消瘤藤总香豆素诱导结直肠癌细胞铁死亡的作用研究

为探究广西传统瑶药消瘤藤总香豆素(Total Coumarins from Pileostegia tomentella,TCPT)诱导人结直肠癌(Colorectal Cancer,CRC)HT-29细胞铁死亡的作用及其机制,本研究采用不同浓度TCPT处理人结直肠癌HT-29细胞,利用细胞增殖活性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)结合流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)检测细胞活性的变化情况,采用透射电子显微镜观察细胞线粒体的形态变化,利用二氯荧光素(DCFH-DA)染料探针法检测细胞内铁依赖性活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)含量的变化,利用特异性荧光探针BODIPY 581/589 C11检测细胞内脂质过氧化物含量,利用蛋白质印记(Western blotting)检测铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(Glutathione Peroxidase 4,GPX4)、胱氨酸-谷氨酸反向转运体亚基(Cysteine-glutamate antiporter subunit,xCT)、核受体共激活因子4(Nuclear receptor Coactivator 4,NCOA4)和二价金属离子转运体(Divalent Metal Transporter 1,DMT1)的表达水平。结果表明:人结直肠癌HT-29细胞经TCPT处理后,细胞活力呈浓度依赖性下降,细胞线粒体出现细胞质骤减、嵴塌陷、“同心圆”等典型的铁死亡形态特征,细胞内的ROS和脂质过氧化物水平呈剂量依赖性显著升高。HT-29细胞铁死亡标志蛋白GPX4、xCT的表达水平下调,而NCOA4、DMT1的表达水平上调。综上所述,消瘤藤总香豆素可使细胞内ROS和脂质过氧化物水平明显升高,从而诱导结直肠癌HT-29细胞铁死亡,这可能是其抗结直肠癌的作用机制之一。

妇康净片质量标准的建立

目的:建立测定妇康净片的质量标准。方法:采用薄层色谱法对处方中的苍术、当归和川芎进行鉴别;采用高效液相色谱法测定白芍芍药苷的含量。结果:薄层色谱斑点清晰,重复性好;芍药苷平均回收率为99.26%,RSD为1.14%(n=6)。结论:所建立的方法简便可靠,重复性好。为妇康净片的质量控制和评价提供了依据。

HPLC法测定双金痛立停胶囊中芍药苷的含量

目的建立双金痛立停胶囊中芍药苷的含量测定方法。方法采用高效液相色谱（HPLC）法,使用Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85）为流动相,检测波长为230 nm。结果芍药苷进样量在0.163~1.630μg范围内线性关系良好,相关系数为r=0.9999,平均回收率为98.71%,RSD=0.54%。结论本法简便、准确、重复性好,可用于双金痛立停胶囊的质量控制。

双金痛立停胶囊对骨癌痛大鼠炎症因子表达及骨代谢的影响

目的观察双金痛立停胶囊对骨癌痛大鼠炎症因子表达及骨代谢的影响。方法采用Walker 256乳腺癌细胞复制胫骨癌痛大鼠模型,选取模型复制成功的大鼠随机分为模型组、双金痛立停胶囊组,另设假手术组。从术后第13天开始灌胃给药,每天1次,共10 d。末次给药后腹主动脉采血,运用酶联免疫法(ELISA)检测血前列腺素E_2(PGE_2)、白细胞介素6(IL-6)、Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(ICTP)的含量。结果与模型组比较,双金痛立停胶囊可明显降低骨癌痛大鼠血浆前列腺素E_2、白细胞介素6和血清Ⅰ型胶原交联羧基末端肽的含量(P<0.05或P<0.01)。结论双金痛立停胶囊缓解大鼠骨癌痛可能与抑制炎症因子表达、抑制骨吸收调节骨代谢平衡有关。

金花解毒颗粒质量标准研究

目的:建立金花解毒颗粒的质量标准。方法:用薄层色谱法鉴别处方中的大黄、甘草;采用高效液相色谱法测定方中金银花的绿原酸的含量。结果:薄层色谱法可检出方中含有大黄和甘草,薄层色谱斑点清晰,重现性好。HPLC测定绿原酸的含量在0.0804～2.0100μg范围内线性良好,平均加样回收率为99.27%,RSD=1.05%。结论:所建立的薄层鉴别和含量测定方法专属性强、重现性好,可用于金花解毒颗粒的质量控制。

六堡茶对小鼠免疫功能的影响

目的:观察六堡茶对小鼠免疫功能的影响。方法:采用正常小鼠免疫器官测定法、碳粒廓清法和自然杀伤(natural killer,NK)细胞活性测定。结果:六堡茶可明显增加小鼠单核—巨噬细胞的吞噬指数、提高NK细胞活性,但对小鼠的胸腺、脾脏指数无明显影响。结论:六堡茶具有增强小鼠非特异性免疫功能的作用。

