载脂蛋白E基因多态性与Alzheimer病和动脉硬化性脑梗死的关系

目的 探讨Alzheimer病 (AD)、动脉硬化性脑梗死 (ACI)患者的载脂蛋白E(apolipoproteinE ,ApoE)基因的分布 ,分析它们的相关性。方法 利用聚合酶链式反应 -限制性片段长度多态性 (polymerasechainreaction -restrictionfragmentlengthpolymorphism ,PCR -RFLP)技术对AD患者、动脉硬化性脑梗死患者和相应健康对照的ApoE基因进行分型。结果 AD患者和ACI患者ApoE等位基因ε4明显高于正常人对照组 ,而ε3则低于正常人对照组。结论 ApoE等位基因中 ,ε4可能为AD和ACI的易患因子 。

卵黄中蝮蛇蛇毒抗体对蝮蛇蛇毒毒性成分的中和作用

目的 :制备特异性高的蝮蛇蛇毒卵黄抗体 ,并对其体内保护和体外保护作用进行了研究。方法 :用蝮蛇蛇毒作为抗原免疫鸡 ,使之在蛋黄中产生抗体IgY ,然后用聚乙二醇法提取IgY ,并通过小鼠体内保护和体外中和试验 ,研究IgY对蝮蛇蛇毒毒性成分的中和作用。结果 :通过本法制得的IgY在体内和体外试验中都能中和蝮蛇蛇毒 ,对蝮蛇蛇毒急性中毒的小鼠有明显的保护作用。结论 :聚乙二醇法从免疫鸡蛋黄中提取的蛇毒抗体IgY 。

基质金属蛋白酶9C1562T基因突变频率的检测

目的:建立一种简便、准确、实用的人基质金属蛋白酶9C1562T基因突变频率的检测方法,并了解汉族人基质金属蛋白酶9C1562T基因的分布特点。方法:115例广东籍汉族人血样本取自2004年9月广州医学院卫生所体检的正常人,应用聚合酶链反应(PCR)特异性扩增人基质金属蛋白酶9C1562T基因序列,扩增产物用限制性内切酶Sph Ⅰ酶切,琼脂糖凝胶电泳后,观察酶切位点的限制性片段长度多态性(RFLP)图谱。结果: 运用PCR-RFLP法检测了115名广东籍汉族人基质金属蛋白酶9基因C1562T点突变,其中野生型纯合子频率为87．83％,杂合子频率为10．43％,突变型纯合子频率为1．74％。突变等位基因频率为0．0694。结论:该方法简便、快速、准确,适合于一般实验室检测及大规模的人群调查,汉族人基质金属蛋白酶9C1562T基因的分布与其他地区人群的分布无明显差异。

中枢神经系统疾病患儿血清和脑脊液髓鞘碱性蛋白的定量分析

目的 探讨小儿中枢神经系统（ＣＮＳ） 疾病脑脊液（ＣＳＦ） 和血清髓鞘碱性蛋白（ ＭＢＰ） 水平的改变及临床意义，寻找反映小儿ＣＮＳ损伤的生化指标。方法 证实为ＣＮＳ疾病的患儿８５ 例，其中男５８ 例，女２７ 例，年龄１ 月～１３ 岁。采用ＥＬＩＳＡ 法对病例血清及部分病例ＣＳＦ标本作ＭＢＰ定量测定。结果 疾病组中ＣＮＳ感染、颅内出血、及颅内占位性病变等病例中ＣＳＦ和血清ＭＢＰ均值都明显高于正常对照组。结论 任何原因导致ＣＮＳ髓鞘结构的破坏时，其ＭＢＰ在ＣＳＦ的水平升高，当血清ＭＢＰ含量也升高时，提示血脑屏障（ＢＢＢ） 破坏，通透性升高。结果显示对ＣＳＦ和血清ＭＢＰ的检测，可作为一项反映ＣＮＳ损伤的生化指标。

微管相关蛋白1B和突触素Ⅰ在FMR1基因敲除小鼠脑组织中的表达及相关性

目的:了解FMR1基因(脆性X智力低下1号基因)敲除小鼠脑组织中微管相关蛋白1B(MAP1B)的改变是否与突触异常有关,MAP1B在脆性X综合征的发病机制中是否通过调节突触数量的改变起作用,以探讨脆性X综合征的发病机制。方法:将小鼠分为成年基因敲除(KO)组、成年野生(WT)组、新生KO组、新生WT组4组,每组10只,用免疫组化法检测MAP1B及突触素Ⅰ(synapsinⅠ,SYN)的分布和表达。用图像分析仪分别对大脑皮质、海马及小脑DAB显色的平均光密度值(MOD)进行采集,分析不同基因型及不同年龄组MAP1B与SYN在各脑区MOD值的差异,以及二者之间的相关性。结果:成年KO组及新生KO组小鼠各个脑区中MAP1B与SYN的改变均无明显相关(P>0.05)。结论:FMR1基因敲除小鼠MAP1B与SYN的表达之间并无显著相关关系,提示MAP1B在脆性X综合征的发病机制中不是通过调节突触数量的改变起作用的。

