原发性肝癌术后早期复发密切相关microRNA的筛选及应用

【目的】利用microRNA芯片技术分析比较两组不同复发倾向肝癌患者的miRNA表达谱,并在更大样品的基础上进行实验验证。【方法】收集10例原发性肝癌组织标本根据术后复发情况分2组:早期复发组与非早期复发组,运用microRNA芯片技术筛选出差异表达显著的microRNAs。结合文献报道,选择mir-144、mir-502-3p作为其他82例肝癌组织标本qReal-time PCR验证的检测指标。并利用生物信息学方法预测其靶基因。【结果】本研究共筛选获得7个差异表达的microRNAs。与非早期复发组相比,在早期复发组中有4个表达上调,3个表达下调。qReal-time PCR验证与microRNA芯片筛选的结果一致。生物信息学方法预测miR-144靶基因可能为Rb1,miR-502-3p靶基因可能为SET。【结论】microRNA芯片筛选的mir-144、mir-451、mir-486-5p、mir-602、mir-551b、mir-96、mir-502-3p与原发性肝癌术后早期复发密切相关。

针式抓钳辅助单孔腹腔镜阑尾切除术的临床应用

目的:探讨针式抓钳辅助单孔腹腔镜阑尾切除术的可行性与安全性。方法:回顾性收集2019年3月至2021年12月为52例患者行针式抓钳辅助单孔腹腔镜阑尾切除术的临床资料,其中男27例,女25例;8~68岁,平均(34.0±2.4)岁;急性单纯性阑尾炎11例,化脓性阑尾炎34例,坏疽穿孔2例,妊娠阑尾炎1例,慢性阑尾炎4例。脐部做16~20 mm弧形切口,穿刺10 mm Trocar作为主操作孔,一枚5 mm Trocar置入腹腔镜作为观察孔,成人气腹压力维持在12~14 mmHg,儿童选择8~10 mmHg。右下腹置入1.6 mm针式抓钳,辅助完成单孔手术,经脐部切口取出标本,切口美容免拆线缝合。结果:52例均顺利完成针式抓钳辅助单孔腹腔镜阑尾切除术。手术时间平均(39.5±8.6)min,术中出血量平均(5.4±2.4)mL,术后3例放置腹腔引流管。术后进半流质饮食时间(1.5±0.6)d,住院(3.2±1.2)d,切口免拆线,无严重并发症发生。术后1周恢复正常工作学习。随访1~3个月,无腹痛、不适症状,脐部切口隐蔽。结论:针式抓钳辅助单孔腹腔镜阑尾切除术是安全、可行的,具有微创与美容的优势,易于推广。

miR-144和miR-502-3p在原发性肝细胞癌术后复发患者中的表达及临床意义

目的探讨miR-144和miR-502-3p在原发性肝细胞癌术后复发患者中的表达及临床意义。方法从我院肝癌数据标本库中挑选82例原发性肝癌深低温冻存组织标本。其中50例早期复发组(术后1年内肝内出现复发病灶);32例非早期复发组(术后超过2年未出现肝内复发病灶)。运用实时荧光定量PCR验证miR-144、miR-502-3p在两组肝癌组织中的表达水平。结果相对于非早期复发组,miR-144在肝癌早期复发组中表达上调[(43.893±107.890)vs(6.321±6.845),P=0.018];其在肝癌组织中的表达仅与肝癌术后早期复发有关(P<0.05)。而miR-502-3p在肝癌早期复发组中表达下调[(6.702±9.775)vs(26.467±39.613),P=0.009];其在肝癌组织中的表达与肿瘤直径、肝癌术后早期复发、脉管癌栓、肝硬化、Edmonson病理分级有关(P<0.05)。结论 miR-144、miR-502-3p与肝癌的早期复发转移密切相关,并且可能是肝癌早期复发的分子标记物以及未来肝癌靶向治疗的有效靶点。

p53激活抗肿瘤药物应用p21途径双荧光素酶报告系统筛选初步研究

目的:构建含人p21启动子的双荧光素酶报告载体,感染肿瘤细胞后用于检测p53激活的抗肿瘤药物筛选。方法:从人血白细胞DNA中克隆p21启动子,用于控制Firefly荧光素酶的表达;Renilla荧光素酶基因和EGFP基因与IRES相连,在CMV启动子控制下表达;将上述元件和基因克隆至载体pLL3.7中,应用酶切和测序反应验证后再转染至U251和Eca109肿瘤细胞建立细胞检测模型。结果:成功构建含人p21启动子、大小约13kb的pLL3.7-Dluc重组质粒,经LipofecttamineTM转染后用于细胞药物筛选;采用MTT方法对8种不同药物对U251和Eca109细胞处理后进行IC50检测,其中姜黄素和丹参酮ⅡA在U251肿瘤细胞中的IC50分别为20和8μg/mL,Eca109细胞的IC50分别为12和25μg/mL;药物作用转染后U251细胞48h后作荧光素酶检测,计算F/R值并SPSS 13.0分析,姜黄素和丹参酮ⅡA的P值分别为0.003和0.024,药物作用后荧光检测结果显著;该实验在Eca109细胞模型中姜黄素和丹参酮ⅡA取得了一致性的结果,P值分别为0.001和0.015。人参皂苷Rb1与阴性对照组相比差异有统计学意义,P=0.022。结论:通过p21途径检测双荧光素酶基因的表达状况,提示姜黄素、丹参酮ⅡA和人参皂苷Rb1三种药物在U251和Eca109肿瘤细胞中具有使p53活性增加的功能。