金鸡胶囊的遗传毒性研究

目的:探讨金鸡胶囊是否具有抗突变效应。方法:采用Ames试验及小鼠精子畸形试验评价不同浓度的金鸡胶囊的抗突变作用。结果:加否S-9代谢活化系统,金鸡胶囊干膏粉的TA97、TA98、TA100、TA102 4种试验菌株的回变菌落数未见明显增加,受试物金鸡胶囊干膏粉诱变试验结果为阴性;金鸡胶囊对小鼠精子无致畸作用。结论:在本实验条件下,金鸡胶囊具有明显的抗突变活性。

HPLC法测定前列康胶囊中大黄素的含量

目的:建立测定前列康胶囊中大黄素含量测定的方法,为制剂质量控制提供依据标准。方法:采用高效液相色谱法(HPLC),选用HYPERSIL ODS(250mm×4.6mm)柱;甲醇:0.1%磷酸(85:15)为流动相,流速1.0mL.min-1,检测波长为254nm,柱温:室温。结果:大黄素的进样量在0.04734-0.9468μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9999),平均加样回收率为99.3%,RSD为1.05%(n=6)。结论:本方法快速、准确、重复性好,可作为前列康胶囊质量控制。

舒胸滴丸提取纯化工艺的研究

目的：研究舒胸滴丸提取纯化工艺。方法：分别以人参皂苷Rg。提取率和阿魏酸含量为考察指标，采用正交试验法对三七提取工艺及川芎等药材的醇沉工艺进行优化。结果：三七提取以加10倍量75％乙醇，回流提取2次，每次2h为最佳工艺；川芎等药材的醇沉以水提液浓缩至相对密度为1．00-1．10（60℃），加乙醇使含醇量达60％，静置24h为最佳工艺。结论：研究结果为舒胸滴丸的规模生产提供参考。

儿童咳糖浆质量标准研究

目的:建立儿童咳糖浆的质量标准。方法:采用薄层色谱法鉴别儿童咳糖浆中的前胡和甘草;采用高效液相色谱法测定该制剂中盐酸麻黄碱的含量。结果:薄层色谱法可检出前胡和甘草;高效液相色谱法测定盐酸麻黄碱的含量,线性关系良好,平均加样回收率为99.70%,RSD=1.87%。结论:所建立的质量标准简便易行,可用于儿童咳糖浆的质量控制。

银胡感冒海绵剂主要药效学实验研究

目的观察银胡感冒海绵剂的抗菌、抗病毒、免疫、镇咳作用。方法采用鸡胚内抗病毒法,体外和体内抗菌法,小鼠氨水引咳法,迟发型超敏反应测定法。结果银胡感冒海绵剂对甲型人流感病毒具有抑制作用,对乙型溶血性链球菌、金葡球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希氏菌、褔氏志贺氏菌等菌具有不同程度的抑菌作用,显著延长金葡球菌感染小鼠的存活时间,显著抑制小鼠迟发型超敏反应,显著延长氨水所致小鼠咳嗽潜伏期和显著降低咳嗽次数。结论银胡感冒海绵剂具有抗病毒、抗菌、提高免疫力和止咳作用。

疏血通脉胶囊定性定量方法研究

目的建立疏血通脉胶囊定性定量研究方法。方法采用TLC法对制剂中的薤白、瓜蒌皮、冰片进行鉴别,采用HPLC法,对制剂中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1进行含量测定。结果 TLC法可检出薤白、瓜蒌皮、冰片。人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的线性范围分别为0.102～1.020、0.095～0.950和0.035～0.350 mg·mL-1（r=0.999 9）,平均回收率分别为98.9%、99.6%和100.4%,RSD分别为2.0%、1.7%和1.7%（n=6）。结论该方法操作简单可靠,专属性强,可用于控制疏血通脉胶囊的质量。

穿心莲提取物质量控制方法研究

目的建立穿心莲提取物的质量控制方法,以便更有效地控制穿心莲提取物的质量。方法采用薄层色谱法鉴别穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯;采用高效液相色谱法测定穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量。结果在薄层色谱中可同时检测出穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯;穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量可用高效液相色谱法同时测定,穿心莲内酯线性范围为0.045 8~0.687 0μg（r=0.999 9）,平均加样回收率为100.4%,RSD为1.67%（n=6）;脱水穿心莲内酯线性范围为0.292 4~2.924μg（r=0.999 8）,平均加样回收率为99.4%,RSD为1.68%（n=6）。结论所建立的定性定量方法简便,结果准确,可用于穿心莲提取物的质量控制。