广东汉族人TNF多态性

采用PCR -RFLP技术对 10 3例广东汉族人TNF多态性进行了检测 ,结果是 :TNFβ 1纯合子表型频率为 0 2 5 2 4,TNFβ 2纯合子表型频率为 0 2 913 ,TNFβ 1/TNFβ 2杂合子表型频率为 0 45 6 3 ,TNFβ 1基因频率 0 480 6 ,TNFβ 1基因频率 0 5 194。本结果与其他人群的结果进行了比较。

基底前脑神经元移植到海马后ChAT、NGFR和NOS的表达变化

为了比较基底前脑神经元移植至海马后胆碱乙酰转移酶、神经生长因子受体和一氧化氮合酶神经元的变化规律。选用雄性 SD大鼠 35只 ,在单侧穹隆海马伞损伤后一周 ,将胚胎基底前脑神经元植入损伤侧海马。在移植术后存活 5 d,7d,14 d,30d,6 0 d,90 d,和 180 d共分为 7个时间组灌注取材 ,进行 Ch AT和 NGFR的免疫组织化学反应及 NOS反应 ,观察其神经元的变化。结果证明 ,Ch AT神经元在移植后 30 d方出现阳性反应 ;NGFR神经元在移植后 7d可见淡染的胞体 ,随后逐渐增强 ;NOS神经元在移植后 7d时呈明显的阳性反应 ,而且数量多。三种神经元直到 180 d时均尚呈阳性反应。提示移植物内 NOS神经元出现早且数量多 ,NGFR神经元出现的也较早 ,Ch AT神经元出现最晚。

蛋氨酸合成酶基因多态性与颅内动脉瘤的关系

目的探讨同型半胱氨酸和蛋氨酸合成酶(MS)A2756G基因多态性与颅内动脉瘤的关系。方法运用多聚酶链反应技术和化学发光法检测76例颅内动脉瘤及77例正常人MS A2756G基因多态性。结果颅内动脉瘤组的MSD919G DG基因型频率较正常对照高(P<0.01),患颅内动脉瘤的风险是对照组的6.35倍。两组等位基因频率差异无统计学意义(P>0 05)。结论 MS D9l9G的DG基因型与颅内动脉瘤明显相关,高同型半胱氨酸血症与颅内动脉瘤病发生有一定关系。

致痫剂马桑内酯引起培养的大鼠皮层神经细胞凋亡

用有致痫作用的马桑内酯处理培养的大鼠皮层神经细胞。以原位ＤＮＡ 断端标记法检测培养神经细胞的凋亡，配以培养液中乳酸脱氢酶的检测，观察马桑内酯对培养皮层神经细胞的毒性作用，并与已知的神经毒剂海人酸作比较。结果显示，马桑内酯可诱导培养大鼠皮层神经细胞凋亡，而引起细胞坏死的作用不如海人酸明显，其对培养大鼠皮层神经细胞的神经毒作用以导致神经细胞凋亡为主。

Ⅰ型电压依赖型钠通道基因突变嵌合体的检测

目的:寻找鉴定Ⅰ型电压依赖型钠通道基因(SCN1A)突变嵌合体的有效方法,降低癫痫伴热性惊厥附加症的再发风险。方法:抽取携带已知突变c.5768A>G/p.Q1923R的患儿及无突变的患儿母亲的外周血全基因组DNA,将患儿的DNA与母亲的DNA以1∶0、1∶1、1∶3、1∶7、1∶15、1∶31及0∶1混合,对包含该突变位点的片段进行PCR扩增后,进行变性高效液相色谱(dHPLC)技术分析、常规测序及焦磷酸测序(pyrosequencing)。结果:常规测序仅能检测出1∶0及1∶1混合样本的突变,而dHPLC及焦磷酸测序均能检测出低至1∶15混合样本的突变,且后者能对突变进行定量。结论:利用dHPLC结合焦磷酸测序的方法能有效快速地检测出低至3%左右的突变,可以避免绝大多数SCN1A基因嵌合突变的漏检。

