基于p38MAPK、AMPK探讨华蟾毒精杀伤人肝癌细胞的机制

目的 研究华蟾毒精对肝癌细胞系SK-Hep1和HepG2细胞凋亡、DNA损伤的影响及作用机制。方法 取对数生长期肝癌细胞,采用不同浓度(5、10、25、50 nmol/L)华蟾毒精,或干扰p38MAPK/AMPK+华蟾毒精(50 nmol/L)处理肝癌细胞,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞毒性,Western blot法检测凋亡标志蛋白PARP、DNA损伤标志蛋白γ-H2AX以及p-p38MAPK、p-AMPK蛋白表达。结果 与对照组比较,华蟾毒精处理后肝癌细胞PARP、γ-H2AX、p-p38MAPK及p-AMPK蛋白表达均呈现剂量和时间依赖性增加(P<0.05),可引起肝癌细胞死亡(P<0.05);下调p38MAPK基因表达后,华蟾毒精诱导的肝癌细胞PARP、γ-H2AX蛋白表达均降低(P<0.05),但p-AMPK蛋白表达升高(P<0.05);下调AMPK基因表达后,华蟾毒精诱导的肝癌细胞PARP、γ-H2AX以及p-p38MAPK蛋白表达均升高(P<0.05),肝癌细胞死亡率增加(P<0.05)。结论 华蟾毒精可同时激活肝癌细胞中p38MAPK和AMPK表达;激活的p38MAPK可促进华蟾毒精诱导的肝癌细胞凋亡和DNA损伤;而激活的AMPK可抑制华蟾毒精诱导的肝癌细胞凋亡和DNA损伤;人肝癌细胞中华蟾毒精激活p38MAPK的力度大于AMPK,最终达到杀伤肿瘤的作用。