小鼠部分肝切除术后肝功能指标及干细胞再生研究

目的肝再生是多种效应细胞高度协调的增殖反应,文章旨在揭示小鼠部分肝切除术后肝再生过程中肝功能指标和干细胞增殖进程,为探究肝再生机制提供理论基础。方法对C57BL/6小鼠行肝左前叶切除术,建模成功后分别于术后第2、4、8天收集血清和肝组织标本。将小鼠分为假手术组、术后2天、术后4天和术后8天组,每组3只。通过血清生化检测、HE染色评估小鼠肝部分切除术后肝功能和肝组织变化。利用免疫组织化学检测Ki67,SOX2 and S100B在肝再生不同阶段的表达特征。结果PHx后2、4、8天肝比重均未达到假手术组水平(P<0.05)。手术后2~4 d为肝比重上升的高峰期,术后4~8 d肝比重不再明显增加。与假手术组相比,术后2天组ALT水平显著升高(P<0.05),血清AST水平呈现出类似改变,均为术后第2天急速升高,术后4、8天较术后2天有明显下降(P<0.01);与假手术组比较,术后2天组ALT/AST升高、AST/ALT降低(P<0.05);与术后2天组比较,术后4、8天组ALT/AST降低、AST/ALT升高(P<0.05)。IHC结果显示,假手术组小鼠肝正常增殖细胞(Ki67+)数为38.00±6.24,呈点状分布。PHx后第2天,小鼠肝组织内Ki67+细胞数为143.00±14.18,增殖程度明显强假手术组(P<0.01),增殖的细胞多散在分布于肝实质细胞中。术后第4天,除肝实质细胞外,增生的纤维组织细胞和浸润的炎细胞Ki67+(345.00±50.02),呈现出围绕血管分布的特性,且与术后2天组相比有显著增加(P<0.01)。术后第8天Ki67+细胞数(42.00±3.51)较术后2天组显著下降(P<0.01)。与假手术组比较,术后2天组SOX2、S100B表达增加(P<0.05);与术后2天组比较,术后4天组SOX2、S100B表达增加(P<0.05),术后8天组S100B表达减少(P<0.05)。结论AST/ALT可以作为评价肝损伤再生的指标。肝细胞和非实质细胞共同参与并加速肝再生的发生,SOX2和S100B阳性细胞在肝再生过程中发挥着重要的作用。

恩格列净通过雷帕霉素靶点蛋白抑制胃癌的分子机制初探

目的 恩格列净(empagliflozin, EMPA)是钠-葡萄糖转运蛋白2(sodium-glucose cotransporter 2, SGLT2)特异性抑制剂。通过综合网络药理学预测EMPA对胃腺癌的干预靶点,并利用细胞生物学和分子生物学实验对其作用及分子机制进行验证。方法 使用生物信息学分析胃腺癌预后与SGLT2表达情况的相关性,网络药理学分析EMPA和胃腺癌的共同靶点。用不同浓度的EMPA孵育人胃腺癌细胞AGS 24 h后,CCK8法检测细胞增殖率;选择0、3、6 mmol/L EMPA孵育AGS细胞,实时细胞分析(real-time cell analysis, RTCA)和EdU(5-ethynyl-2-deoxyuridine)检测EMPA对胃腺癌细胞增殖的抑制能力,伤口愈合实验和Transwell实验检测EMPA对胃腺癌细胞迁移和侵袭的抑制能力,Western blot检测雷帕霉素(mammalian target of rapamycin, mTOR)和磷酸化mTOR(phosphorylated mTOR, p-mTOR)表达。BALB/c(nu/nu)裸鼠均于腋下种植5×10~6 AGS细胞,分为对照组、低剂量组和高剂量组,每组7只,1周后,对照组每日腹腔注射生理盐水,低剂量组和高剂量组每日腹腔注射EMPA 3 mg/kg和5 mg/kg,给药1周后检测肿瘤体积。结果 低表达SGLT2的胃腺癌患者生存期和存活率均高于高表达SGLT2的胃腺癌患者。收集了104个EMPA相关潜在靶点和2 028个胃腺癌相关靶点,胃腺癌相关的45个靶点和EMPA潜在靶点相重合,从中鉴定出10条相关信号通路和4个核心基因。这4个关键基因分别是细胞周期依赖激酶4基因(cyclin-dependent kinase-4, CDK4)、3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、雷帕霉素靶点蛋白基因(mammalian target of rapamycin, mTOR)和周期蛋白E1基因(cyclin E1, CCNE1)。CCK-8检测结果示0.39~50 mmol/L EMPA能抑制AGS细胞增殖;与对照组相比,RTCA结果表明3 mmol/L、6 mmol/L EMPA组细胞生长曲线下移。与对照组相比,EdU检测发现3 mmol/L、6 mmol/L EMPA能够抑制AGS细胞的增殖(P<0.05),伤口愈合实验和Transwell实验结果表明,3 mmol/L、6 mmol/L EMPA组细胞迁移和侵袭水平下降(P<0.05),且6 mmol/L EMPA组较3 mmol/L EMPA组更明显(P<0.05)。Western blot结果示组间mTOR总蛋白的表达量差异无统计学意义;但3 mmol/L、6 mmol/L EMPA组的p-mTOR表达均较对照组下降(P<0.05),6 mmol/L EMPA组较3 mmol/L EMPA组更明显(P<0.05)。裸鼠荷瘤实验表明,与对照组相比,EMPA组肿瘤体积均减小(P<0.05),以高剂量组更为明显(P<0.05)。结论 EMPA能够抑制胃腺癌细胞的异常增殖和迁移,这一效应可能与mTOR蛋白的活化密切相关,该研究能够为胃腺癌治疗提供新的潜在药物和干预靶点。