同型半胱氨酸及蛋氨酸合成酶基因多态性与颅内动脉瘤的关系

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)及其代谢关键酶蛋氨酸合成酶(methionine synthase,MS)基因多态性与颅内动脉瘤的关系。方法采用化学发光技术检测76例颅内动脉瘤患者和77例健康成人的血浆Hcy水平,并利用聚合酶链式反应技术检测其MS基因多态性。结果颅内动脉瘤组血浆Hcy水平为(16.14±6.72)μmol/L高于对照组的(11.20±3.20)μmol/L,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。颅内动脉瘤组的MS D919G DG基因型频率较正常对照高(P<0.01),患颅内动脉瘤的风险是对照组的6.35倍。两组等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05)。MS D919G突变基因型TC、TG、Hcy浓度分组比较结果显示,颅内动脉瘤组不同基因型TG、TC浓度差异无统计学意义(P>0.05),DG基因型Hcy浓度较其他基因型高,差异有统计学意义(P<0.05);颅内动脉瘤组Hcy浓度较对照组高,差异有统计学意义(P<0.05),但两组TG和TC水平差异无统计学意义(P>0.05);对照组不同基因型间TG、TC、Hcy水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论高Hcy血症与颅内动脉瘤病发生有一定关系,MS D919G DG基因型与颅内动脉瘤可能有相关。

同型半胱氨酸及其代谢关键酶MTHFR C677T基因多态性与颅内动脉瘤的关系

目的 探讨同型半胱氨酸（Hcy）及其代谢关键酶N5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）C677T基因多态性与颅内动脉瘤的关系.方法 采用荧光偏振免疫法检测76例颅内动脉瘤患者和77例健康成人的血浆Hcy水平,并利用聚合酶链式反应技术检测其MTHFR C677T基因多态性.结果 颅内动脉瘤组血浆Hcy水平（16.14±6.72）μ mol/L高于对照组（11.20±3.20）μmol/L,两组间的差异有显著性（P〈0.05）.两组MTHFR C677T等位基因频率差异无显著性（P〉0.05）;颅内动脉瘤组MTHFR C677T CT基因型频率明显高于正常对照组（P〈0.01）,患颅内动脉瘤的风险是对照组的2.57倍.CC、CT基因型颅内动脉瘤组患者血浆Hcy水平明显高于对照组（P〈0.01）;颅内动脉瘤组患者CT基因型的血浆Hcy浓度较其它基因型高（P〈0.05）.结论 高Hcy血症与颅内动脉瘤病发生有一定关系,MTHFR CT基因型与颅内动脉瘤明显相关.

广东汉族人低分子量多肽基因的多态性

目的:了解广东汉族人LMP基因的分布特点,并与其它地区人群进行比较。方法:应用聚合酶链反应技术对正常人低分子量多肽基因LMP2和LMP7进行扩增以cfoI进行限制性酶切图谱分析。结果:广东汉族人的LMP2LMP7的基因频率分别是LMP2A0.3200,LMP2B0.6800,LMP7A0.4166,LMP7B0.5834。结论:广东汉族人LMP基因的分布与其它地区人群的分布有不同。

广东汉族人甲基四氢叶酸还原酶基因的多态性

目的 了解广东汉族人甲基四氢叶酸还原酶 (MTHFR)基因的分布特点 ,并与其它地区人群进行比较。方法 应用聚合酶链反应技术对正常人甲基四氢叶酸还原酶 (MTHFR)基因进行扩增以HinfI进行限制性酶切图谱分析。结果 广东汉族人MTHFR基因中 ,表现型T/T频率是 3% ,表现型T/C是 36 5 % ,表现型C/C是 6 0 5 %。MTHFR基因T频率是 0 196 ,基因C频率是 0 80 4。结论 广东汉族人MTHFR基因的分布与其它地区及人种有不同。

婴儿颅内出血与髓鞘碱性蛋白的关系

目的：检测颅内出血患儿脑脊液和血清髓鞘碱性蛋白（ＭＢＰ）的含量，探讨本病脑损害和ＭＢＰ含量变化的关系。方法：采用简易 ＭＢＰ ＥＬＩＳＡ法对３８例脑实质（或伴腔室）出血及腔室内（硬膜下腔、蛛网膜下腔、脑室）出血患儿脑脊液和血清标本作 ＭＢＰ定量测定，与对照组比较，并于治疗 ４－５周后复查对比。结果：两出血组脑脊液和血清 ＭＢＰ的含量明显高于对照组（Ｐ均＜０．０１），有脑实质出血组脑脊液和血清 ＭＢＰ含量亦高于腔室内出血组（Ｐ＜０．０１），治疗后ＭＢ Ｐ含量未见下降。结论：脑脊液和血清ＭＢＰ定量测定作为生化方面的指标丰富了本病诊断的实验室检查内容，有助于本病的预后评估。

