脂肪因子WNT1诱导信号通路蛋白2对棕榈酸及脂多糖诱导的巨噬细胞极化的调节作用

目的探讨WNT1诱导信号通路蛋白2对棕榈酸以及脂多糖诱导的炎症中巨噬细胞极化的调节作用。方法用不同浓度的WISP2蛋白处理巨噬细胞系RAW264.7,采用Cell-Titer发光法测定细胞活力,确定WISP的作用浓度。将细胞分为对照组、棕榈酸处理组、棕榈酸联合不同浓度WISP2处理组(10μg/L及100μg/L)以及脂多糖处理组、脂多糖联合不同浓度WISP2处理组(10μg/L及100μg/L)。应用实时定量聚合酶链式反应检测各组巨噬细胞中M1及M2表型分子的mRNA水平;应用酶联免疫吸附实验检测巨噬细胞分泌的重要炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6的蛋白水平。结果和对照组相比,10μg/L、100μg/L WISP2处理组均未对RAW264.7细胞的活性产生影响,却显著上调Tnfα(1.877±0.039、2.202±0.034,F=309.7,P<0.001)、Il6(1.418±0.056、1.506±0.059,F=81.39,P<0.001)、单核细胞趋化蛋白1(Mcp1)(1.620±0.014、1.982±0.125,F=71.45,P<0.001)、趋化因子c-c配体(Ccl3)(1.892±0.118、1.942±0.132,F=32.93,P<0.001)和诱导型-氧化氮合酶(iNos)(1.691±0.201、1.548±0.090,F=13.60,P<0.05)mRNA表达,显著下调抗炎因子Tgfβ(1.376±0.025、2.152±0.107,F=1.846,P<0.05)、CD206(2.123±0.031、3.139±1.663,F=8.037,P<0.05)、Il4(2.098±0.464、2.494±0.141,F=48.68,P<0.01)、Il10(1.303±0.216、1.574±0.274,F=5.774,P<0.05)mRNA表达,使其向M1型巨噬细胞极化;与对照组相比,100μmol/L棕榈酸能在转录及蛋白水平温和而显著地增加TNF-α、IL-6等炎症因子的表达;与棕榈酸单独刺激相比,给予WISP2联合处理进一步促进巨噬细胞炎症因子TNF-α[(589.4±17.0)ng/L、(692.6±83.4)ng/L,F=56.38,P<0.05]、IL-6[(15.13±1.14)ng/L、(13.33±1.22)ng/L,F=23.32,P<0.001]的蛋白表达及趋化因子Mcp1(160.0±9.8、140.0±18.9,F=141.1,P<0.0001)和Ccl3(17.76±1.92、14.41±1.27,F=125.2,P<0.0001)的mRNA的表达。与对照组相比,100μg/L脂多糖在蛋白水平强烈刺激巨噬细胞TNF-α[(3444±423)ng/L,F=71.20,P<0.0001]、IL-6[(497.0±41.2)ng/L,F=63.50,P<0.0001]等炎症因子的高表达;与脂多糖单独刺激相比,给予WISP2联合处理进一步显著上调趋化因子Mcp1(106.8±8.7、118.7±4.6,F=251.5,P<0.0001)和Ccl3(35.3±12.5、116.4±4.5,F=160.1,P<0.0001)的mRNA的表达。结论脂肪因子WISP2能在棕榈酸以及脂多糖诱导的炎症中促进巨噬细胞向M1型极化,并且在不同炎症反应条件下其对巨噬细胞极化的调节作用不同。

WNT1诱导信号通路蛋白2对肝细胞脂质代谢的影响及其作用机制

目的探讨不同浓度人重组WNT1诱导信号通路蛋白2(WISP2)对人肝癌细胞(HepG2)脂质代谢的影响及相关作用机制。方法分别用不同浓度(0、0.4、1和2 μg/L)人重组WISP2作用于HepG2细胞48 h, Cell-Titer发光法测定细胞活力, 酶法检测各组HepG2细胞内三酰甘油(TG)及总胆固醇(TC)含量, 同时应用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)及免疫印迹法(western blot)检测HepG2细胞内脂质合成、分解、转运相关基因mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组比较, 各浓度人重组WISP2处理组均未降低HepG2细胞的活性;人重组WISP2处理上调HepG2细胞TG、TC含量, 0.4、1、2 μg/L人重组WISP2处理组TG的含量分别为未处理组的1.254±0.039、1.216±0.028、1.174±0.014倍(F=6.791, P=0.006), TC含量分别为未处理组的1.264±0.057、1.394±0.101、1.392±0.077倍(F=7.045, P=0.005)。进一步研究发现, 与对照组比较, 加入人重组WISP2明显增加HepG2细胞脂质合成蛋白甾醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)及二酰基甘油酰基转移酶(DGAT2)mRNA表达(均P<0.05), 显著上调SREBP1、ACC及脂肪酸合成酶(FAS)蛋白水平的表达(均P<0.05);但对低密度脂蛋白受体(LDLR)、载脂蛋白B(ApoB)、载脂蛋白E(ApoE)这类脂质转运蛋白及关键的脂质分解蛋白--脂肪三酰甘油脂肪酶(ATGL)的表达无明显影响。结论 rh-WISP2能显著增加肝细胞脂质含量, 促进脂质合成增加可能是其作用的关键机制。