花生突变体创造途径及进展综述

花生是中国重要的油料作物之一,丰富的种质资源是花生遗传育种和功能基因组学研究的重要基础,通过理化因素诱发构建突变体库的方法已成为创建新型种质资源的一种有效手段。本研究阐述了构建花生突变体库的目的和意义,综述了诱变技术在创造花生突变体和品种改良中的应用,并展望了突变体库在花生功能基因组学和分子标记辅助育种中的前景。

表达PCV2 Cap蛋白重组复制缺陷型腺病毒黏膜免疫效果

为研发高效的猪圆环病毒2型(PCV2)黏膜疫苗,通过口服、肌内和滴鼻途径,将表达PCV2 Cap蛋白主要抗原表位的重组复制缺陷型腺病毒(rAd/Cap/518)免疫Balb/c小鼠,同时以无外源基因的空腺病毒(wild-rAd)经滴鼻途径免疫Balb/c小鼠作为对照组,分别检测小鼠血清中IgG和唾液、肺部、肠道灌洗液中IgA抗体水平,脾脏T淋巴细胞亚群及相关细胞因子IFN-γ和IL-4的分泌水平以及淋巴结、脾脏和肺组织中PCV2病毒载量,评价其黏膜免疫效果。结果显示,与对照组相比,rAd/Cap/518经肌内途径免疫诱导产生的血清IgG抗体水平显著增加;经滴鼻和口服途径免疫诱导产生的局部黏膜部位IgA抗体水平显著增加。rAd/Cap/518经滴鼻、肌内和口服3种途径免疫诱导产生的CD3+T细胞百分率为46.60%~55.65%,经滴鼻免疫诱导产生的CD3+CD4+T细胞百分率为34.43%~37.29%,经肌内和口服途径免疫诱导产生的CD3+CD4+T细胞百分率为36.35%~41.58%,经滴鼻途径免疫诱导的CD3+CD8+T细胞百分率为12.39%~18.32%,经口服免疫诱导的CD3+CD8+T细胞百分率为16.29%,均显著高于对照组。rAd/Cap/518经滴鼻途径免疫后,能诱导小鼠脾脏和肠系膜淋巴细胞分泌IFN-γ。攻毒后免疫鼠体内病毒载量显著降低。综上,rAd/Cap/518经肌内途径免疫主要诱导全身性免疫应答,经滴鼻和口服途径免疫能诱导全身性和局部黏膜免疫应答,是一种很有前景的黏膜免疫候选疫苗。

普惠性托育服务体系建构的国际经验与本土启示——基于经济合作与发展组织的政策解析

20世纪90年代,经济合作与发展组织(以下简称OECD)国家将学前教育目光下移至婴幼儿照料服务体系建设,通过颁布一系列的法律法规、战略规划和支持计划不断提升婴幼儿托育服务质量,赋予了婴幼儿保教重要的战略意义。2021年8月20日,十三届全国人大常委会第三十次会议通过了《关于修改〈中华人民共和国人口与计划生育法〉的决定》,把“推动建立普惠托育服务体系,提高婴幼儿家庭获得服务的可及性和公平性”写入法律。

2022年郑州市区3~7岁儿童体格发育与营养状况调查

目的 了解郑州市3~7岁儿童体格发育及营养状况,为进一步开展儿童保健工作提供依据。方法 分层随机整群抽取2022年1-9月郑州市区16 284名3~7岁儿童体检资料,体格指标选取体质量、身高,计算体质量指数(BMI)进行营养状况评价,比较男女性别差异,并与2015年中国9市儿童生长水平进行比较。结果 男童身高、体质量、BMI均高于同年龄段女童,部分年龄段儿童的平均身高、体质量低于2015年中国9市平均水平,差异有统计学意义(P<0.05);消瘦总体发生率为5.9%,超重为11.2%,肥胖为7.3%。结论 郑州市区3~7岁儿童体格生长水平总体状况低于中国9市儿童平均水平,且同时存在消瘦、超重及肥胖状况,需尽早采取干预。

普惠性托育服务政策执行现实问题、原因分析及优化建议

建构普惠性托育服务体系是党的十九大保障幼儿权益的重大民生举措,党的二十大更是把实现幼有善育提到了重要的日程。当前,普惠性托育政策在执行过程中有偏离政策初衷的倾向,将建构普惠性托育服务体系窄化为发展普惠性托育机构、忽视了为家庭提供科学养育指导是其重点,将发展普惠性托育体系建设片面理解为追求普惠性托育学位数量、忽视入托机会平等和托育服务质量,将发展普惠性托育体系的对象窄化为2-3岁幼儿、忽视2岁以下幼儿群体。究其原因,政策文本缺乏明确性,给政策执行者较大的文本解读空间,而不同利益联盟之间的高冲突性博弈以及缺乏有效的管理和监督无疑增加了政策执行背离公共利益的可能。为此,应坚定普惠性托育服务政策的儿童与家庭立场,明确其核心属性,认准包括婴幼儿在内的服务对象,提供多样化家庭支持服务,以及明确管理职责,强化对普惠性托育服务的监督和管理。

