11株鲑源嗜冷黄杆菌药物敏感性分析

【目的】由嗜冷黄杆菌(Flavobacterium psychrophilum)引起的细菌性冷水病是造成国内外鲑科鱼类养殖巨大经济损失的细菌性疾病之一。通过对我国东北地区临床分离的鲑源嗜冷黄杆菌的药敏特性进行比较分析,以期对该菌引发疾病的防治提供基础数据和用药指导。【方法】采用微量肉汤稀释法检测11株嗜冷黄杆菌分离株对20种抗菌药物的敏感性,并进一步探讨其药物敏感性与时空分布和宿主的关联性。【结果】分离株普遍对链霉素、甲氧苄啶敏感性低,对利福平、呋喃唑酮等敏感;分离自黑龙江省的菌株对链霉素和甲氧苄啶的药物敏感性较低,MIC值分别达到32μg/mL(50%)和16μg/mL(75%);吉林省菌株对链霉素、甲氧苄啶的药物敏感性较低,分别达到32μg/mL(33.3%)和16μg/mL(66.7%)。白点鲑源、美洲红点鲑源和亚东鲑源分离株对链霉素和甲氧苄啶药物敏感性较低,MIC均达到16μg/mL以上;白点鲑源分离株对新霉素和氯霉素表现出较低的药物敏感性,美洲红点鲑源分离株则对甲砜霉素、氟甲喹和恶喹酸表现出较低的药物敏感性。【结论】2019—2020年我国东北地区临床分离的嗜冷黄杆菌分离株对氟甲喹、恶喹酸、左氧氟沙星、庆大霉素、四环素、氨苄西林、氟苯尼考等药物的敏感性均呈现升高趋势,建议选用恩诺沙星对嗜冷黄杆菌引起的细菌性冷水病进行防治。

一株虹鳟源枯草芽孢杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

为筛选对虹鳟(Oncorhynchus mykiss)有潜在益生效果的菌株,本研究从健康虹鳟幼鱼肠道中分离到1株潜在益生菌株RT-BS07,采用形态学观察和分子特征分析对该菌株进行了鉴定,并评价了该菌株的抑菌性、耐受性、黏附性和安全性。形态学观察显示,菌株RT-BS07为革兰氏阳性杆菌,有圆形或椭圆形芽孢。16S rRNA比对结果显示,该菌株与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)NCBI3610株的同源性为99.86%。结合16S rRNA基因序列分析和形态学观察结果,确定菌株RT-BS07为枯草芽孢杆菌。菌株RT-BS07具备产蛋白酶和纤维素酶能力,其酶活力分别为(0.039±0.002)和(0.393±0.002)U/mg;该菌株可有效抑制温和气单胞菌(Aeromonas sobria)、杀鲑气单胞菌(A.salmonicida)和鲁氏耶尔森氏菌(Yersinia ruckeri)等致病菌。菌株RT-BS07在pH为2~10 LB液体培养基中均可存活;在盐度为2%~8%条件下存活率为5.70%~93.28%,其存活率随盐度升高而降低。体外黏附试验结果表明,菌株RT-BS07可大量黏附在虹鳟前肠黏膜,不破坏肠道组织完整性,对左氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星和链霉素等18种抗菌药物敏感。本研究分离筛选得到的枯草芽孢杆菌RT-BS07株具有产消化酶性能,其抗逆性能强,对虹鳟无毒害作用,可作为虹鳟健康养殖及益生菌制剂研发源益生菌候选株。

一株虹鳟源枯草芽孢杆菌产胞外蛋白发酵条件优化

【目的】为提高虹鳟源枯草芽孢杆菌益生菌候选株RT-BS07胞外蛋白分泌能力,对其发酵条件进行了优化,并对发酵产物抑菌特性进行比较分析。【方法】以不同培养条件下RT-BS07株产胞外蛋白浓度为指标,结合单因素试验和正交试验对其发酵条件进行优化,并测定不同发酵条件下胞外蛋白对嗜水气单胞菌等5种水产养殖过程中常见条件致病菌的抑菌活性。【结果】初始pH值为7.0,盐度3%的LB培养基,33℃下振荡培养36 h,空气浴摇床转速150 r/min为菌株最佳蛋白分泌的发酵条件,在此条件下菌株胞外蛋白浓度可达(22.91±0.91)mg/mL,显著高于常规培养下的(12.74±0.26)mg/mL(盐度1%、初始pH值7.0,摇床转速120 r/min、28℃下培养24 h)。该胞外蛋白对鲁氏耶尔森菌、维氏气单胞菌、嗜水气单胞菌等水产常见条件致病菌具有较好的抑菌效果,抑菌面积分别为(13.87±1.03)mm^(2)、(11.78±0.46)mm^(2)、(7.93±0.21)mm^(2)。【结论】枯草芽孢杆菌RT-BS07株可分泌具有较强抑菌性能的胞外蛋白,并可通过优化发酵条件显著增加蛋白产量。试验结果将为虹鳟养殖过程中常见条件致病菌的生物绿色防治及抗菌制剂的研发应用提供实践数据和理论参考。