通微消痔颗粒的药效学作用

目的研究通微消痔颗粒的药效学作用。方法(1)采用试管内稀释法观察通微消痔颗粒对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的体外抑菌作用。(2)通过巴豆油致小鼠耳郭肿胀实验、鸡蛋清致大鼠足趾肿胀,建立巴豆油致大鼠肛门肿胀模型,并检测血清白细胞介素6(IL-6)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,观察通微消痔颗粒的抗炎作用。(3)通过热板实验和扭体实验,观察通微消痔颗粒的镇痛作用。(4)通过玻片法凝血功能评估实验、剪尾法出血时间评估实验,观察通微消痔颗粒的止血作用。结果(1)通微消痔颗粒对5种菌株均具有体外抗菌作用,其中对白色念珠菌的抗菌效果最好。(2)通微消痔颗粒可抑制巴豆油所致小鼠耳郭肿胀(肿胀抑制率为7.24%~19.00%),可减轻大鼠足趾肿胀度,降低直肠肛门系数、血清IL-6及TNF-α水平(均P<0.05)。(3)通微消痔颗粒可提高小鼠痛阈值,减少小鼠扭体次数,但与正常小鼠相比差异无统计学意义(P>0.05)。(4)通微消痔颗粒可缩短小鼠出血时间(P<0.05)和凝血时间。结论通微消痔颗粒具有抗菌、消炎、镇痛、止血、改善小肠运动的功能,对痔疮有很好的治疗作用。

藤三七总黄酮的分离纯化研究

目的优选藤三七总黄酮的分离纯化工艺。方法采用正交试验优选聚酰胺树脂分离纯化藤三七总黄酮的工艺。结果聚酰胺树脂（30～60目）分离纯化藤三七总黄酮的最佳工艺为，上样液浓度为0．1g（药材）／mL，上样流速为1BV／h，径高比1：12，上样药材量（g）与树脂（mL）的比例为0．1：1；洗脱剂乙醇浓度为50％，洗脱剂用量为10BV，洗脱流速为2BV／h。分离纯化后藤三七总黄酮含量可达50％以上。结论优化后的纯化工艺合理可行，可较好地分离纯化藤三七总黄酮。

五松肿痛酊提高质量标准研究

目的:对五松肿痛酊的质量标准进行修订提高。方法:采用TLC法对制剂中的买麻藤、红花、土木香、五味藤、干姜进行定性鉴别,采用HPLC法对制剂中的氯化两面针碱进行含量测定。结果:TLC法可检出买麻藤、红花、土木香、五味藤、干姜,氯化两面针碱在0.098-1.225μg范围内线性关系良好,相关系数r=0.9999,平均回收率为98.67%。(RSD%=1.32%)。结论:本法简便,快速,重复性好,可作为本品的质量控制指标。

跌打生骨颗粒治疗外伤性骨折100例疗效观察

目的:观察跌打生骨颗粒治疗外伤性骨折的临床疗效。方法:将150例骨折患者随机分为治疗组100例与对照组50例,治疗组予口服跌打生骨颗粒治疗,对照组予口服伤科接骨片治疗,分析2组的临床疗效。结果:治疗组和对照组临床总疗效比较,经统计学处理,2组无显著性差异;临床症状疗效结果表明,治疗组肿痛减轻、消失时间较对照组明显减少,平均3天以上,有显著性差异(P<0.05)。结论:跌打生骨颗粒是治疗外伤性骨折较好的中药制剂,具有快速消肿止痛、活血祛瘀、促进骨折愈合的功效,值得更进一步推广。

五叶泡质量标准研究

目的:建立五叶泡的质量标准。方法:对五叶泡药材进行显微鉴别和TLC鉴别,对总灰分、水分、浸出物进行检查,采用HPLC法,使用C18色谱柱,以甲醇—0.05%磷酸(5∶95)为流动相,以272 nm为检测波长测定没食子酸的含量。结果:确定了五叶泡的显微特征,建立了TLC鉴别方法;水分限度为≤13%,总灰分限度为≤6.0%;醇溶性浸出物限度为≥10%;建立了没食子酸的含量测定方法。结论:建立的方法简便、准确、重现性好,可有效控制五叶泡药材的质量。

藤三七对高脂血症模型大鼠的降血脂作用

目的:研究藤三七对高脂血症模型大鼠的降血脂作用。方法:采用高脂饲料喂养建立高脂血症大鼠模型,同时以低、中、高三个剂量藤三七灌胃,连续30 d,测定大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量。结果:与模型组比较,藤三七中、高剂量组TC、TG明显降低(P<0.05或P<0.01),藤三七高剂量组HDL-C明显升高(P<0.05);藤三七中、高剂量组MDA含量明显降低(P<0.05),藤三七高剂量组SOD含量明显升高(P<0.05)。结论:藤三七对高脂血症大鼠具有降血脂作用,其作用机制可能与其提高机体抗氧化能力、减少脂质过氧化产物有关。

丹皮酚缓释片的制备工艺研究

目的制备丹皮酚缓释片并对影响体外释药的因素进行考察。方法采用正交设计法筛选处方;以羟丙甲基纤维素为骨架材料,采用湿法制粒工艺,制备丹皮酚缓释片;并对HPMC规格、稀释剂种类等影响释药的因素进行考察。结果丹皮酚缓释片的体外释药行为符合Higuchi方程,HPMC的规格对药物的释放影响最大。结论采用HPMC作为骨架材料,结合适当的辅料,可制备丹皮酚缓释片。