华北地区18个玉米品种秸秆饲用品质分析

为提高玉米(Zea mays)秸秆饲用化的科学性与实效性,采集华北地区规模化推广种植的18个玉米品种秸秆作为研究样本,用概略养分分析法、范氏纤维分析法等对其营养品质分析评价。并用SPSS软件对玉米秸秆营养品质综合得分进行聚类分析,研究18个玉米品种秸秆营养品质及其饲用品质的典型性和代表性。结果表明:18个玉米品种的秸秆营养品质存在差异,由高到低依次为隆平206>漯单6号>先玉335>先科338>滑玉14>阳光99>登海605>浚单29>滑玉12>浚单26>浚单20>漯单9号>伟科702>阳光98>蠡玉16>郑单958>蠡玉35>吉祥1号。聚类分析发现,隆平206和吉祥1号各自独为一类;漯单6号、先玉335、先科338、滑玉14聚为一类;阳光99、登海605、浚单29聚为一类;蠡玉16、郑单958、蠡玉35聚为一类;滑玉12、浚单26等6个品种聚为一类。综合分析可知,隆平206、漯单6号、先玉335、先科338和滑玉14等品种秸秆的饲用品质相对较高,若遵从该地区现有的耕作模式和栽培习惯,而又"粮饲兼顾",依据本研究营养品质分析结果,则可优先种植这些品种,以提高秸秆的饲料化利用水平,增加农业附产值。

猪肺炎支原体与猪鼻支原体分离鉴定及鉴别检测

为建立猪肺炎支原体与猪鼻支原体的鉴别诊断方法,对从河南省及周边地区猪场采集的患呼吸道疾病的猪只样品进行支原体的分离培养,针对猪肺炎支原体与猪鼻支原体设计了2对引物,扩增片段大小分别为480 bp和360 bp,对所分离纯化的病原微生物进行了菌落形态观察及分子鉴定。结果显示,分离的病原微生物为支原体,菌落呈典型的"煎蛋样"特征;通过单一PCR扩增反应,分别得到了猪肺炎支原体与猪鼻支原体相应的目的扩增片段。表明分离到了猪肺炎支原体与猪鼻支原体。在单一扩增的基础上,建立了猪肺炎支原体与猪鼻支原体二重PCR反应方法,可同时得到2条目的条带,与单一PCR扩增结果一致。表明建立的二重PCR方法可用于猪肺炎支原体与猪鼻支原体的同时检测和鉴别诊断。

不同蛋白水平日粮对断奶仔猪的影响

试验选择健康状况良好、体重接近的断奶仔猪200头,研究不同蛋白水平的日粮对断奶仔猪生产性能、腹泻率、蛋白消化率以及血清生化指标的影响,结果表明:不同蛋白水平日粮对断奶仔猪的日均采食量、日均增重和蛋白消化率均没有影响(P>0.05),蛋白水平19.5%、18.5%的试验组与蛋白水平21.5%、17.5%的试验组相比断奶仔猪的料重比显著降低(P<0.05),蛋白水平17.5%的日粮能显著降低腹泻率(P<0.05);蛋白水平为18.5%和17.5%的日粮均显著降低断奶仔猪血清尿素氮和谷丙转氨酶、碱性磷酸酶的活性(P<0.05),还能显著提高血清IgA、IgG的浓度(P<0.05),蛋白水平为17.5%的日粮显著降低血清胆固醇(P<0.05)。

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌磺胺类药物耐药基因的检测

为了解河南省及周边地区规模化猪场猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)对磺胺类药物的耐药情况,本研究从河南省及周边地区49个规模化猪场的肺脏和气管中分离出79株疑似APP菌株,血清型鉴定结果显示,分离菌株为1、2、3、5、7、8、9、10型APP,采用纸片扩散法对分离株进行了耐药表型鉴定,同时采用PCR方法对磺胺类药物耐药基因进行了检测。药敏试验结果显示,APP对磺胺类药物的耐药率为100%(79/79)。根据Gen Bank中登录的序列,设计了3对特异性引物,对磺胺类药物的耐药基因Sul1、Sul2、Sul3进行扩增检测。耐药基因检测结果显示,分离的79株细菌中,Sul2基因检出率为100%(79/79),Sul1基因的检出率为79.75%(63/79),Sul3基因的检出率为89.87%(71/79),Sul1和Sul2基因同时检出率为70.89%(56/79),Sul1和Sul3同时检出率为62.03%(49/79),Sul2和Sul3基因同时检出率为77.22%(61/79)。

