毛细管电泳法检测五种有机酸分析方法的探讨

目的利用毛细管电泳法对丁酸、醋酸、乳酸、丙酸、甲酸进行分离，研究了最佳的分离条件，建立了用毛细管电泳检测丁酸等有机酸的分析方法。方法采用UV-214nm检测波长，10mmol／L（含0．5mmol／LCTAB）的硼砂作为缓冲溶液，在pH为10．5，分离电压20KV，进样压力为1．0psi，进样时间为10s时。结果5min内丁酸、醋酸、乳酸、丙酸、甲酸得到基线分离。以有机酸标准品的保留时间定性，以有机酸标准品吸收峰的峰面积定量．绘制标准工作曲线，线性范围分别为：甲酸3．8-30．7mg／L；乙酸3．3-52．5mg／L；丙酸3．1～49．5mg／L；T酸3-48mg／L；乳酯7．5～605mg／L。结论该方法简单、快速、准确，可用于有机酸含量的测定。

活的非可培养状态副溶血性弧菌实时荧光逆转录PCR检测方法的建立及其毒力研究

目的建立检测活的非可培养(VBNC)状态副溶血性弧菌的荧光逆转录PCR方法并研究其毒力基因表达。方法将副溶血性弧菌AS079菌株添加到陈化海水中,4℃冰箱内培养,使其进入VBNC状态,针对其管家基因、鉴定基因和毒力基因分别设计实时荧光逆转录PCR引物,通过不同的PCR反应程序和引物浓度组合试验,摸索最佳反应体系条件,用于VBNC状态副溶血性弧菌的检测和毒力研究。结果用所建立的检测VBNC状态副溶血性弧菌的实时荧光逆转录PCR方法,对接种于陈化海水培养的不同时期的AS079副溶血性弧菌进行荧光定量逆转录PCR扩增,结果显示,随着培养时间的延长,毒力基因tdh2和鉴定基因toxR表达水平持续下降,但即使细菌进入VBNC状态,这两个基因也能够得到很好的扩增,说明以toxR基因和tdh2基因对进入VBNC状态的副溶血性弧菌进行检测和毒力研究方法可行。灵敏度试验表明,鉴定基因toxR的最低检测限可达到48 cfu/ml,研究毒力基因tdh2的表达需要细菌浓度至少为4.8×102cfu/ml,同时试验证明此方法与其他相近食源性致病菌无交叉反应。结论该实时荧光逆转录PCR方法检测快速、特异性强、敏感度高,适用于VBNC状态副溶血性弧菌的检测和毒力分析。

用DiversiLab系统对食品中分离的金黄色葡萄球菌进行分型溯源研究

目的:对分离自食品样本中的44株金黄色葡萄球菌进行DiversiLab分型,研究其基因特征和聚类分布,为食源性疾病溯源及预警提供依据。方法:采用DiversiLab自动分型系统扩增广泛分布于金黄色葡萄球菌基因组中的重复序列,并在Agilent2100自动生物分析仪上对扩增产物进行微流体电泳分离,然后使用DiversiLabSoftware软件实时分析和处理数据,对44株金黄色葡萄球菌进行分子分型。结果:DiversiLab分型系统将44株金黄色葡萄球菌分为26个型别,其中P1型包含菌株n76、n78和n71;P2型包含z78、z60和g75菌株;P3型包含菌株n61、z77、g31;P4型包含菌株0868和10786;P5型包含菌株6’-3600和13-3462;菌株1167、11219和z12属于P6型;菌株n73和n75属于P7型;菌株1151和11059为P8型;菌株3-1154和0979为P9型;菌株11-2063和6-1310为P10型;P11型包含菌株z67、z63、z64、z61和z36;其余15株金黄色葡萄球菌的每一个菌株被分为一个单独的型别。结论:DiversiLab分型结果准确揭示了44株来自食品的金黄色葡萄球菌的遗传特征和亲缘关系;Diversilab自动化分型技术方便快捷、结果可靠,是监测分析食源性致病菌和对食源性疾病溯源及预警的有力工具。