不同剂量的地龙提取物对肺纤维化小鼠肺组织波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白表达水平及纤维化程度的影响

目的探讨不同剂量的地龙提取物对肺纤维化小鼠肺组织波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白表达水平及纤维化程度的影响。方法将90只C57雄性小鼠分为空白组、模型组、高剂量组、中剂量组和低剂量组,每组18只。除空白组外,其余4组通过腹腔注射百草枯建立肺纤维化模型。建模后1周,分别给予高剂量组、中剂量组、低剂量组小鼠灌服80 mg/(kg·d)、40 mg/(kg·d)、20 mg/(kg·d)的地龙提取物,给予空白组和模型组灌服等量的生理盐水,干预14 d。于建模后第14天、第21天和第28天,检测各组小鼠肺组织波形蛋白和α-平滑肌肌动蛋白表达水平;建模后第21天,采用HE染色法和Masson染色法分别观察小鼠肺组织纤维化及胶原沉积情况。结果建模后第14天、第21天及第28天,模型组小鼠肺组织的波形蛋白和α-平滑肌肌动蛋白表达水平均高于空白组(均P<0.05);建模后第21天、第28天,高剂量组、中剂量组、低剂量组小鼠肺组织的波形蛋白和α-平滑肌肌动蛋白表达水平均低于模型组(均P<0.05);建模后第28天,高剂量组小鼠肺组织的波形蛋白表达水平低于低剂量组,且α-平滑肌肌动蛋白表达水平均低于中剂量组与低剂量组(均P<0.05)。HE染色和Masson染色结果显示,模型组小鼠肺组织结构异常,正常肺泡结构消失,肺泡壁明显增厚,成纤维细胞增生明显,肺泡间隔和间质均可见到大量蓝色沉淀;相较于模型组,高剂量组、中剂量组、低剂量组小鼠肺部纤维化程度及胶原纤维沉淀程度明显减轻,肺泡结构相对完整,且高剂量组改善更明显。结论地龙提取物能有效抑制肺纤维化小鼠肺组织中波形蛋白和α-平滑肌肌动蛋白的表达,减少肺组织胶原沉积,延缓肺纤维化的进程,且高剂量[80 mg/(kg·d)]地龙提取物的改善效果更明显。

基于成纤维细胞的激活JAK2/STAT3信号通路探讨生地黄提取物对过敏性紫癜的机制研究

目的 探讨生地黄对过敏性紫癜(HSP)小鼠可能的作用机制研究。方法 将60只SPF级雄性实验小鼠,平均随机分成对照组、模型组、西咪替丁组(0.1 g/mL)、生地黄提取物低、中、高剂量组(10、20、30 mg/mL)。除对照组小鼠外,其余小鼠造模HSP,成功后按实验要求每日灌胃等量对应生地黄提取物,模型组和对照组灌胃等量生理盐水,连续21 d。结束后,采用碘酸雪夫染色肾脏组织的病理学变化,采用ELISA试剂盒检测小鼠血清IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10水平,Western blot法检测小鼠肾组织中p-JAK2(Janus Kinase 2,JAK2)、p-STAT3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)的蛋白相对表达。结果 西咪替丁组和生地黄提取物组病理评分都明显远低于模型组,给药后小鼠肾脏组织学损害显著减轻。与对照组比较,模型组小鼠IFN-γ、IL-2表达均明显降低,IL-4、IL-10表达均明显升高(P <0.05);与模型组比较,西咪替丁组、生地黄提取物低、高剂量组小鼠IFN-γ、IL-2水平均升高,IL-4、IL-10水平均降低(P <0.05),且与生地黄提取物低、中剂量组相比,生地黄提取物高剂量组表达更明显(P <0.05)。与对照组相比,模型组小鼠肾组织中p-JAK2、p-STAT3蛋白表达均显著升高(P <0.01);生地黄提取物高剂量组小鼠肾组织中p-JAK2、p-STAT3蛋白表达明显低于西咪替丁组、生地黄提取物低、中剂量组(P <0.05)。结论 生地黄提取物具有显著的抗氧化活性和抗炎作用,可减轻HSP小鼠的症状,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路激活,从而调节p-JAK2和p-STAT3蛋白的表达水平有关。