枯草芽孢杆菌JA-14菌剂对肉鸡粪便中氨气释放量的影响

为了降低肉鸡粪便中氨气的释放量,净化鸡舍内环境,提高肉鸡的生产性能,向肉鸡基础日粮中添加枯草芽孢杆菌JA-14菌剂(基础日粮组为对照组),采用纳氏比色法测定肉鸡粪便中氨气的释放量,并测定粪便的蛋白酶活力、总氮和氨态氮含量、pH值及水分含量。结果显示,与对照组相比,添加JA-14菌剂组粪便中氨气释放量下降了24.88%,蛋白酶活力提高了23.25%,总氮和氨态氮含量分别下降了35.72%和63.80%,pH值和含水量分别下降了6.31%和25.66%。可见,枯草芽孢杆菌微生态制剂能够提高肉鸡肠道蛋白酶活力、减少氨气排放量。

萼脊兰AGAMOUS(AG)基因的克隆与表达分析

通过对萼脊兰AGAMOUS(AG)基因进行结构、功能分析、克隆和AG基因的表达调控等方面的探究,发现,萼脊兰AG的氨基酸序列属于植物特有的MIKC型MADS-box的C类基因,该基因c DNA全长1 002 bp,包含一个702 bp的开放阅读框,该基因命名为AG(登录号KY744276),共编码233个氨基酸。蛋白序列比对和进化树分析表明,AG蛋白与蝴蝶兰蛋白一致性最高,进化距离最近。二级结构分析表明,该蛋白分子属于亲水性蛋白,其中α螺旋占48.93%,延伸链占11.59%,不规则卷曲占39.48%。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析表明,AG基因在花蕾和蕊柱中表达量很高,说明AG基因的表达具有组织特异性,在ABCDE模型中属于C类基因的特征非常明显,控制着雄蕊和雌蕊的发育。

枯草芽孢杆菌J-4菌株产抑菌物质发酵条件优化

为了提高枯草芽孢杆菌J-4菌株发酵液中抑菌物质的含量,采用单因素试验和正交试验相结合的方法,对基础发酵培养基的组成(碳源、氮源、无机盐含量)和发酵条件(发酵时间、装液量、发酵温度、接种量)进行优化。优化后的培养基组成为葡萄糖1.00%、黄豆饼粉1.00%、MgSO_40.15%、Na_2HPO_40.10%、NaH_2PO_40.10%;发酵条件为发酵时间36 h、装液量100 mL(250 mL)、发酵温度37℃、摇瓶接种量5%。在此条件下,枯草芽孢杆菌J-4菌株抑菌圈面积提高50.25%。

蝴蝶兰2种病毒的同步检测及其CP融合反义表达载体构建

【目的】建兰花叶病毒(CyMV)和齿兰环斑病毒(ORSV)是侵染蝴蝶兰最主要的2种病毒,给蝴蝶兰产业造成巨大经济损失。本文建立了快速检测这2种病毒的方法,并为培育同时抗CyMV和ORSV的蝴蝶兰新品种奠定基础。【方法】根据2种病毒CP基因序列设计了2对特异性引物,运用RT-PCR方法同时检测这2种病毒,利用反义RNA技术构建2种病毒CP基因的融合表达载体。【结果】利用设计的特异性引物检测12株蝴蝶兰样品,有25%同时检测出2种病毒,在同一PCR反应体系中,扩增出2个目的条带清晰无杂带。从感病蝴蝶兰叶片总RNA中克隆出CyMV CP基因的125 bp片段和ORSV CP基因的164 bp片段。将CyMV的CP基因片段以3’→5’方向与表达载体p CAMBIA1300连接,命名为p CAMBIA1300-CyMV,经酶切及菌落PCR鉴定可获得125 bp的小片段;再将ORSV的CP基因片段以3’→5’方向与p CAMBIA1300-CyMV连接,命名p CAMBIA1300-CyMV-ORSV,经酶切及菌落PCR鉴定可获得289 bp的片段。【结论】所设计的2对特异性引物能够在同一PCR体系中快速高效地检测出CyMV和ORSV,含2种病毒CP基因的反义融合表达载体构建成功。

猪流行性腹泻病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及应用

为建立一种快速、敏感的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)检测方法,试验据GenBank中PEDV基因组序列,设计并合成针对M基因的内、外2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了检测PEDV的巢式RT-PCR方法。结果显示,单一使用外引物或内引物进行常规RT-PCR时检测限量均为50pg PEDV RNA模板,而使用巢式RT-PCR可检测到50fg PEDV RNA模板。使用该方法对猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪瘟病毒的扩增结果均为阴性。结果表明,建立的巢式RT-PCR方法特异性、敏感性好,可快速准确地检测出样本中微量PEDV核酸。

