胞损伤的作用。方法以人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)为研究对象,根据是否应用体外循环血清将细胞分为空白组:不含人血清的培养基;对照组:含正常人血清的培养基;实验组:含体外循环血清的培养基,进行缺氧复氧培养。通过流式细胞仪检测肾小管细胞凋亡情况,免疫组化检测Caspase-3蛋白表达。结果实验组凋亡率及Caspase-3均高于对照组及空白组(P<0.05);空白组和对照组凋亡率及Caspase-3表达差异无统计学意义。结论体外循环血清可诱导HK-2细胞凋亡,其机制可能与激活胞内Caspase-3有关。

阿托伐他汀对HK-2细胞纤维化的影响研究

目的研究阿托伐他汀对白细胞介素-6(IL-6)诱导的HK-2细胞增殖和Ⅳ型胶原、纤粘连蛋白(FN)分泌的影响及相关分子机制。方法以不同浓度IL-6作用HK-2细胞24,48,72 h,以化学发光法检测上清液FN、Ⅳ型胶原含量,以噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况。基于以上实验,选定5 ng·mL^-1 IL-6刺激浓度为模型组,时间为48 h,并另设对照组、实验组(1×10^-5mol·L^-1阿托伐他汀)。培养48 h后以MTT法检测细胞增殖,以化学发光法检测上清液FN、Ⅳ型胶原的含量,以Western blot检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)蛋白的表达,以逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TGF-β1、CTGF mRNA表达。结果HK-2细胞的增殖和FN、Ⅳ型胶原的分泌随着IL-6浓度及作用时间的增加而逐渐增加。对照组、模型组、实验组细胞增殖OD值分别为0.60±0.06,0.77±0.13,0.61±0.07;Ⅳ型胶原含量分别为(7.43±0.54),(12.41±1.30),(9.74±0.99)ng·mL^-1;FN含量为(14.77±1.80),(28.21±2.41),(20.72±1.03)ng·mL^-1;CTGF蛋白相对表达量分别为0.41±0.03,1.28±0.04,0.85±0.10;TGF-β1蛋白相对表达量0.60±0.03,1.25±0.21,0.82±0.03;CTGF mRNA相对表达量分别为0.49±0.03,1.98±0.14,1.19±0.12;TGF-β1 mRNA相对表达量分别为0.75±0.05,1.52±0.17,1.07±0.09。模型组与对照组和实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论阿托伐他汀可能通过抑制TGF-β1/CTGF信号通路,抑制IL-6诱导的HK-2细胞增殖及细胞外基质分泌作用,从而干预肾间质纤维化。