地龙提取物减弱矽尘诱导小鼠肺纤维化作用与a-SMA、TGF-β表达关系研究

目的研究地龙提取物减弱矽尘诱导的小鼠肺纤维化作用及与a-SMA、TGF-β表达的关系。方法选取的SPF BALB/c小鼠进行常规饲养,3组小鼠每组各20只采用随机数字表法将患矽尘病小鼠随机分组,正常鼠注射生理盐水作为空白组,矽肺鼠气管注射等量生理盐水作为模型组,矽肺鼠腹腔注射地龙提取物作为地龙提取物组,测定并记录小鼠0~5周内体质量具体变化情况,采用染色试剂染色后显微镜下观察肺纤维细胞增殖速率状况。采用RT-PCR荧光标记法检测TGF-β1及α-SMA mRNA的表达采用免疫荧光染色检测TGF-β1及α-SMA蛋白表达结果,探讨地龙提取物减弱矽尘诱导的小鼠肺纤维化作用及与a-SMA、TGF-β表达的关系。结果空白组小鼠od值为(0.328±0.0045),其肺纤维细胞增殖水平最低,模型组小鼠od值为(0.411±0.0100),其肺纤维细胞增殖水平最高,地龙提取物组小鼠od值为(0.359±0.0050),水平介于空白组与模型组之间,差异有统计学意义(χ2=14.9887,P=0.0006)。0~5周小鼠体质量呈现出增长趋势,第1、3、5周模型组小鼠体质量与空白组、地龙提取物组小鼠体质量比较有明显差异,差异有统计学意义(P<0.05)。小鼠肺纤维α-SMA蛋白表达水平空白组(1.000±0.019)明显低于模型组(1.739±0.101),模型组(1.739±0.101)明显高于地龙提取物组(1.463±0.047),比较存在差异且具有统计学意义(P<0.05)。TGF-β1蛋白表达水平,地龙提取物组(1.295±0.042)较模型组(1.521±0.091)明显偏低,比较存在差异且具有统计学意义(P<0.05)。空白组α-SMA、TGF-β1 mRNA相对表达量较模型组低,差异有统计学意义(P<0.05);经地龙提取物干预后,地龙提取物α-SMA、TGF-β1 mRNA相对表达量较模型组α-SMA、TGF-β1 mRNA相对表达量显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论研究结果表明地龙提取物可明显降低肺纤维化组织细胞基质外聚集与沉积的细胞质基质,能调控TGF-β1蛋白与α-SMA蛋白的有效表达,抑制肺纤维细胞增殖及肺组织细胞纤维化速率,加快细胞外细胞基质沉积降解,减缓肺组织细胞纤维化。

橘皮苷对百草枯致肺纤维化小鼠细胞外基质转化干预作用及Fas/FasL蛋白表达的机制研究

目的探讨橘皮苷对百草枯致肺纤维化小鼠细胞外基质转化的干预作用及Fas/FasL蛋白表达的机制。方法将60只雄性昆明小鼠随机分为空白组(Blank组)、模型组(Model组)、橘皮苷高剂量HES(H)组、橘皮苷中剂量HES(M)组、橘皮苷低剂量HES(L)组和地塞米松(DEX)组,每组10只。制备小鼠肺纤维化模型的同时ig给药,Blank组和Model组ig 0.1 mL 0.9%生理盐水,每2天给药1次,第28天眼球取血后处死所有小鼠,肺组织HE及Masson病理学染色,对比各组之间炎症浸润及纤维化变化,用免疫组织化学法检测肺组织Fas/FasL的表达情况。利用双荧光素酶报告基因实验检测药物对EMT-like标志物(E-Cadherin,Vimentin),MMP2,NF-κB等的影响。结果模型组小鼠的肺组织严重破坏,肺泡结构消失,大量纤维组织增生;与肺纤维化模型组相比,给药橘皮苷组小鼠的肺组织肺纤维化程度明显改善,肺泡结构相对更加完整。与模型组相比,HES(H)组、HES(M)组、HES(L)组和DEX组Fas/FasL表达显著降低(P<0.01)。与HES(M)组、HES(L)组和DEX组相比,HES(H)组Fas/FasL表达也显著降低(P<0.05),橘皮苷可以抑制EMT-like过程,增加MMP2的表达,抑制NF-κB的表达(均P<0.05),肺纤维化及肺炎症浸润程度明显减轻。结论橘皮苷对于百草枯导致的小鼠肺纤维化具有保护作用,降低Fas/FasL表达,橘皮苷对百草枯致肺纤维小鼠纤维化改善与Fas/FasL凋亡通路有关。

天麻钩藤饮对癫痫小鼠海马区miRNA-9表达的影响及对神经损伤的保护机制

目的:探讨天麻钩藤饮干预后癫痫小鼠脑电图的变化、小鼠海马区miRNA-9表达水平的变化以及对神经损伤的保护机制。方法:50只雄性昆明小鼠,随机分成对照组、模型组、卡马西平组、中药高剂量组和中药低剂量组,每组10只。造模前1周,对照组和模型组均予20mL·kg^(-1)·d^(-1)0.9%氯化钠溶液进行灌胃;卡马西平给予30mg·kg^(-1)·d^(-1)卡马西平混悬液灌胃,中药高、低剂量组分别予天麻钩藤饮按30、10mL·kg^(-1)·d^(-1)灌胃。通过盐酸匹罗卡品构建小鼠急性癫痫模型。对各组小鼠进行行为学和脑电图观察。采用实时荧光定量PCR技术检测小鼠海马区miRNA-9表达水平的变化;并且通过免疫组化检测神经元特异核蛋白(NeuN)标记的神经元核抗原、FJB标记损伤的神经元与人血小板内皮细胞黏附分子-1(PECAM-1)标记的血小板内皮细胞黏附分子、紧密连接蛋白-1(ZO-1)标记的胞质紧密连接蛋白1,蛋白印迹法测定ZO-1/ZONAB的水平。结果:与对照组比较,模型组小鼠癫痫发作的频率多、持续时间长、发作级别高(P<0.01),小鼠脑电图尖波、棘波、棘慢波明显增多,海马区miRNA-9的表达明显下调(P<0.01);与模型组比较,中药高、低剂量组小鼠癫痫发作频率、持续时间及发作级别减少(P<0.05),小鼠脑电图痫性波形减少,小鼠海马区miRNA-9的表达升高(P<0.01)。与模型组比较,3个用药组NeuN细胞显著增多(P<0.05),损伤的神经元细胞显著减少(P<0.05),中药高、低剂量组海马CA3区PECAM-1免疫反应显著降低(P<0.05),ZO-1蛋白水平显著降低(P<0.05),而ZONAB蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论:天麻钩藤饮可抑制癫痫诱导的神经元损伤,并对维持血脑屏障稳定性有保护作用,其可能通过ZO-1/ZONAB信号通路所介导,从而发挥抗癫痫的作用。