人CYP3A4第9外显子基因突变频率的检测

目的建立一种简便、准确、实用的人CYP3A4第9外显子基因突变频率的检测方法,并了解汉族人CYP3A4第9外显子的分布特点.方法应用聚合酶链反应(PCR)特异性扩增人CYP3A4第9外显子基因序列,扩增产物用限制性内切酶HinfⅠ酶切,琼脂糖凝胶电泳后,观察酶切位点的限制性片段长度多态性(RFLP)图谱.结果运用PCR-RFLP法检测了92名汉族人CYP3A4第9外显子基因点突变,其中野生型纯合子频率为85.9%,杂合子频率为14.1%,突变型纯合子频率为0.突变等位基因频率为0.0706.结论该方法简便、快速、准确,适合于一般实验室检测及大规模的人群调查,汉族人CYP3A4第9外显子也存在相同的突变位点.

突触素在FMR1基因敲除小鼠脑组织中的表达

目的:了解FMR1基因敲除小鼠脑组织中突触素Ⅰ(SYN)表达的改变,以探讨脆性X综合征的发病机制。方法:将40只小鼠按基因型及年龄组的不同分为:1周龄基因敲除型组(KO1W组)、1周龄野生型组(WT1W组)、6周龄基因敲除型组(KO6W组)、6周龄野生型组(WT6W组)4组,每组10只。取小鼠脑组织用免疫组织化学法检测SYN的分布和表达。用图象分析仪采集各脑区的平均光密度值(MOD),分析不同基因型及不同年龄组SYN在各脑区MOD值的差异。结果:按基因型分析,KO型小鼠大脑皮质SYN的表达均较WT型小鼠显著降低(P<0.01);但在苔藓纤维层,新生KO小鼠SYN的表达较其WT型显著增高(P<0.01)。按年龄组分析,KO1W组小鼠中的SYN在各脑区的表达较KO6W高(P<0.05),在大脑皮质及苔藓纤维层(P<0.01)处比在CA1区(P<0.05)更明显;WT1W组SYN的表达在皮质及CA1区高于WT6W组(P<0.01),但在苔藓纤维层却比WT6W组低(P<0.01)。结论:FMR1基因敲除小鼠大脑皮质突触数量减少而新生期海马苔藓纤维层突触数量异常增多,可能与患者智能低下、神经兴奋性增高有关。

小儿全身性癫痫与髓鞘碱性蛋白关系的研究

目的 通过检测脑脊液 (CSF)和血清髓鞘碱性蛋白 (MBP)的含量 ,了解小儿全身性癫痫是否引致髓鞘和血脑屏障(BBB)的破坏。 方法 采用简易MBPELISA法对 47例小儿全身性癫痫病患儿脑脊液和血清标本作MBP定量测定。 结果 在一个月内有全身性癫痫发作的患儿其CSF和血清MBP含量均值明显高于正常对照组 (P <0 0 1)。 结论 小儿全身性癫痫发作可导致CSF和血清MBP升高 ,提示大脑器质性损伤和BBB的破坏。MBP含量的检测可作为全身性癫痫预后评估的一项生化指标。

HLA—B27抗血清对强直性脊柱炎的诊断价值

75例确诊或怀疑为强直性脊柱炎(AS)的病人,HLA-B27的检出率为90.6%,120例健康人的检出率为0.8%,两者差异性极为显著,P<0.001.75例中15例具有家族史,占20%,又通过两个 AS 家系 HLA-B27的检测分析,都进一步说明 B27与该病的高度相关性和遗传性。75例中24例原来怀疑为AS,经测 B27为阳性者17例,再结合临床资料,最后确诊为 AS。说明 B27的检测是AS 早期诊断的一项有价值指标。9例葡萄膜炎病人中5例检出 HLA-B27,阳性率为55.5%,与北京张晓艳的报告近似。

人胎肾上腺髓质细胞的原代培养

人胎肾上腺髓质经胶原酶消化分离后,用Percoll液密度梯度离心,可获得纯度为75％～85％的肾上腺髓质细胞。将髓质细胞接种到铺有胶原的培养板上,培养2～7d后,髓质细胞胞体增大,长出突起,胞浆含有颗粒。用特异性儿茶酚胺诱发荧光技术,进一步确定培养的肾上腺髓质细胞的性质,并用高效液相色谱仪测定培养液中单胺类物质的含量。对培养过程中的某些技术问题进行了讨论。