葱兰的离体培养及再生体系研究

为了快速获得健康的葱兰幼苗,通过优化离体培养条件,建立葱兰高效的离体再生体系。利用葱兰叶片、鳞叶和顶芽作为外植体进行了愈伤组织和植株再生体系研究。结果表明,顶芽为最适外植体;丛生芽诱导和增殖的最适培养基为MS+TDZ0.5mg/L+NAA0.1mg/L,其次是MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L;生根培养基为1/2MS+IBA0.5mg/L,生根率为100%,为葱兰的工厂化生产提供技术参考。

抗鹅α-干扰素单链抗体基因扩增与表达

为制备抗鹅α-干扰素的单链抗体,以抗鹅α-干扰素的杂交瘤细胞株总RNA为模板,RT-PCR法扩增鹅α-干扰素的抗体轻、重链基因,再采用SOE-PCR法,以编码柔性多肽(Gly4Ser)3为接头,组装出完整的鹅α-干扰素的单链抗体可变区片段(Sc Fv)基因,并将Sc Fv基因克隆到p GEMT-Easy载体中进行测序分析,将测序正确的Sc Fv基因片段克隆入p ET-30a载体中进行诱导表达。结果显示,成功组装了Sc Fv基因,其全长为726 bp,为VH-Linker-VL结构,其中VH长357 bp、VL长324 bp,成功表达了Sc Fv蛋白,大小为27 ku。

基于S蛋白检测猪流行性腹泻抗体间接ELISA方法的建立

为建立检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)S蛋白抗体的间接ELISA方法,应用RT-PCR方法扩增PEDV河南流行毒株S基因794bp片段,将其克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建pET-32a-S重组质粒并转化至宿主菌BL21,在37℃条件下加入IPTG进行诱导表达,经SDSPAGE分析显示,该蛋白以融合蛋白形式高效表达,分子量约为46.9kD;Western-blot分析表明,所表达的重组蛋白具有良好的反应原性。以纯化的S蛋白为包被抗原建立检测PED抗体的间接ELISA方法,试验确定抗原最佳包被量为0.04μg/孔,血清最佳稀释度为1∶100,HRP-IgG二抗最佳稀释度为1∶2 000,阳性判定标准为OD450值≥0.24。应用该方法对采自河南省不同地区23个养猪场的279份血清样本进行检测,结果显示,母猪血清样本PED抗体阳性率为97.42%(227/233);育肥和保育猪血清样本阳性率为71.74%(33/46)。试验结果表明,所建立的间接ELISA方法特异性、灵敏性和可重复性良好,可以用于猪群PED抗体水平监测和流行病学调查。

文心兰肌动蛋白基因(Actin)片段的克隆及表达分析

以文心兰叶片为材料,根据Gen Bank中登录的植物肌动蛋白基因同源核苷酸保守序列设计简并引物,利用RT-PCR技术得到了2个动蛋白基因(Actin)片段。序列分析结果表明,2个Actin基因片段长度均为1062 bp,2条序列一致性为90.87%,分别命名为OnA CT1和OnA CT2,并在Gen Bank注册,登录号分别为JN981136和JN981137。2条序列编码完全相同的354个氨基酸,具有Actin蛋白的特征序列;进化树分析表明,文心兰Actin蛋白与萼脊兰和蕙兰的亲缘关系最近。采用实时荧光定量(qR T-PCR)和半定量RT-PCR(Semi-quantitative RT-PCR)方法进行表达分析,结果显示该基因在营养生长和生殖生长阶段的不同组织中表达相对稳定,可以作为发育阶段相关基因表达研究的内参基因。

甜樱桃PaMADS4基因克隆及其表达分析

为研究甜樱桃在高温下胚囊发育的分子机理,以甜樱桃品种‘拉宾斯’为试材,采用RT-PCR结合RACE方法克隆胚囊发育相关的MADS-box SEP类基因c DNA全长,使用半定量PCR法进行特异性表达分析,通过温室和露地环境PaMADS4实时荧光定量分析不同温度下的表达。克隆得到一个基因全长999 bp,命名为PaMADS4(Gen Bank登录号:JQ686726),包含一个735 bp的开放阅读框,编码244个氨基酸;序列比对和进化分析表明,PaMADS4与拟南芥SEP基因家族亲缘关系最近;组织特异性分析表明PaMADS4在四轮花器官中均表达;开花后PaMADS4在露地中的表达量明显大于温室。

示范性幼儿园制度的价值异化与回归

示范性幼儿园制度的建立在我国学前教育发展过程中发挥了重要作用。但是近年来,示范性幼儿园制度受到各方质疑,因此有必要深入研究问题所在,进一步完善这一制度。文章从示范性幼儿园制度建立的历史背景入手,分析这一制度的价值异化,进而深入探讨示范性幼儿园制度价值异化的内在逻辑,提出理性改革的路径。