雷公藤甲素改善博来霉素所致肺纤维化模型小鼠肺功能及内质网应激作用机制

目的 观察和评价分析雷公藤甲素(Triptolide,TPL)改善博来霉素(Bleomycin,BLM)所致肺纤维化模型小鼠肺功能及内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)作用的相关机制。方法 昆明小鼠60只,雌雄各半,分成6组:对照组、模型组、地塞米松组及雷公藤甲素低、中、高浓度组各10只。经气管插管雾化注射BLM建立肺纤维化小鼠模型。造模后第14天开始灌胃给予地塞米松或者TPL进行治疗,每两天给药一次,持续给药28d。观察小鼠一般情况,检测小鼠用力肺活量(FVC)、0.4秒率(FEV 0.4/FVC)、质量FVC、吸气阻力(RI)、呼气阻力(RE)、动态肺顺应性(Cydn),并用Western blot和免疫组织化学染色分析肺组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP 78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达情况。结果 与对照组相比,模型组FVC降低、0.4秒率升高、质量FVC下降、Cydn降低;与模型组相比,地塞米松组及TPL低、中、高浓度组FVC升高、0.4秒率降低,质量FVC和Cydn升高,TPL高浓度组FVC和质量FVC回升更明显,Cydn升高。病理可见模型组小鼠的肺组织实变区内慢性炎性细胞浸润,大量胶原沉积,高表达的GRP 78和CHOP蛋白主要定位于空泡化的Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡs)。TPL高浓度组小鼠炎症缓解,胶原沉积减少,肺组织中GRP 78和CHOP蛋白的表达均减少。结论 TPL能够明显改善小鼠肺功能,减少肺间质胶原沉积,可能与调节纤维化肺组织实变区内AECⅡs的GRP 78和CHOP蛋白表达,缓解ERS压力,恢复AECⅡs的正常功能有关。

土木香内酯对肺纤维化小鼠中介导细胞自噬的mTOR蛋白的调控机制研究

观察和评价分析土木香内酯对肺纤维化小鼠中介导细胞自噬的mTOR蛋白的调控机制。将60只昆明小鼠随机分为对照组、模型组、土木香内酯高浓度组、土木香内酯中浓度组、土木香内酯低浓度组和强的松组,每组10只。通过采用博来霉素(BLM)来建立模型,对照组小鼠注射0.9%的生理盐水,造模成功后,对相应的分组小鼠进行不同的处理,对照组和模型组给予0.9%的生理盐水[0.01 g/(kg·d)],土木香内酯高浓度组、土木香内酯中浓度组、土木香内酯低浓度组分别给予不同浓度的土木香内酯,强的松组给予强的松[0.455 g/(kg·d)]灌胃,于造模后d 7,14,28分批提取样本。采用苏木素-伊红(HE)及Masson染色观察小鼠肺泡炎和纤维化程度;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肺组织mTOR,核糖体S6,微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(MAP1 LC3-Ⅱ)的表达;电镜检测观察小鼠肺组织自噬情况。与对照组比较,模型组小鼠在7,14,28 d肺泡炎及肺纤维化显著(P<0.01);相对于模型组,土木香内酯高浓度组、土木香内酯中浓度组、土木香内酯低浓度组和强的松组对小鼠肺泡炎和纤维化程度的改善程度有差异,差异有统计学意义(P<0.05)。相对于对照组,其它各组肺组织mTOR,S6蛋白表达水平均升高,小鼠肺组织LC3-Ⅱ表达水平降低。但相对于模型组,土木香内酯高浓度组、土木香内酯中浓度组、土木香内酯低浓度组肺组织mTOR,S6蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。土木香内酯高浓度组、土木香内酯中浓度组、土木香内酯低浓度组肺组织LC3-Ⅱ表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。电镜检测观察小鼠肺组织显示,对照组未见自噬,而模型组细胞形态最差,存在个别自噬。通过本研究表明,土木香内酯对博来霉素所致小鼠肺纤维化能够起到治疗的效果,可能与其降低介导细胞自噬的mTOR蛋白表达有关。