基于网络药理学、分子对接及实验验证探讨当归挥发油改善血管性痴呆的作用机制

目的基于网络药理学、分子对接及实验验证探讨当归挥发油(Volatile oil of Angelica Sinensis Radix,VOASR)改善血管性痴呆(Vascular dementia,VaD)的作用机制。方法(1)采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)法对VOASR的主要化学成分进行分析鉴定,确定百分含量排前5位的化合物。通过Swiss Target Prediction数据库筛选出VOASR 5个主要化学成分的作用靶点,通过OMIM、GeneCards、Drugbank数据库收集VaD疾病相关靶点。对VOASR主要化学成分的作用靶点与VaD疾病相关靶点取交集,得到二者共同靶点即为VOASR干预VaD的潜在作用靶点。运用STRING数据库对交集靶点构建蛋白相互作用(PPI)网络,并分析判断关键靶点。使用R语言的Bioconductor软件包对共同靶点进行GO功能富集分析及KEGG通路富集分析,并使用Cytoscape 3.7.2软件构建VOASR干预VaD的“药物-成分-疾病-靶点-通路”网络。采用AutoDock Vina软件进行分子对接,分析5个主要化学成分与关键靶点蛋白的结合能力,进一步筛选出VOASR治疗VaD的核心靶点。(2)体内实验:将C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、VOASR组(105 mg·kg^(-1)),每组6只。采用单侧颈总动脉结扎术(UCCAO)构建VaD小鼠模型;术后灌胃给药(10 mL·kg^(-1)),每日1次,持续3周。采用Morris水迷宫实验评估VaD小鼠的认知功能;采用免疫组织化学法及Western Blot法检测小鼠海马组织中多巴胺受体D2(DRD2)、单胺氧化酶A(MAOA)蛋白表达情况。结果(1)VOASR中相对百分含量排前5位的核心化学成分分别为(E)-Ligustilide(E-藁本内酯)、Z-Butylidenephthalide(Z-正丁烯基苯酞)、Senkyunolide H(洋川芎内酯H)、Spathulenol(桉油烯醇)、3-Butylphthalide[3-丁基-1(3H)-异苯并呋喃酮],占总含量的97.32%。共筛选得到VOASR中5个主要化学成分的作用靶点92个,VaD疾病相关靶点1181个,得到共同靶点(交集靶点)31个。分析得到VOASR治疗VaD的关键靶点包括VEGFA、PTGS2、ICAM1、VCAM1、F2、FGF2、CCR5、PIK3R1、MAPK14、MPO、SELE、DRD2、MAOA、ADRA1A、ELANE。VOASR治疗VaD的潜在作用靶点与脂多糖的反应、神经递质水平的调节、突触传递、多巴胺能等生物学过程有关,主要涉及多巴胺能突触、钙离子信号通路、神经活性配体-受体相互作用、MAPK信号通路、NF-κB信号通路等。分子对接结果显示,E-藁本内酯-DRD2、洋川芎内酯H-MAOA的结合能力最优。(2)与假手术组比较,模型组小鼠的逃避潜伏期明显延长(P<0.05,P<0.01),穿越平台次数显著减少(P<0.001);小鼠海马区中的MAOA、DRD2阳性表达显著上调(P<0.01,P<0.001),MAOA、DRD2蛋白表达水平明显上升(P<0.05)。与模型组比较,VOASR组小鼠的逃避潜伏期明显缩短(P<0.05,P<0.01),穿越平台次数显著增加(P<0.001);小鼠海马区中的MAOA、DRD2阳性表达明显下调(P<0.05,P<0.01),MAOA、DRD2蛋白表达水平明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论VOASR可以有效改善VaD小鼠的认知功能,可能是通过E-藁本内酯、洋川芎内酯H等核心化学成分,作用于DRD2、MAOA等关键靶点,通过多巴胺能突触、钙离子信号通路、MAPK信号通路等多条信号通路来实现的,具有多成分、多靶点、多通路的特点。

《伤寒论》“心中懊憹”的病位应当是胃

目的:探讨《伤寒论》条文中所描述"心中懊憹"之症的病位究竟在何处。方法:从《内经》原文、《伤寒论》76条"心中懊憹"上下文以及其他出现"心中懊憹"的条文进行分析论证。结果:每一论据均说明"心中懊憹"的病位在胃。结论:《伤寒论》所述"心中懊憹"一症的病位可能是胃而非胸膈。